共查询到20条相似文献,搜索用时 328 毫秒
1.
Taqman-LNA荧光PCR快速检测肉制品中马源性成分的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]建立快速检测肉制品中马源性成分的Taqman-LNA荧光PCR方法。[方法]基于马的种属保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立可快速检测肉制品中马源性成分的Taqman-LNA荧光PCR检测方法。通过对特异性、灵敏度、重复性的检测,对建立的方法进行评价。[结果]建立的Taqman-LNA荧光PCR方法灵敏,可检测到马肉DNA最低限为1.4 pg;特异,与猪、牛、羊、鹿、驴、兔、鸡、鸭、鹅、虾无非特异性反应;可重复,批内和批间的变异系数均小于2%;准确,应用该法检测人为掺入马肉的肉制品,检测结果与预期相符。[结论]本研究建立的方法具有灵敏度高,特异性强,重复性好等优点,适合于肉制品中马源性成分检测。 相似文献
2.
动物产品中猪源性和牛源性成分双重荧光PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]建立双重荧光PCR法,检测动物产品中猪、牛源性成分。[方法]分别针对猪、牛线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守基因,设计特异性引物与探针,通过对反应体系和反应条件的优化筛选,建立了双重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成2种动物源性成分的检测。并对该方法的特异性、敏感性进行评估。[结果]对16种不同的动物DNA进行检测.仅猪、牛源性成分收集到相应的典型的S型扩增曲线,对猪、牛二联模板的检测,可同时收集到相应模板的扩增曲线.其余14种动物源性成分未发现扩增曲线。双重荧光PCR对猪肉、牛肉模板的最低检出限均为10^-5,与相应的单重荧光PCR方法的检出限一致。[结论]该方法特异性强,敏感性高,适用于肉制品、奶制品、饲料等动物源性产品的检测。 相似文献
3.
《中国兽医杂志》2017,(12)
为了建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分的多重Taqman-LNA荧光PCR,给打击肉制品掺假提供技术手段。针对动物线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和Taqman-LNA探针,建立同时检测肉制品中猪、鸡、鸭源性成分的多重荧光PCR方法,并应用于市售肉制品的检测。建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中上述动物源性成分,与牛、羊、驴、兔、鹅等动物源性成分无交叉反应,其检测限均达到肉含量的0.001%。对170份市售肉制品检测发现,有42份样品检出与标签标示成分不符的肉种成分,样品不合格率为24.7%。本研究建立的多重Taqman-LNA荧光PCR方法可同时检测肉制品中猪、鸡、鸭3种动物源性成分,具有特异、快速、经济、高效等优点,可适应于肉制品中多种肉源性成分的高通量检测。 相似文献
4.
5.
《中国兽医杂志》2015,(9)
为了建立快速鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分的改良荧光PCR方法,针对鸭线粒体基因组的保守序列,设计特异性引物和锁核酸(LNA)探针,建立快速鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分的Taqman-LNA荧光PCR方法,通过设定合理的掺假判定标准,解决肉污染导致的掺假误判。结果建立的方法对鸭肉DNA的检测灵敏度高达1.64 pg;与猪、牛、鸡等11种动物的DNA无非特异性反应;应用该法检测模拟掺假肉制品,结果与预期相符;应用该法检测80份市售肉制品,发现有5份产品掺有鸭源性成分而标签未标示。表明本试验建立的方法特异、敏感,可快速、准确鉴别肉及肉制品中掺假鸭源性成分。 相似文献
6.
7.
8.
9.
根据线粒体基因的特异性鉴别检测饲料中的动物源性成分 总被引:8,自引:1,他引:8
为了防止海绵状脑病疫区和痒病疫区的反刍动物源性饲料入手动物食物链,继而进入人类消费的食物链,因而,非常用必要对贸易往来中的肉骨粉品种来源进行鉴定检测。我们运用聚合酶链反应技术(Polymerase Chain Reaction,PCR),以检测不同种动物特异性线粒体基因片段为目标,分别建立了从动物源性饲料中鉴别检测猪、鸡、马成分的方法。该方法具有灵敏度高、快速和特异性强的优点,可作为动物源性饲料中猪、鸡、马源性成份鉴别检测的常规方法之一。 相似文献
10.
