体细胞克隆牛超排胚胎玻璃化冷冻及移植试验

 对体细胞克隆牛进行了超数排卵、胚胎玻璃化冷冻及胚胎移植试验。首先对体外受精卵进行了玻璃化冷冻保存试验,结果表明,体外受精囊胚经过EPS10和EPS20 的TCM-199液玻璃化冷冻-解冻后胚胎形态正常率和发育率各组间差异不显著,囊胚孵出率EPS20组为31.3% (35/112)极显著高于EPS10组的12.2% (13/107)（P＜0.01）,选择玻璃化冷冻液EPS20作为体细胞克隆牛超排采卵获得胚胎的冷冻保存液。本试验对体细胞克隆牛"康康"和"双双"进行了超排试验,分别获得6枚（4枚可用胚）和10枚（9枚可用胚）胚胎,各取2枚1级胚胎应用EPS20玻璃化液进行玻璃化冷冻,解冻后分别移植到4头同期发情处理的中国荷斯坦奶牛的黄体侧子宫角内,结果为1头9908号受体母牛妊娠,并且产下1头健康的体细胞克隆牛"双双"的胚胎移植后代。试验结果表明,①体细胞克隆牛与正常牛一样对外源激素（FSH）具有较好的应答能力和超数排卵的能力;②体细胞克隆牛的胚胎可用于玻璃化冷冻保存。     

郏县红牛超数排卵研究

应用促卵泡素(FSH)连续4 d递减法肌肉注射郏县红牛进行超数排卵处理,重点探讨药物剂量、药物产地、季节以及重复超排等因素对郏县红牛超排的影响。结果表明,用加拿大FSH在300 mg剂量时的头均获胚总数和头均可用胚数(8.86和5.98枚)显著高于280 mg剂量组(6.32和3.05枚)和320 mg剂量组(6.56和4.12枚)(P0.05);用宁波产FSH在320 I U剂量条件下的头均获胚总数和头均可用胚数(8.12和5.46枚)显著高于280 I U组(5.55和2.76枚)和300 I U剂量组(6.32和3.77枚)(P0.05)。综合3个剂量的处理结果,进口FSH和国产FSH对郏县红牛的超排处理效果无显著差异,头均黄体数分别为13.89个和13.41个,头均获胚总数分别为6.94和6.74枚,头均可用胚数为4.42和3.95枚;在夏秋季(5-10月)超数排卵郏县红牛23头次,冬春季(11-次年4月)超数排卵郏县红牛21头次,发现超排季节对头均黄体数无显著影响(P0.05),但冬春季头均获胚总数(7.23枚)和头均可用胚数(6.51枚)显著高于夏秋季(4.57和2.90枚)(P0.05);对郏县红牛供体牛间隔70 d重复超排处理后发现,1次、2次和3次重复超排头均黄体数分别为14.30、13.12和12.23个,头均获胚总数分别为7.31、6.52和6.45枚,头均可用胚数分别为4.56、4.15和3.96枚,重复超排对上述3个指标均无显著影响(P0.05)。     

鲁西黄牛超数排卵与冻胚移植

1990～1991年按鲁西黄牛超排技术程序,用 FSH+PGF_(2α)对11头鲁西黄牛进行超排处理,有效率为100%。共获卵119枚,其中可用胚92枚,胚胎可用率为77.3%。按鲁西黄牛胚胎冷冻解冻技术程序,以甘油作冷冻保护剂,对 A、B 级胚胎进行常规冷冻。解冻33枚,27枚可用,解冻恢复率为81.8%。将23枚可用胚移植23头受体,90天妊检,13头妊娠,妊娠率为56.5%。     

高产奶牛超数排卵方法和胚胎冷冻的研究

为了从现有的超数排卵程序中筛选出适合效果稳定的超排程序,从饲养的1 173头奶牛群中,选择81头高产奶牛做供体.分别用促卵泡素(FSH Folltropin(R)-V)等量法(400mg)和逐日递减法(360mg和320 mg两个水平)对这81头奶牛进行超数排卵处理.所冲出的胚胎经镜检、胚胎评级后,从74头供体牛共获胚胎533枚,平均每头获胚胎7.2枚(533/74),可用胚胎429枚,平均每头可用胚胎5.8枚(429/74),其中A级胚胎309枚,B级胚胎120枚,C级胚胎83枚,退化胚21枚.所冲出的可用胚胎经冷冻72h,解冻后的存活率为93%.结果显示,采用总剂量360mg的FSH按逐日递减法超排,效果稳定,适合本地使用.     

