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【目的】为了解四川省猪源呼吸道疾病支气管败血波氏杆菌的流行情况及菌株生物特性。【方法】采集56份病料进行支气管败血杆菌的分离纯化、药敏及相关耐药基因和毒力基因的筛选。【结果】分离到10株支气管败血波氏杆菌,分离率为17.86%。分离菌对青霉素、氨苄西林、羧苄西林、林可霉素、复方新诺明和头孢氨苄的耐药率为100%,对新霉素、氯霉素、氧氟沙星和左氧氟沙星高度敏感。共检出耐药基因9种,其中gyrA、sul1和tetC的检出率超过50%;共检出毒力基因6种,其中fla、dnt、prn和fhaB的检出率高达100%。小鼠致病试验结果显示大部分菌株具有较强的致病性。【结论】四川省主要流行的支气管败血波氏杆菌多重耐药情况严重,耐药机制复杂,耐药基因和耐药表型符合率较低,毒力基因检出率较高,且对小鼠呈现较强的致病性。研究结果可为四川省支气管败血波氏杆菌的防控和治疗提供参考。 相似文献
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广西猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定及药敏试验 总被引:1,自引:0,他引:1
为掌握广西猪传染性萎缩性鼻炎(AR)发病情况、猪支气管败血波氏杆菌(Bb)流行血清型及耐药情况,分别从广西南宁、上林、贵港、武鸣等地4个规模化猪场和1个屠宰场采集到247份猪鼻腔分泌物样品,径常规细菌分离获得57株Bb可疑菌株,以生理生化试验和PCR鉴定等方法对可疑菌株进行鉴定,并根据O、K抗血清凝集试验进行分型.结果表明,57株可疑菌株均确定为Bb,其中6株为Ⅰ相Bb、14株为Ⅱ相Bb、37株为m相Bb,且Ⅰ相Bb毒力较Ⅱ相、Ⅲ相Bb毒力强;药敏试验结果表明,大多数Bb对复方新诺明、阿米卡星、新霉素、庆大霉素和环丙沙星等高度敏感,对阿莫西林、青霉素、痢特灵、氨苄青霉素、呋喃妥因、头孢氨苄、林可霉素、头孢噻吩、恩诺沙星、万古霉素和利福平等不敏感. 相似文献
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从 2~ 3月龄病死獭兔的肺病变组织中分离到 3株细菌 ,经形态特征、培养及生化特性、药敏试验和动物实验等表明 ,分离菌株为能运动、无芽孢的革兰氏阴性小杆菌 ,即支气管败血波氏杆菌。该菌在鲜血平板上产生溶血 ,在麦康凯平板上形成光滑、中央突起的珍珠状菌落 ,且能与兔支气管败血波氏杆菌参考株S80 10 3抗血清发生凝集 ,人工接种小白鼠能引起死亡 ,并从病死鼠中回收到相应细菌 相似文献
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用双层平板和双温培养法分离支气管败血波氏杆菌 总被引:6,自引:0,他引:6
自行设计双层平板选择培养基并用双温培养法分离猪支气管败血波氏杆菌。用加有1%葡萄糖的麦康凯琼脂作为基础培养基,从猪鼻腔采取病料以环形或3点形接种到该基础培养基,在37℃培养8~10h后,再在该培养过的基础平板上倾注一层约3mm厚的经灭菌并冷至45~50℃的半固体培养基,于25℃再正放培养14-16h。其后在培养基表面挑选单个或扩散生长的菌落接种上述基础平板培养基进行初步验证,再取这些验证过的菌落作 相似文献
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参考相关资料,针对支气管败血波氏杆菌Bordetella bronchiseptica FlaA基因上游序列选择合成1对特异性引物,对贵州分离株(B8株和B27株)进行PCR扩增,将扩增产物连接在pMD18-T载体上,并转化到DI-L5a感受态细胞中,提取重组质粒进行PCR和双酶切鉴定后测序。结果获得分子长为237bp的特异性DNA片段;核苷酸同源性分析表明,贵州分离株间的同源性高达99.1%,与Bb参考株的同源性为97.8%~99.6%,与Bpp参考株的同源性为95.6%-97.4%;系统进化树分析表明,贵州分离株与Bb参考株亲缘关系较近,而与Bpp参考株亲缘关系远。 相似文献
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通过PCR扩增获得支气管败血波氏杆菌的全长4 395 bpdnt基因,并利用pET-28a/BL21系统对其进行了融合表达。Western-blot检测结果表明,表达产物具有良好的免疫学活性。使用His-band purification kit纯化后,得到纯度为93.2%的融合蛋白HIS6-DNT。在乳鼠皮肤坏死试验中,表达产物HIS6-DNT和天然DNT均能导致乳鼠皮肤产生坏死性病变。在乳鼠皮肤坏死阻断试验中,兔抗HIS6-DNT血清能中和天然DNT,使其失去对乳鼠皮肤的坏死毒性。试验结果表明,重组蛋白具有天然DNT的生物学毒性和免疫原性,所产生的抗体具有中和活性,为DNT的结构和功能研究奠定了基础。 相似文献
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LIU Yan QIN Feng-yan BAO Guo-lian CHEN Hui XIAO Chen-wen WEI Qiang JI Quan-an 《中国农业科学(英文版)》2014,(9):2010-2018