《中国畜牧杂志》2017,(1)
实验旨在建立快速检测驴、马和狐狸源性成分的方法。以驴、马和狐狸的线粒体保守序列16S r RNA基因为靶基因,设计通用引物和以不同荧光素标记的特异Taq Man探针,构建与通用引物共用的阳性扩增内标(Internal Amplification Control,IAC)作为PCR监控反应体系。通过优化PCR反应体系和条件,建立能同时检测驴、马和狐狸源性成分的四重实时荧光PCR方法。结果表明:利用驴、马、狐狸、牛、猪、羊、水貂、狗、鸡、鸭、大豆、小麦、玉米等物种检测没有交叉反应,证明该方法特异性高,准确性好。该方法模板DNA检测灵敏度为0.01 ng。本研究建立的驴、马和狐狸源性四重荧光实时PCR检测体系灵敏度高、特异性强,能有效鉴别动物产品中驴、马和狐狸的源性成分,也可用作相关动物皮张真伪的鉴别方法。 相似文献
11.
为鉴定和区分饲料及动物产品中牛、山羊、绵羊源性成分,根据线粒体DNA(mitochondrial DNA,mtDNA)种间保守序列,设计合成了3对特异性引物与TaqMan探针,通过对荧光PCR反应体系和反应条件的优化筛选,建立了三重荧光PCR方法,在同一个荧光PCR反应中完成3种动物源性成分的检测。用该方法对16种不同源性的动物DNA进行检测,结果表明能特异地鉴别检测出牛、山羊和绵羊源性成分,且敏感性比现行国标PCR法高100倍。该方法适用于饲料、肉制品、奶制品等动物源性产品的检测。 相似文献
12.
13.
为建立一种更加准确、敏感的猪附红细胞体检测方法,本试验根据猪附红细胞体特异的DNA序列(AJ504999)设计2对巢式PCR引物,建立了巢式PCR检测方法。筛选该检测方法的最佳反应条件,并进行了特异性、敏感性及临床样本检测试验。结果表明,建立的巢式PCR对猪附红细胞体基因组DNA能扩增出特异性片段,而对弓形虫、链球菌、牛瑟氏泰勒虫、牛附红细胞体基因组DNA扩增反应结果均为阴性;DNA最低检测量为0.124 fg/μL;通过对55份临床样本的检测,该巢式PCR较常规PCR的阳性检出率高23.7%。本试验为猪附红细胞体病的诊断提供了一种更为特异、敏感的检测技术。 相似文献
14.
根据牛特异性线粒体DNA片段,设计合成1对引物,以生、熟牛肉为材料,建立了肉制品中牛源性成分的PCR检测方法,并用该法对市售的67份牛肉制品进行检测。结果显示,所检牛源性成分在271 bp处出现预期的条带,扩增片段经Sau3AⅠ酶切分析确认,获得的214和57 bp片段与预期一致;运用该引物均可扩增出水牛肉、牦牛肉、奶牛肉、黄牛肉单一的相同大小的DNA条带,而对羊、马、狗、驴、兔和鸭等14种动物肉的DNA扩增则呈阴性,其检测灵敏度达到53.2 fg/μL DNA;利用该法对67份牛肉制品进行检测,检出率为100%。结果表明,该法快速简便,且具有较高的特异性和敏感性,可用于市售牛肉制品中牛源性成分的鉴定。 相似文献
15.