酉州乌羊不同季节超数排卵的试验研究

目的:探讨不同季节对酉州乌羊超数排卵的影响.方法:选择酉州乌羊作为供体,采用CIDR+PG+FSH法进行超数排卵处理,以快速获得酉州乌羊胚胎,统计胚胎回收数、可用胚数、退化胚数及可利用率.结果:5月、12月2次超排分别回收胚胎273枚、258枚,平均回收胚胎5月[(13.00±5.15)枚/只]略高于12月[(10.44±4.07)枚/只],但差异不具有统计学意义(p0.05);可用胚胎分别为247枚、210枚,平均可用胚胎分别为5月[(11.76±5.73)枚/只]显著高于12月[(8.52±4.98)枚/只],差异具有统计学意义(p0.05),胚胎可用率分别为90.48%和81.40%.结论:不同季节对酉州乌羊超数排卵的可用胚数量有一定影响.     

冷冻奶牛胚胎移植黄牛研究

采用国产试剂、器械超数排卵22头黑白花奶牛,超排成功率72.7％(16/22)。采集胚胎143枚,其中可用胚占70％(100/143),超排母牛采集胚数和可用胚数头均6.5枚和4.5枚,按采得胚母牛计算采集胚数和可用胚数头均8.9枚和6.3枚。胚胎移植经冷冻—解冻后68.2％(30/44)可用,胚胎移植18头同期发情黄牛受体,3头妊娠。其中两头受体双胎6个月时流产,1头受体黄牛产下1头黑白花公犊。     

影响荷斯坦青年奶牛超数排卵效果因素的研究

本试验对48头、12~14月龄的荷斯坦青年奶牛进行超数排卵处理,试验结果表明:以320 mg剂量的进口FSH处理青年母牛后,可用胚胎数(5.25±1.50枚)较其他3组多(300 mg:4.25±2.63枚;340 mg:3.25±3.40枚;360 mg:5.00±2.94枚),但差异不显著。而对于不同剂量的国产FSH超排试验,以9.0 mg的剂量进行超排处理可以取得良好的超排效果,头均可用胚达到7.67±1.12枚,但与其他两组试验结果相比较(8 mg:6.20±1.19枚;10 mg:7.10±1.66枚)差异不显著。通过比较,国产FSH超排处理青年奶牛后头均可用胚数(7.03±0.75枚)明显高于进口FSH的超排效果(4.43±3.52枚),差异显著。同时,通过比较不同月龄供体牛的超排结果得出,12、13、14月龄的青年牛都可取得满意的胚胎生产效果,头均可用胚分别为4.73±1.32枚(n=11)、6.32±0.85枚(n=19)、6.89±0.90枚(n=18),差异不显著;并且随着年龄的增加,超排效果也随之增加。     

采用国产药械对奶牛胚胎冷冻保存及移植研究

试验采用国产药械,对奶牛进行超数排卵、胚胎采集。在鲜胚移植成功的基础上,对胚胎进行冷冻保存和移植黄牛等项研究均获成功。其超排成功率达86％,采胚成功率达90.7％,产胚牛平均产胚8.97枚,有效胚7.25枚.冷冻保存45天以上解冻成活率88.7％,移植黄牛及改良牛112头次,妊娠产犊33头,冷冻移植成功率29.6％,其中成功率最高的试验基点达37.5％。可见采用价格低廉的国产药械。进行奶牛胚胎的冷冻移植是完全可行的。     

南德温牛胚胎移植研究

为了研究适于大型肉牛———南德温牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择11头适龄南德温牛为供体牛和9头南阳牛为受体牛,进行CIDR-FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验。结果表明,供体牛均按时发情,反应率100%,共采胚99枚,获可用胚胎65枚,平均每头5.91枚,可用胚胎率65.0%,可用胚胎等级A、B、C级分别为38.5%、30.8%、30.7%,共移植受体9头,妊娠6头,受胎率66.67%,共产犊9头,其中产双犊3头,其余胚胎进行了冷冻保存。     

