香石竹斑驳病毒(CarMV)的研究进展

香石竹斑驳病毒(CarMV)是侵染香石竹的主要病毒之一,严重影响香石竹切花产量与品质,影响其经济价值和进出口贸易。目前对香石竹斑驳病毒已有大量研究,为系统了解该病毒,笔者从CarMV的病原学、血清学和分子生物学,CarMV病害发生与检测及CarMV防治方法等方面综述了CarMV的研究现状。     

昆明香石竹斑驳病毒鉴定

 从表现为叶斑驳、花碎色症状的香石竹病株上获得一病毒分离物,经电镜负染观察,该病毒为直径是28～33 nm的球状粒子,病毒提取液经紫外光测定呈典型核蛋白吸收曲线,OD₂₆₀/OD₂₈₀=1.70;血清学反应与CarMV抗血清出现明显的沉淀线。由此,可基本认为该病毒分离物为香石竹斑驳病毒(Carnation mottle virus, CarMV)。     

昆明地区香石竹病毒病及综合防治研究

 简要综述了昆明地区香石竹病毒病的研究进展。经鉴定,确认昆明地区香石竹上存在的病毒有:香石竹斑驳病毒(CarMV)、香石竹脉斑驳病毒（CarVMV）、香石竹潜隐病毒（CarLV）、香石竹蚀环病毒（CarERV）、香石竹坏死斑点病毒(CarNFV)。其中,CarMV是昆明地区香石竹上的优势病毒。同时,本文还提出了香石竹病毒病的综合防治策略,以供生产上运用。     

香石竹斑驳病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清制备

 香石竹斑驳病毒（Carnation mottle virus,CarMV）是侵染香石竹的主要病毒。本研究从已鉴定的CarMV毒源植物中提取总RNA, 克隆外壳蛋白（cp）基因后构建pET30a CP重组质粒,并转入BL21（DE3）pLysS进行原核表达。通过对诱导温度、初菌浓度、IPTG的浓度等表达条件进行优化,目的蛋白在37℃, IPTG 终浓度为10mmol/L的条件下,诱导表达6h后获得最高表达量。采用割胶的方法纯化cp蛋白,纯化后的目的蛋白免疫小鼠获得了特异性抗血清。经Western blot检测,结果表明所制备的抗血清与诱导表达的重组蛋白及接种CarMV的香石竹样品均发生特异性结合。利用所制备抗血清对昆明地区的48个香石竹样品进行抽检,结果表明香石竹样品的带毒率为79.2%。本研究为大规模抗血清生产、检测应用和深入研究该病毒cp基因与寄主的互作奠定基础。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒多克隆抗体制备及检测应用

将黄瓜绿斑驳花叶病毒(cucumber green mottle mosaicvirus,CGMMV)辽宁分离物繁殖在葫芦(Lagenaria siceraria)上,用葫芦作为繁殖寄主进行病毒提纯,将提纯病毒制剂免疫家兔制备多克隆抗体,抗体效价为1∶320000,建立了间接ELISA检测黄瓜绿斑驳花叶病毒方法,检测病汁液的灵敏度为1∶32000,检测提纯病毒的灵敏度为4.75×10-5mg。     

导致云南马铃薯品种中甸红退化的PVX分离物提纯及鉴定

对引起云南马铃薯品种中甸红退化的病毒分离物进行了纯化，应用酶联免疫吸附测定（ELISA）和免疫电镜技术（ISEM）检测鉴定了分离纯化的病毒样品，鉴定为马铃薯X病毒（Potato virus X,PVX)的分离株。经ELISA和ISEM复合检测筛选，用组织培养法得到了侵染中甸红的PVX分离物标准毒株。应用电镜技术检测了PVX在寄主植株中的分布，结果呈系统侵染。     

云南食用百合病毒病的发生与检测*

 通过田间调查、血清学技术、电镜技术、RT PCR技术对侵染云南食用百合的主要病毒进行调查和研究,结果表明,食用百合病毒病的症状类型多为花叶,斑驳或者无症等类型。 病毒种类主要是黄瓜花叶病毒（CMV）,百合无症病毒（LSV）和百合斑驳病毒（LMoV）。 其中通过ELISA检测,CMV的检出率达到53.3%,LSV的检出率达到46.7%;通过RT PCR检测,CMV的检出率达到60%,LSV的检出率达到50%,LMoV的检出率达到30%。     

