鸡胚成纤维细胞传代的探讨

鸡胚成纤维细胞传代的探讨王建华（江西生物药厂）鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）能否传代这一问题，有的资料说不能传代。为了减少生产用蛋，降低产品的成本，在生产中，对ＣＥＦ能否传代进行了试验性探讨。１材料犊牛血清、７．５％ＮａＨＣＯ３、双抗、０．５％的细胞生长液...     

利用不同方法培养鸡胚成纤维细胞的研究

采用胰酶消化法和组织块培养法培养了大量优质的鸡胚成纤维细胞,并对培养的细胞进行了冻存和复苏,建立了一套较完备、快速的鸡胚胎成纤维细胞的培养模式。并探讨这两种培养方法的优缺点。     

应用鸡胚成纤维细胞培养鸡痘病毒

用丹麦产ＮＵＮＣ一次性细胞培养瓶,１９９培养基加小牛血清培养鸡胚成纤维细胞,结果显示,细胞生长快,贴壁良好,２４ｈ单层细胞即长满瓶底,无卷边脱落现象发生。将在鸡胚绒毛尿囊膜上适应了的鸡痘病毒接种鸡胚成纤维细胞,４ｄ后细胞出现预期的典型病变,并且可见大量多核巨细胞形成,证明鸡痘病毒具有诱发细胞融合的功能,而且说明,用鸡胚成纤维细胞增殖鸡痘病毒,可获得数量可观的病毒粒子。将细胞毒回归鸡胚绒毛尿囊膜,形     

鸡胚成纤维细胞制备工艺改进试验

在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法。     

两种制备鸡胚成纤维细胞的方法比较

在伪狂犬病活疫苗和法氏囊病毒GT株生产上均需制备鸡胚成纤维细胞.在制备鸡胚成纤维细胞过程中,对用连续消化法与玻璃珠分散法两种方法进行比较,结果表明:用玻璃珠分散法制备细胞,易使死亡细胞数大幅增加,在生产中加大成本,并在旋转培养中,影响活细胞的贴壁及生长;而采用胰酶连续消化法制备的细胞,贴壁较好、成活率高,但比前者工作量大;结合两者优点,找出了制备鸡胚成纤维细胞最佳的方法.     

不同制备方法对鸡胚成纤维细胞产量的影响

采用传统法、半胚法和全胚法制备鸡胚成纤维细胞（CEF）单层，在同等条件下均以成纤维细胞为主，并伴有少量的上皮细胞，仅有全胚法含有极少量的肝细胞；培养时细胞贴壁和生长状况3种方法无明显差异（P＞0.05)；CEF的产量，半胚法明显高于其他2种方法。     

采用继代鸡胚成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊细胞苗的试验

采用原代鸡胚成纤维细胞和继代鸡胚成纤维细胞,生产了鸡传染性法氏囊细胞苗,效价(TCID50/mL)无明显差异.采用继代鸡胚成纤维细胞生产鸡传染性法氏囊细胞苗,减少种蛋消耗,降低劳动强度,增加产量,降低生产成本.     

12种藏药对新城疫病毒感染鸡胚成纤维细胞能力的影响

为筛选抗新城疫病毒藏药复方的组分药,将安全质量浓度范围内的藏菖蒲、红景天、灵芝菌柄、灵芝菌盖、决明子、天冬、龙胆、降香、乳香、仁青芒觉、二十五味松石丸、二十五味珍珠丸的煎液和鸡新城疫病毒(NDV)分别以3种方式(先加藏药后接种病毒、先接种病毒后加藏药、藏药和病毒感作后同时加)加入到鸡胚成纤维细胞(CEF)的培养体系中.用MTT法测定各藏药对NDV感染CEF能力的影响.结果表明:多数藏药均能显著抑制NDV感染细胞,且与加药方式和药物质量浓度有一定关系.藏菖蒲、灵芝菌盖和降香在3种加药方式中均呈现显著效果,可作为抗NDV藏药复方的组分药.     

鸡胚成纤维细胞培养鸭瘟病毒的试验

将鸭瘟病毒强毒（DPV34）经12日龄鸭胚连续传2代，收获的尿囊液DPV34F2作为细胞培养的病毒接种于鸡胚成纤维细胞，连续传代5次。结果，从第2代开始，接种DPV的鸡胚成纤维细胞出现细胞病变，随首代次的增加，细胞病变愈加明显。经电镜观察，第5代细胞培养物中有典型的DPV病毒粒子；将第5代培养物接种鸭胚，出现典型鸭瘟病变；用PCR方法检测培养物，也出现DPV的特征DNA带。     

