无角陶赛特羊冻精制作技术

对无角陶赛特种公羊 (n =10 )精液品质、精液保存稀释液和冷冻精液制作技术进行了研究。结果表明 :精液密度为 2 0 .0 3± 0 .2 5亿个 /ml,活率 (冻前为 0 .80± 0 .0 6 ,冻后为 0 .5 1± 0 .0 1) ,畸形率 (冻前为 10 .1± 1.0 3,冻后为 2 9.6±0 .3) ,死精子百分率为 14 .1± 7.1;冻精的平均菌落数小于 5 0 0个 /剂。从 3种精液稀释液中选出了一种最佳稀释液 (三羟基氨基甲烷 卵黄 葡萄糖 柠檬酸 ) ;从 3种冷冻保护剂中筛选出甘油为理想的抗冻保护剂 ,其最佳浓度为 4 %～ 6 %。     

猪精液4℃低温保存技术的研究

以精子总存活时间、有效存活时间及存活指数为检测指标,用6种稀释液稀释后4℃低温保存,从中筛选效果最好的基础稀释液配方,并进一步探讨保存前不同精液处理方法在猪精液4℃低温保存的效果;最后用筛选得出的基础稀释液和精液处理方法稀释猪精液,4℃低温保存2~3 d,用于低剂量常规部位人工授精试验,通过受胎率来探讨其繁殖潜力。结果表明:6号稀释液显著优于其他5种稀释液(P0.05);精液带精浆直接稀释的效果优于精液离心处理(P0.05);精液以1:2或1:3比例稀释更利于猪精液4℃低温保存(P0.05);低温保存猪精液低剂量常规部位人工授精是可行的。总之,通过试验得到了猪精液低温保存基础稀释液配方及保存前处理方法,该方法适合于低剂量常规部位的人工授精。     

波尔山羊冷冻精液稀释液及稀释倍数研究

通过研究波尔山羊冷冻精液稀释液和稀释倍数,以筛选最佳稀释液配方、确定适宜的稀释倍数、提高波尔山羊精液冷冻效果。结果表明,4号稀释液解冻后精子活率高于1号、2号、3号稀释液解冻后精子的活率,差异极显著( P<0 .0 1 ) ;4号稀释液解冻后精子存活时间为61 .2 6h,长于1号、2号稀释液精子存活时间( P<0 .0 1 ) ,短于3号稀释液精子存活时间,但差异不显著( P>0 .0 5 ) ,说明4号稀释液冷冻效果最好。精液稀释3倍、4倍、5倍解冻后精子活率分别为0 .5 0 2、0 .5 0 1、0 .495 ( P>0 .0 5 ) ,均高于稀释6倍、7倍、8倍的精子活率( P<0 .0 1 ) ,表明波尔山羊冷冻精液稀释倍数以3～5倍为宜。     

不同常温保存稀释液对猪精液保存效果的影响

本研究利用3种不同的常温保存稀释液对猪精液进行常温保存,测定了精子活率、有效存活时间、生存指数、pH值以及总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)活性。结果表明:3号稀释液稀释后精子活率在第3天和第5天均显著高于其他2种稀释液(P<0.05);精子有效存活时间和生存指数显著高于2号稀释液(P<0.05);pH值在精液稀释后的第4天显著高于2号稀释液(P<0.05)。精子T-AOC在第3天和第4天显著高于1号稀释液(P<0.05),但与2号稀释液差异不显著(P>0.05);3种稀释液之间精子MDA变化差异不显著(P>0.05)。因此,3号稀释液对精子的保存效果最好,有利于猪精液的常温保存。     

鸡精液稀释液的筛选及优化

本文选购了4款经典的商品化公鸡精液稀释液A、B、C、D,以28周龄左右的天山草鸡商品代种鸡为研究对象,分别测定4种精液稀释液对精液质量的影响。结果显示,不同稀释液对精子活力的影响较大（P<0.01）,D款精液稀释液相比效果最好。通过比较温度、时间、稀释倍数、浓度对鸡精子活力、受精率的影响,从而为D款精液稀释液的使用提供合理参数。结果显示：原精、1:1、1:2和1:3稀释后进行人工授精,受精率无明显差异;按1:1稀释,40℃水浴保存下,可延长授精作业时间至1.5 h。研究结果为该地区种鸡人工授精技术提供了参考依据。     