Bordetella bronchiseptica is a Gram-negative pathogen that causes acute and chronic respiratory infection in a variety of animals. To identify useful antigen candidates for diagnosis and subunit vaccine of B. bronchiseptica, immunoproteomic analysis was adopted to analyse outer membrane proteins of it. The outer membrane proteins extracted from B. bronchiseptica were separated by two-dimensional gel electrophoresis and analyzed by Western blotting for their reactivity with the convalescent serum against two strains. Immunogenic proteins were identified by matrix-assisted laser desorption/ionization time of flight-mass spectrometry(MALDI-TOF-MS), a total of 14 proteins are common immunoreactive proteins, of which 1 was known antigen and 13 were novel immunogenic proteins for B. bronchiseptica. Putative lipoprotein gene was cloned and recombinantly expressed. The recombinant protein induced high titer antibody, but showed low protective indices against challenges with HB(B. bronchiseptica strain isolated from a infected rabbit). The mortality of mice was 80% compared to 100% of positive controls. The identification of these novel antigenic proteins is an important resource for further development of a new diagnostic test and vaccine for B. bronchiseptica. 相似文献
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为建立准确、快速检测兔支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica)的PCR方法,根据Gen Bank中波氏杆菌ptxA基因设计1对特异性引物,用建立的PCR方法扩增兔波氏杆菌,可扩增出870 bp的目的片段。该方法特异性好,仅对波氏杆菌有特异性的扩增,而对大肠埃希菌、无乳链球菌、金黄色葡萄球菌、多杀性巴氏杆菌等病原菌的扩增结果呈阴性;敏感性较高,最低检测限可达6.8×10~(-7)μg/m L;用建立的PCR方法检测临床疑似感染支气管败血波氏杆菌病兔的脏器及鼻拭子样品,可扩增出目的条带,且与细菌分离的结果一致。可见,建立的检测方法敏感、特异,可用于临床上兔波氏杆菌病的快速诊断及鉴定。 相似文献
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为建立特异性好、敏感性高、稳定可靠的兔支气管败血波氏杆菌(Bb)双夹心ELISA检测方法,制备了兔抗Bb免疫血清和小鼠抗Bb腹水单抗(Bb McAb),并将它们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度,用特异性试验、敏感性试验和重复性试验对该方法进行鉴定,并与PCR检测方法比较。结果表明,兔抗Bb IgG的最佳稀释度为1∶6 400,浓度为2.5 mg/L;单抗的最佳稀释度为1∶800,浓度为5.0 mg/L。特异性试验和重复性试验结果表明,该方法特异性强、重复性好,与兔常见病菌大肠埃希氏菌、多杀性巴氏杆菌和产气荚膜梭菌均不发生反应,同时与PCR检测方法的符合率为100%。 相似文献
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根据Gen Bank中多杀性巴氏杆菌ATP合成酶基因(atp B)的保守序列设计特异性引物,建立巴氏杆菌PCR检测方法,并与已建立的支气管败血波氏杆菌PCR检测方法进行合并,经反应条件的优化,成功建立多杀性巴氏杆菌、支气管败血波氏杆菌复合PCR诊断方法。该方法检出的最小多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌菌数分别为40 CFU和4 CFU;对兔源产气荚膜梭菌、大肠杆菌、猪胸膜肺炎放线杆菌、猪鼻支原体、链球菌的检测结果均为阴性,说明该方法具有良好的特异性。用该方法对中国4个省份采集的临床鼻拭子样本共712份进行检测,结果显示,多杀性巴氏杆菌阳性率为25.56%,支气管败血波氏杆菌阳性率为34.55%,双阳性率为13.20%。该复合PCR方法能快速、敏感地从家兔鼻拭子样品中检出多杀性巴氏杆菌和支气管败血波氏杆菌,为临床疾病检测和流行病学调查提供了技术保障。 相似文献
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临床感染猪肠球菌菌株的分离与鉴定 总被引:1,自引:0,他引:1
对分离自河南洛阳、济源、许昌、南阳等地送检病猪内脏的42份革兰阳性球菌分离纯化,根据细菌形态学、培养特性和生长耐性试验结果,初步确定为肠球菌,采用V itek-32全自动细菌鉴定系统对其进行鉴定,共鉴定出了34株肠球菌.其中,粪肠球菌(Enterococcus faecalis)10株、屎肠球菌(E.faecium)2株、铅黄肠球菌(E.casselifla-vus)22株.另有8株未鉴定到种的水平. 相似文献