鸡胚成纤维细胞的冷冻保存

试验研究了不同的冷冻保护液、不同的平衡方法对鸡胚成纤维细胞活力的影响及细胞复苏后的培养情况。结果表明,冷冻保护液Ⅰ和冷冻保护液Ⅱ对细胞的保护效果差异不显著(P>0 05),冷冻保护液Ⅲ对细胞的保护效果优于冷冻保护液Ⅰ和冷冻保护液Ⅱ,并且差异极显著(P<0 01);平衡方法Ⅰ和平衡方法Ⅱ对细胞的存活率影响差异不显著(P>0 05)。复苏后的鸡胚成纤维细胞于体外培养时存在贴壁迟缓,前期生长速度较慢等现象。     

乌骨鸡早期胚胎发育的研究

在鸡产蛋后，不同时间获取受精卵，观察早期胚胎发育变化规律，依据胚盘形态的变化，可将鸡胚在体内发育过程分为两个时期：（1）距前一个蛋产出后5.5h(0-1h子宫龄）至15.5h(10-10.5h子宫龄）为鸡胚的卵裂期，卵裂的结果形成厚约6－7层细胞的胚盘。（2）距前一个蛋产出后17.5h（12－12.5h子宫龄）至明区形成期，即鸟类的囊胚期晚期，结果在胚盘中央形成透明的明区和周围不透明的暗区。乌果骨受精卵第一次分裂发生在产蛋后5h（0－0.5h子宫龄），桑椹期在产蛋后11.5h(6-6.5h子宫岭），囊胚期在产蛋后15.5h(10-10.5h子宫龄）。     

玉米赤霉烯酮对鸡胚成纤维细胞的毒性作用

旨在探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对鸡胚成纤维细胞(DF-1)的毒性作用机制,采用MTT法检测细胞活力变化,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)活力,ELISA法检测Caspase-3含量,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,荧光显微镜观察细胞活性氧(ROS)水平,线粒体膜电位变化,RT-qPCR法检测内质网应激(ERs)和细胞凋亡相关基因的mRNA转录水平。结果显示,12.5~50.0 μg·mL^-1 ZEA显著抑制DF-1细胞增殖(P<0.01),且呈时间和剂量依赖性关系。25.0 μg·mL^-1 ZEA处理细胞24 h后,上清液中LDH和Caspase-3含量显著升高(P<0.01);细胞中ROS水平和细胞凋亡数量极显著升高(P<0.01);线粒体膜电位极显著降低(P<0.01)。凋亡相关基因Caspase-3、Bax mRNA转录水平极显著上调(P<0.01),Bcl-2 mRNA转录水平极显著下调(P<0.01);ERs相关基因GRP78、ATF6、ATF4、CHOP、PERK mRNA转录水平极显著上调(P<0.01)。综上表明,ZEA能通过内质网应激途径导致细胞凋亡并对鸡胚成纤维细胞发挥毒性作用。研究结果为深入研究ZEA对鸡细胞的毒性作用和解毒手段奠定基础,对相关禽类疾病治疗具有意义。     

低温对鸡不同胚龄种蛋孵化效果的影响

冬季停电 5小时造成孵化温度大幅度下降到 10℃左右。低温使胚胎死亡率上升 ,孵化率降低 ,雏鸡弱 ,出雏时间推后且延长。胚龄越大受低温的影响越大。     

Effect of Overexpression of FOXL2 Gene on Gonadal Differentiation in Chicken Embryo

The aim of this study was to investigate the effect of FOXL2 gene on gonadal differentiation in chicken embryos.This test was divided into the experiment groups 1,2 and blank control group(chicken embryos were 260,100 and 20,respectively).In the experimental group,pLV-FOXL2 lentivirus recombinant plasmids and pLV empty plasmids were injected into the chicken embryo on the second day of the embryonic stage by subpaneoidal injection.The blank control group was not treated and incubated with the experimental groups until the chick was hatched.CHD1 gene genetic sex identification method was used to detect the sex of chicks,the changes of gonadal anatomy and histological structure were analyzed,and the expression levels of FOXL2 and CYP19A1 proteins were detected by immunohistochemistry.The results showed that in the experiment group 1,there were 23 male and 18 female of genetic sex,21 male and 18 female of phenotypic sex,and two of them had atypical phenotypic gender,with changes in the left gonadal gland toward ovarian structure.The phenotypic sex was consistent with the genetic sex in experiment group 2,with 9 male and 12 female.Positive PCR results showed that 10 positive individuals were obtained in the experiment group 1,with a positive rate of 24.4% (10/41),and 8 positive individuals were obtained in the experiment group 2,with a positive rate of 38.1% (8/21).The anatomical structure of the gonad showed that the volume of the left gonad was significantly larger than that of the right gonad in the positive plV-FOXL2 male embryos.The results of tissue sections showed that the gonad of male chicken embryo had typical structure of ovarian cortex and medulla.There was no significant change in the development of gonad in female embryos with positive pLV-FOXL2.Immunohistochemical results showed that the expression levels of FOXL2 and CYP19A1 proteins in the left and right testicle of experiment group 1 were similar to that in the hen ovary of the blank control group,and were significantly higher than that in experiment group 2 (P<0.05).These results suggested that FOXL2 gene might promote the sexual inversion of chicken gonads and played an important role in the differentiation and development of chicken gonads.     