目的建立可对狮DNA进行特异性检测的PCR方法,应用在检验检疫过程中获得的狮疑似样品和保护执法工作中难以检查辨认的狮产品进行物种鉴定。方法针对狮属动物线粒体细胞色素b(Cytb)基因设计特异性引物,用该引物分别对从亚洲狮、非洲狮和虎、豹、熊等14种非狮源性哺乳动物的肌肉、血液、毛发和肉骨粉中提取的DNA进行PCR(聚合酶链反应)扩增。结果试验表明所设计的引物对狮DNA具有特异性,从而达到了对该物种进行特异性检测鉴定的目的。检测灵敏度可达到在骨粉中检出0.5%含量的狮源性成分。结论该PCR方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于狮源性制品的检测鉴定。 相似文献
16.
旨在建立一种快速、灵敏、可以同时鉴定食品中多种动物源性成分的方法。根据线粒体环氧酶3(cox3)、细胞色素b(cytb)和线粒体d-loop,分别设计鸭、牛和猪特异性引物序列。应用SYBR实时荧光PCR技术,分析熔解曲线,根据出峰位置的不同,定性识别鸭、牛、猪源成分。单重PCR试验测得鸭、牛和猪PCR扩增产物熔解曲线峰值对应的熔解温度分别为(83.5±0.5)℃、(79.5±0.5)℃和(76.5±0.5)℃。三重PCR体系扩增产物的吸收峰与单重PCR体系扩增产物的吸收峰对应的熔解温度吻合,说明试验的可行性。此外,试验检测鸭成分的灵敏度为0.1%,牛成分的为0.1%,猪成分的为1%。结果表明,该方法成本较低、灵敏度较高,可用于同时定性检测食品中鸭、牛和猪3种动物源性成分。 相似文献
17.
为快速鉴别牛羊肉中是否掺杂了鸡肉、鸭肉等其他肉类,基于Genie II等温扩增荧光检测系统,建立了检测鸡鸭源性成分的荧光LAMP检测方法。同时,优化了反应体系和条件,进行了特异性和灵敏度试验,以及市场检测应用。结果显示:鸡鸭源性成分荧光LAMP检测方法具有很强的特异性,除了相对应的动物源性成分外,其他13种动物源性成分均呈阴性;该方法检测鸡、鸭源性成分的灵敏度分别为0.88、3.32 pg/μL,均高于普通PCR 10倍;加入双加速引物,该方法的反应时间仅为15~20 min,10 min左右时就可进行实时初判;市场应用检测结果与普通PCR的符合率为100%。结果表明,本方法特异、灵敏,所需时间短,可用于鸡鸭源性成分的市场快速检测。 相似文献
18.
饲料中鱼源性成分真实性鉴别研究 总被引:2,自引:0,他引:2
研究旨在建立标准化的饲料中鱼源性成分的PCR检测方法,以形成行业标准推广使用.应用鱼源性引物对35种鱼类、24种非鱼类动物和10种植物样品进行PCR检测,只在35种鱼类中出现224 bp特异扩增条带,在其他的非鱼类动植物DNA中未出现扩增条带.实验表明,PCR检测方法具有特异性,检测限为0.1 ng DNA和0.1 %(W/W).应用该方法对上海口岸进口的100个鱼粉样品进行检测,均能检出鱼源性成分.研究建立的标准化饲料中鱼源性成分PCR检测方法能应用于日常检验检疫工作,可推广使用. 相似文献
19.
实时荧光定量PCR检测畜禽肉制品中鸭源性成分 总被引:3,自引:0,他引:3
根据鸭mtDNA COX基因上的保守序列设计特异性引物和TaqMan探针,建立实时荧光定量PCR用于检测畜禽肉制品中的鸭源性成分。结果表明,建立的方法特异性强,与鹅、鸡、羊、牛等15种动物DNA无非特异性扩增;灵敏度高,可检测1.0pg/μL鸭源DNA的存在;重复性好,同DNA浓度所测得Ct值的变异系数均小于3%;应用该法对模拟混合样品进行检测,结果与预期相符,且常见肉类DNA的存在并不影响该法对鸭源性成分检测的灵敏度。说明本试验建立的鸭源性成分实时荧光定量PCR法特异、敏感、稳定,可快速准确检测畜禽肉制品中含有的鸭源性成分。 相似文献