3种超排方案生产奶牛体内性控胚胎效果比较

采用3种不同方案对16头经产奶牛实施超数排卵,然后用X性控冻精进行人工授精。结果显示,3种方案超排头均排卵数分别为10.75、6.00、7.00枚,头均回收胚胎数分别为8.38、4.25、7.00枚,3组均无显著差异(P>0.05);方案Ⅰ超排供体头均获可用胚7.88枚,可用枚率为95.5%,显著高于方案Ⅱ(2.20枚,55.7%)和方案Ⅲ(0.33枚,15.7%)(P<0.05)。方案Ⅱ和方案Ⅲ在头均可用胚数方面无显著差异(P>0.05),但在可用胚率方面,方案Ⅱ显著高于方案Ⅲ(P<0.05)。     

不同FSH种类、剂量对不同品种肉牛超排效果的试验

本试验使用不同FSH种类和剂量对三个肉牛品种进行超排处理，结果表明：使用国产的FSH超排后有效采卵率为94.4％、头均可用胚胎数为6．1、可用胚胎率64．5％;进口的FSH超排后有效采卵率为94.8％、头均可用胚胎数为7．0、可用胚胎率65.7％，两者差异不显著。（P〉0．05）．但进口FSH的较高.使用国产和进口的FSH在不同年龄的供体牛超排效果比较，经产牛的比青年牛的较好，并且头均可用胚胎数差异显著（P〈0．05）.国产的头均可用胚胎数8.1枚，进口的头均可用胚胎数7.4枚。     

奶牛超数排卵试验

1989～1990年在山东省东营市黄河农场和胜利油田管理局莱建奶牛场,应用FSH+PGF_(2α),PMSG+抗PMSG血清+PGF_(2α)两种药物系列,对奶牛进行超数排卵试验,超排供体牛37头,冲卵36头,成功率为97.3％;冲出卵总数为316枚,每头平均8.7枚,其中可用胚胎217枚,每头平均为6.0枚,可用率为68.6％。     

崇明白山羊超数排卵和胚胎冷冻初步研究

采用CIDR-FSH-PG-hCG法对崇明白山羊进行超数排卵,比较不同来源FSH的超数排卵效果,并对获得的胚胎进行冷冻保存和解冻后胚胎移植.结果表明:新西兰和宁波产FSH组分别获得75.0%和85.7%的发情率.新西兰FSH组左右卵巢平均分别获得8.67个和9.67个排卵点,宁波FSH组平均获得7.33和6.33个排卵点.新西兰FSH和宁波FSH组分别平均获得9.67枚和8.00枚可用胚胎.OPS冷冻胚胎经解冻后,获得了80.77%的形态正常率.经胚胎移植,3头(3/5)山羊顺利妊娠,产下5头小羊.     

南阳牛超数排卵研究

采用FSH共超排南阳牛60头次,共采卵258枚(头均4.87±3.69),其中可用胚153枚(头均2.89±2.58),育成牛超排反应有效率高于经产牛(86.2%︰71.0%),经产牛采卵数多于育成牛(头均5.22±4.53︰头均4.5±2.58),可用胚数也多于育成牛(头均3.07±3.06︰头均2.69±2.02),FSH的适宜剂量经产牛为340mg/头,育成牛为300mg/头。季节对南阳牛超排没有明显影响。     