苹果褪绿叶斑病毒的ELISA检测技术研究

比较了直接双抗体夹心法（DAS－ELISA）和间接双抗体夹心法（F（ab)2-ELSIA)检测CLSV的范围（不同株系）,并分析了在病毒提取介质中加入某些特殊成分后,对直接双抗体夹心法检测CLSV效果的影响。结果表明,间接法可以检测较宽的病毒株系;当常规病毒提取介质中加入尼古丁、氯化 镁和聚酰胺时,标准双抗体夹心法的检测范围也可以扩大。     

应用GAR-HRP进行甘薯病毒NCM-ELISA检测试验

分别采用辣根过氧化物酶标记的羊抗兔抗体 (GAR -HRP)和碱性磷酸酯酶标记的羊抗兔抗体(GAR -AP) ,对甘薯羽状斑驳病毒 (SPFMV)、甘薯潜隐病毒 (SPLV)、甘薯轻斑驳病毒 (SPMMV)及甘薯褪绿病毒(SPCFV)进行NCM -ELISA检测 ,结果表明 ,采用GAR -HRP进行NCM -ELISA检测对于SPFMV、SPLV、SPM MV、SPCFV同样有效 ,且特异性高 ,重现性好 ,在某些方面优于GAR -AP。对于国内危害甘薯的SPFMV、SPLV等主要病毒 ,采用GAR -HRP进行ELISA检测更加经济有效 ,是切实可行的     

鸭出血性卵巢炎病毒血症研究

【目的】阐明鸭出血性卵巢炎病毒（DHOV-HB株）感染鸭后的病毒血症,为深入了解鸭出血性卵巢炎的发病机理、诊断和疫苗研究提供依据。【方法】24只250日龄北京鸭芯片标记后分别经口感染100倍稀释的DHOV-HB株（3×10⁴ELD₅₀）,并设空白对照组15只,同等条件下分别在隔离器内饲养,逐日观察10日,各组每日经翅静脉采集10只鸭血液（尽可能采集同一只鸭血液）,用于病毒分离和抗体测定。将攻毒后1-10 d的血清样本经卵黄囊途径接种6日龄SPF鸡胚,每份血清以0.1 mL/胚的剂量接种5枚SPF鸡胚,鸡胚接种后置于37℃条件下继续孵化,每日定时照胚2次,及时收获并统计24-168 h之内死亡的鸡胚,死亡鸡胚胚体经剪碎,研磨,离心后采用RT-PCR的方法检测病毒核酸,有1枚及1枚以上死亡鸡胚,且DHOV病毒核酸检测阳性,即将该鸭判为病毒分离阳性。同时采用中和试验测定攻毒后4-10 d的血清抗体,每个血清稀释度接种5枚SPF鸡胚。鸡胚接种途径及特异性死亡的判定方法同上。判定标准如下：血清原液保护80%（4/5）以上的鸡胚判为抗体阳性,保护20%-60%（1/5-3/5）的鸡胚判为抗体可疑,不保护鸡胚（0/5）判为抗体阴性。【结果】试验鸭感染DHOV后的病毒血症和免疫反应密切相关。感染后1-3 d,病毒血症出现并达到高峰,病毒分离均100%（10/10）阳性;4-6 d病毒分离率开始下降,分别为90%（9/10）、70%(7/10)和30%（3/10）阳性;7-10日血清中不再存在病毒,均为阴性(0/10)。中和试验结果表明攻毒后4 d,血清中病毒分离率下降的同时血清中即可能存在较低滴度的抗体,鸡胚死亡时间延后,此时抗体100%（10/10）阴性;攻毒后6 d的血清抗体80%（8/10）阴性,20%（2/10）可疑;攻毒后7 d 70%（7/10）阳性,10%（1/10）阴性,20%（2/10）可疑;攻毒后9 d 90%（9/10）阳性,10%（1/10）可疑;攻毒后10 d 100%（10/10）阳性。空白对照组血清病毒分离（1-10 d）和抗体检测（4-10 d）均为阴性。【结论】（1）DHOV口服感染成年鸭后,1-3 d日血清病毒分离率最高,感染后4 d 病毒分离率开始下降,感染后7 d血清病毒分离阴性。感染后7 d抗体70%（7/10）阳性,感染后10 d 100%（10/10）阳性;（2）病毒血症的持续时间与特异性免疫应答密切相关。