稀释液和稀释比例对番鸭精子活率、质膜完整率和受精率的影响

实验旨在研究稀释液和稀释比例对番鸭精液质量的影响,从而筛选适合番鸭精液常温保存和人工授精的最佳稀释液。选择40周龄的黑羽公番鸭8羽和1 080羽产蛋期黑羽母番鸭,采集8羽公鸭精液等量分为4组,NO-1稀释液组(单糖1.000 g),NO-2稀释液组(单糖0.500 g),BJJX稀释液组(单糖1.400 g),以生理盐水为对照组;精液和稀释液按体积比分别为2:1、1:1、1:2稀释,17℃恒温保存,每隔8 h检测1次精子活率和质膜完整率。在人工授精实验中,将8羽黑羽公番鸭的新鲜精液混合分成4等份,以NO-1、N0-2、BJJX、生理盐水分别以精液:稀释液体积比1:1比例稀释,以生理盐水为对照组,稀释后对黑羽产蛋母番鸭进行人工授精,统计受精率,人工授精实验持续3个月左右。结果表明:在精液保存后期(32 h),精液:稀释液体积比1:1和1:2时的精子活率高于2:1;各组的质膜完整性随保存时间的延长而降低;当精液∶稀释液体积比为2:1时,NO-1组在保存后期的精子活率高于其他组;人工授精实验中,实验组的受精率极显著优于对照组。综上,在贮存期间,当NO-1稀释液以1:1的比例对精液进行稀释时精子质量和受精率最高。     

奶山羊精液冷冻稀释液配方筛选

为了筛选适合我区生产上使用的奶山羊冷冻精液稀释液配方,设计5个奶山羊冷冻精液稀释液配方,渗透压1 070～1 720 mmol/kg,pH值5.97～6.99,挑选5只健康成年种公羊,调教采精、制冻。结果显示:1号配方与对照组(5号配方)的保护效果存在一定差异,但差异不显著(P>0.05);2号配方和4号配方与对照组存在显著差异(P<0.05);3号配方与对照组存在极显著差异(P<0.01)。2号、3号和4号3种配方的稀释液对奶山羊精液冷冻后的保护效果都较好,可以在生产上推广使用。     

不同稀释液对绵羊精液4℃保存效果的影响

本实验旨在比较研究3种不同组成成分的绵羊精液低温稀释液对绵羊精子4℃保存效果的影响,3种稀释液分别是以三羟甲基氨基甲烷（Tris）-卵黄-柠檬酸-葡萄糖为基础配方的稀释液1、以脱脂奶粉-大豆卵磷脂-果糖为基础配方的稀释液2和以Tris-卵黄–柠檬酸-果糖为基础配方的稀释液3。通过假阴道方法采集健康成年绵羊精液,用3种不同稀释液按照精液:稀释液=1:8的比例稀释后在4℃环境进行保存,分别在0、24、72、120 h和168 h后检测分析精子活力、运动参数、顶体完整性、线粒体膜完整性、精子总抗氧化能力（T-AOC）、超氧化物歧化酶（SOD）和细胞丙二醛（MDA）浓度。结果表明：精液保存168 h时,稀释液3组的保存效果最好,其总运动精子比例为54.91%、前向运动精子比例为43.27%、快速运动精子比例为19.73%、线粒体完整性为68.03%,均高于稀释液1和稀释液2组（P<0.05）;稀释液3组的顶体完整率为60.55%,高于稀释液2组（P<0.05）。保存120 h时,稀释液3组T-AOC为0.76 mmol/mg prot,高于稀释液2组（P<0.05）;稀释液3...     