新疆细毛羊超数排卵效果研究

[目的]提高并稳定新疆细毛羊超数排卵效率,为以生产2~8-细胞期胚胎的转基因研究提供素材.[方法]分别从激素生产厂家、供体年龄、激素处理方案等3个方面探讨新疆细毛羊的超数排卵效果,确定新疆细毛羊超数排卵供体羊的最佳年龄及其有效处理方案.[结果]不同生产厂家的激素对新疆细毛羊黄体数和可用胚胎数均存在极显著影响(P<0.01):1.5周岁以内的新疆细毛羊超排后,其黄体数(6.17个/只)和可用胚胎数(1.50枚/只)均极显著低于2.0周岁以上的新疆细毛羊(黄体数12.24个/只,可用胚胎数8.30枚/只)(P<0.01);FSH剂量在150~200 U/只范围内不影响超排效果和胚胎质量( P>0.05):FSH+PMSG超排处理的新疆细毛羊黄体数(6.05个/只)和可用胚胎数(1.76枚/只)则显著低于FSH+PG超排处理(黄体数17.11个/只,可用胚胎数10.38枚/只)(P<0.01).[结论]新疆细毛羊超数排卵时宜选用2.0周岁以上的供体羊,FSH剂量控制在150~200 U/只,若能与PG联合使用其超排效果更好,但不宜与PMSG联合使用.     

Experiment on super-ovulation in Xinjiang fine-wool sheep

[目的]提高并稳定新疆细毛羊超数排卵效率,为以生产2～8-细胞期胚胎的转基因研究提供素材.[方法]分别从激素生产厂家、供体年龄、激素处理方案等3个方面探讨新疆细毛羊的超数排卵效果,确定新疆细毛羊超数排卵供体羊的最佳年龄及其有效处理方案.[结果]不同生产厂家的激素对新疆细毛羊黄体数和可用胚胎数均存在极显著影响(P＜0.01):1.5周岁以内的新疆细毛羊超排后,其黄体数(6.17个/只)和可用胚胎数(1.50枚/只)均极显著低于2.0周岁以上的新疆细毛羊(黄体数12.24个/只,可用胚胎数8.30枚/只)(P＜0.01);FSH剂量在150～200 U/只范围内不影响超排效果和胚胎质量( P＞0.05):FSH+PMSG超排处理的新疆细毛羊黄体数(6.05个/只)和可用胚胎数(1.76枚/只)则显著低于FSH+PG超排处理(黄体数17.11个/只,可用胚胎数10.38枚/只)(P＜0.01).[结论]新疆细毛羊超数排卵时宜选用2.0周岁以上的供体羊,FSH剂量控制在150～200 U/只,若能与PG联合使用其超排效果更好,但不宜与PMSG联合使用.     

奶牛重复超排试验观察

为探讨中国荷斯坦牛多次重复超排的效果,对9头供体奶牛进行6次重复超排,每次超排间隔3个月左右,采胚47头次,生产可用胚胎292枚,平均每头次冲胚获可用胚6.2枚。每批获可用胚胎数依次为49,50,46,48,55,44枚。可用胚胎数并未随超排次数的增加而呈现下降趋势,说明荷斯坦牛以3个月的间隔多次重复超排是可行的。     

奶牛超数排卵效果观察

采用加拿大生产促卵泡素(FSH FOLLTROPIN-V)以3头荷斯坦母牛进行超数排卵处理，逐日递减注射，连注4d，总剂量360mg。结果3头供体牛共采得卵(胚)27枚，其中可用胚26枚，退化胚1枚，平均每头获可用胚8．67枚(26／3)，效果较好。     

延边黄牛胚胎移植及诱发双胎试验

为了研究适于延边黄牛的超数排卵及胚胎移植技术,选择2头供体牛和7头受体牛,进行了FSH-PG超数排卵和胚胎移植试验.结果表明,供体获得7枚可用胚胎,其中诱发双胎(人工授精后移植胚胎)3枚,单胚移植4枚,妊娠5头,移植率71.4%,诱发双胎率66.7%.     

关中奶山羊超数排卵的研究

用FSH恒量法、FSH减量法、FSH和LH混合法及PMSG法处理获得头均可用胚数分别为5.5,5.8,4.0和3.2枚;从情期的6～8,9～11,12～15和16～18d开始超排获得的头均可用胚数分别为3.4,5.7,5.5和4.1枚;对2,3,4,5和6岁以上供体超排获得的头均可用胚数分别为3.2,4.7,5.1,5.7和2.9枚;在9,10,11,12月和次年1月超排获得的头均可用胚数分别为2.8,4.7,5.8,5.3和3.2枚。结果证明,在10～12月,从情期的9～15d开始,采用FSH恒量法或FSH减量法对3～5岁的关中奶山羊进行超排可获得更好效果。