过表达FOXL2基因对鸡胚性腺分化的影响

试验旨在研究FOXL2基因对鸡胚性腺分化的影响。本试验分为试验1组、试验2组和空白对照组（鸡胚数量分别为260、100、20枚）,试验组通过胚盘下腔注射的方法分别将pLV-FOXL2慢病毒重组质粒、pLV空质粒注入胚胎期第2天的鸡胚,空白对照组不做处理并与试验组一起孵化至出雏,利用CHD1基因遗传性别鉴定的方法对出雏的雏鸡进行性别检测,分析其性腺解剖学、组织学结构变化,并利用免疫组化的方法检测性腺FOXL2和CYP19A1蛋白表达量。结果显示,试验1组遗传性别为公的23只,遗传性别为母的18只,表型性别为公的21只,表型性别为母的18只,其中有2只表型性别不典型,左侧性腺发生变化,朝卵巢结构转变;试验2组遗传性别为公的9只,遗传性别为母的12只,表型性别与遗传性别一致。阳性PCR检测结果显示,试验1组获得阳性个体10个,阳性率为24.4%（10/41）;试验2组获得阳性个体8个,阳性率为38.1%（8/21）。性腺解剖学结果显示,阳性pLV-FOXL2雄性鸡胚左侧性腺体积明显大于右侧性腺,表现膨松状态;组织切片结果显示,雄性鸡胚性腺具有典型的卵巢皮质层和髓质层结构;阳性pLV-FOXL2雌性鸡胚性腺的发育无明显变化。免疫组化结果显示,FOXL2和CYP19A1蛋白在试验1组左右侧睾丸中的表达量与空白对照组母鸡卵巢中的表达量相似,显著高于试验2组（P<0.05）。以上结果表明,FOXL2基因可能促进鸡雄性性腺的性反转,在鸡性腺分化和发育过程中发挥着重要的作用。     

鸡胚盲肠上皮细胞的传代培养

本研究旨在探讨鸡胚盲肠上皮细胞传代培养条件及其特性,为E.tenella损伤机制及抗球虫药的研究提供体外模型。分别用胰酶-EDTA联合消化和分步消化2种方法分离纯化原代鸡胚盲肠上皮细胞,通过测定贴壁细胞覆盖率选择细胞传代的适宜消化方式;筛选了传代细胞培养液中L-GLN和胰岛素的最佳浓度,通过贴壁差进一步纯化盲肠上皮细胞,探索其合适的培养条件。通过形态学观察、透射电镜、免疫组织化学技术、组织化学技术、糖原染色、流式细胞术的方法对传代细胞特性进行了鉴定。结果表明:胰酶-EDTA联合消化、15min贴壁差纯化除去成纤维细胞,72.5mg.L-1 L-GLN、0.05mg.L-1胰岛素和5%FBS的传代细胞培养液更有利于盲肠上皮细胞的生长;经形态学和透射电镜观察,AKP、Vimentin及PAS染色,所培养的传代细胞具有典型的上皮细胞特征,在传代后24～72h盲肠上皮细胞纯度达95%以上,贴壁细胞覆盖率达85%以上;细胞凋亡测定表明,细胞连传5代,活性较好,第6代细胞凋亡率显著增加,贴壁细胞覆盖率降低。本研究提示用该法传代可获得稳定、数量大、活性高、纯度高的鸡胚盲肠上皮细胞。     

鸡胚成纤维细胞原代培养及应用

原代培养是指在体外模拟体内生理环境,使从体内取出的组织细胞生存、生长和传代,并维持原有组织细胞的结构和功能特性。鸡胚成纤维细胞具有相对容易获得、增殖能力强、适应性强、良好的耐受性、性状比较稳定等特点,使得其被广泛地应用于分子和细胞生物学研究的许多方面。论文综述了近年来有关鸡胚成纤维细胞的培养技术,如鸡胚的取材、细胞的分离、纯化和培养,同时介绍了应用进展和未来研究方向。     

量子点在兽医领域应用研究进展

量子点具有独特的光学性质,近年已在材料科学、分析化学、生命科学、医学检验等学科领域得到广泛研究和应用.作为一种新型的荧光标记材料,量子点在兽医领域越来越受到重视.作者就量子点的特性、种类及其在兽医领域的研究做一综述,并提出了未来研究方向,为拓展量子点在动物疫病诊断、兽药研发、致病机制等方面的研究提供参考.