精液稀释比和输精时间对种蛋受精率的影响

采用1500只健康的海兰白种鸡,随机分为4组。试验1分别用稀释液对原精液按1:1、1:1.5、1:2稀释和原精液进行人工授精,结果1、2、3组之间受精率无显著差异(P0.05)但与原精液对照组(4组)显著差异(P0.05);试验2分别于下午3:00～3:30、3:30～4:00、4:00～4:30和4:30～5:00进行输精,结果3、4组种蛋受精率显著高于1、2组(P0.05),1、2组之间及3、4组之间无显著差异(P0.05)。     

稀释液渗透压与pH值对黑凤鸡精液低温保存活力的影响

为推广鸡精液稀释技术,对黑凤鸡精液稀释液pH值与渗透压进行优化。YHFB液的渗透压调整为340、294、261mOsm/kg,按1:2对原精稀释;pH值调整为7.38、7.29、7.11,按1:1对原精稀释;先添加精液与先添加稀释液,2种稀释顺序按1:2对原精稀释。稀释后的精液,置于6℃左右,定期检查精子活力。结果表明:用不同渗透压的稀释液稀释精液后立即测定的活力差异显著(P0.05),以261mOsm/kg组的活力最高,但24h及以后不同渗透压组的活力差异不显著;稀释后冷藏,3种不同pH值稀释液之间、稀释液与精液不同添加次序之间精子活力差异均不显著。因此,用YHFB稀释液对黑凤鸡精液进行稀释与冷藏,低渗透压(261mOsm/kg)较好,而pH值在7.1~7.4、精液与稀释液添加次序之间没有显著差异,能获得较好效果。     

不同类型稀释液对驴冷冻精液品质的影响

[目的]:对比分析各类型稀释液对驴冷冻精子活力、畸形率的影响,根据冻精解冻效果,筛选出适合驴精子冷冻的最佳稀释液,最适宜稀释比例,为驴冷冻精液研发提供参考.[方法]:实验共计14 d,采集6头种公驴精液,每份原精均分为3等份,分别用3种稀释液稀释,从而选取最优稀释液;按1:0.75、1:1.5、1:3、1:6不同比例混...     

冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂对梅花鹿冻融精子质量的影响

【目的】探究在冷冻稀释液中添加大豆卵磷脂代替10%卵黄对梅花鹿精液冷冻保存效果的影响,为梅花鹿人工授精体系的完善提供参考。【方法】采用电刺激法采集梅花鹿精液,以精液冷冻稀释液中分别添加1%、2%、3%、4%和5%大豆卵磷脂代替10%卵黄作为试验组,添加20%卵黄作为对照组,分别进行各组精液冷冻保存。5 d后,进行精液解冻,检测解冻后各组精子的活力、质膜完整率、顶体完整率、线粒体活性、存活时间,筛选合适浓度的大豆卵磷脂。选取4～5岁健康雌性梅花鹿,肌肉注射300 IU孕马血清促性腺激素(PMSG)和0.4 mg氯前列醇钠进行同期发情处理,发情后第20 h用20%卵黄组与筛选出的大豆卵磷脂组冻精进行人工输精,输精后30 d使用B超检测仪检测妊娠情况,统计妊娠率。【结果】与对照组相比,1%大豆卵磷脂组冻融后的精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率及线粒体活性均显著提高(P<0.05);随着稀释液中大豆卵磷脂浓度的增加,其冻融后精子活力、向前活动力、快速前进活力、活率、质膜完整率、顶体完整率以及线粒体活性呈下降趋势,精子存活时间也随浓度的增加而减少。1%大豆卵磷...     

亚硒酸钠维生素E对牛冷冻精液品质的影响

本试验研究了亚硒酸钠维生素E对牛冷冻精液品质的影响。以常规Tris卵黄冷冻稀释液中分别添加2.5μL、5μL、7.5μL、10μL稀释后的亚硒酸钠维生素E(注射液)为试验组,以常规Tris卵黄冷冻稀释液为对照组,对解冻后的精液品质进行测定。结果显示添加5μL、7.5μL、10μL亚硒酸钠维生素E能够显著降低冷冻精液的精子畸形率,且10μL组顶体脱落的精子数量显著降低,精子顶体完整率上升。小剂量(<10μL)组改善了精子存活时间,使精子在体外37℃的存活时间延长至8.5h。     

保存温度和不同种类稀释液对猪精液品质的影响

猪精液在室温保存时,含庆大霉素的稀释液保存效果优于含青、链霉素的稀释液,两种稀释液在保存72h时,精子活率、顶体完整率、GOT和LDH活性以及存活指数差异极显著(P<0.01).低温保存时,含蜂蜜和卵黄的稀释液对防精子冷刺激、维持精子活率的效果比含葡萄糖、奶粉的稀释液理想.在冷冻保存条件下,以含2%甘油的稀释液保存效果最佳.液态保存(室温、低温)的猪精液,LDH活性随精子活率下降而下降;pH值则都呈先上升后下降的变化趋势.室温保存主要是引起精子顶体脊膨大和保存后期的顶体前端膨大;低温保存主要引起顶体前部膨大和保存后期的少数顶体脱落;冷冻保存主要是造成顶体的膨大程度加大和顶体脱落.3种保存条件都造成精子线粒体透性增强.液态保存和冷冻保存精液的精清GOT活性与顶体完整率无显著相关性(P>0.05).     

不同浓度大豆卵磷脂替代蛋黄对东佛里生奶绵羊精液冷冻保存效果的影响

本试验皆在研究添加不同浓度大豆卵磷脂（SL）冷冻保存东佛里生奶绵羊精液的效果。我们在Tris基础稀释液中,添加18%蛋黄为对照组,添加0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%SL设为试验组,检测冷冻精液解冻后的精子活率和顶体完整率。结果显示,添加0.5%、2.5% SL冷冻稀释液稀释的精液,解冻后精子活率和顶体完整率与其他组之间存在显著差异（P<0.05）;添加18%蛋黄和1%～2% SL冷冻稀释液稀释的精液,冷冻解冻后精子活率和顶体完整率之间无显著差异（P>0.05）;添加18%蛋黄和1.0%～1.5% SL冷冻稀释液稀释后的精液,进行人工授精后母羊的妊娠率与对照组无显著差异（P>0.05）。因此,大豆卵磷脂可以作为冷冻保护剂用于东佛里生奶绵羊精液的冷冻保存,其最佳添加浓度为1～2%（g／L）。     

Effects of ovalbumin on the motility and fertilising ability of fowl spermatozoa stored for 24 H at 4 degrees C

1. The effects of 0.1, 0.5, 1 and 3 g ovalbumin/100 ml diluent on spermatozoa stored for 24 h at 4 degrees C in TES diluent or BPSE diluent with or without seminal plasma were studied. 2. There was no effect of ovalbumin on the motility of spermatozoa stored in whole semen, except at an incorporation rate of 3 g/100 ml, when motility was reduced for spermatozoa stored in TES diluent. When sperm were stored in the absence of seminal plasma, ovalbumin stimulated motility but this effect was transitory. 3. The effects of ovalbumin on fertilisation rates were diluent- and concentration-dependent. Ovalbumin concentrations of 0.1 and 0.5 g/100 ml increased the fertilising ability of whole semen stored in TES diluent but 1 g/100 ml ovalbumin decreased it. However, 0.5 g ovalbumin/100 ml had no effect on the fertilising ability of spermatozoa stored in BPSE diluent, irrespective of the presence or absence of seminal plasma.     

Study on the Role of AMPK Activator in Cryopreservation of Sheep Semen

This study aimed to investigate the effects of AMPK activators metformin (Met) and acadesine (AICAR) on sheep semen cryopreservation. Firstly, Met and AICAR with different concentrations (0, 100, 200, 300, 400, 500 μmol·L^-1) were added into the frozen diluent. After freezing and thawing, the optimal concentration (400 μmol·L^-1 Met, 200 μmol·L^-1 AICAR) were selected based on sperm motility, motion performance and membrane integrity; Secondly, the collected semen was froze using different frozen diluents (control group:diluent; Met group:diluent + 400 μmol·L^-1 Met; AICAR group:diluent + 200 μmol·L^-1 AICAR). After thawing, the sperm AMPK protein expression, acrosomal enzyme activity, metabolic index, mitochondrial function and antioxidant enzyme activity were examined. The results showed that the addition of 400 μmol·L^-1 Met and 200 μmol·L^-1 AICAR could significantly improve sperm motility, motion performance and membrane integrity(P<0.05) after thawing. In 400 μmol·L^-1 Met group, the total sperm motility, acrosome integrity rate and plasma membrane integrity rate were 43.20%, 91% and 46%, respectively. Compared with the control group, the level of AMPK phosphorylation in the sperm of the Met and AICAR groups was significantly increased after thawing (P<0.05), the acrosome enzyme activity of sperm was significantly increased(P<0.05); the pyruvate level was significantly decreased (P<0.05), the lactate dehydrogenase activity, lactic acid content, and ATP content were significantly increased(P<0.05). Compared with the control group, the dilution of Met group and AICAR group was more conducive to maintain mitochondrial membrane potential (P<0.05), increase ATPase and antioxidant enzyme activity (P<0.05). The addition of appropriate concentrations of Met and AICAR could improve semen quality of cryopreservation in sheep.     

AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin,Met）和阿卡地新（acadesine,AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）;然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液;Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液;AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液,解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明,稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05）,其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%,顶体完整率为91%,质膜完整率为46%。与对照组相比,Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）;顶体酶活性显著提高（P<0.05）;丙酮酸水平显著下降（P<0.05）,乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）;与对照组相比,Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05）,提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。     

3种稀释液对乐至黑山羊精液品质的影响

旨在评价不同种类稀释液对乐至黑山羊精液品质的影响。配制柠檬酸-Tris（1号）、磷酸盐（2号）和OviXcell（3号）3种稀释液,采集8只乐至黑山羊新鲜精液,采用上述稀释液进行冷冻保存;测定并比较添加不同稀释液冷冻保存的山羊精液在采集后、平衡后以及解冻后的精子活力、精子畸形率、精子顶体完整率。结果表明：在3种稀释液中,添加OviXcell稀释液（3号）的精液其解冻后精子活力和顶体完整率均最高,精子畸形率最低。提示OviXcell稀释液更适用于乐至黑山羊精液的体外冷冻保存。     

Cryopreservation of Ghagus chicken semen: Effect of cryoprotectants,diluents and thawing temperature

The present study evaluated the effects of cryoprotectants, semen diluents and thawing temperature during Ghagus chicken semen cryopreservation. Four different experiments were conducted; Experiment 1—semen was cryopreserved using 6% dimethylacetamide (DMA) and 2% dimethylsulphoxide (DMSO) in Sasaki diluent (SD) and Lake and Ravie diluent (LR), Experiment 2 and 3—semen was cryopreserved using 8% ethylene glycol (EG) in SD, LRD and Red Fowl Extender (RFE), Experiment 4—semen was cryopreserved using 6% dimethylformamide (DMF) in SD, LR and Beltsville poultry semen extender (BPSE). Semen was cryopreserved in 0.5 ml French straws. Thawing was done at 5°C for 100 s in ice water in Experiments 1, 2 and 4, whereas in Experiment 3 thawing was done at 37°C for 30 s. The post-thaw sperm motility, viable sperm and acrosome-intact sperm were significantly (p < .05) lower in cryopreserved samples in all the experiments. No fertile eggs were obtained from cryopreserved samples in Experiments 1 and 2, except for 8% EG RFE treatment where the fertility was 0.83%. In Experiments 3 and 4, highest fertility was obtained in LR treatment 48.12 and 30.89%, respectively. In conclusion, using cryoprotectant EG (8%) and thawing at 37°C for 30 s, and DMF(6%) resulted in acceptable level of fertility in Ghagus chicken. Though the diluents influenced post-thaw in vitro semen parameters, the fertility was not affected. In addition, results indicated that thawing temperature may be a critical stage in the cryopreservation protocol.