杜仲组织培养的研究进展

为了解杜仲组织培养的研究现状,对杜仲组织培养的研究进行了综述。杜仲是通过器官发生途径获得再生植株的,所用的外植体有叶片、叶柄、腋芽、胚轴、带芽茎段、茎尖和子叶等7种,除子叶外都成功组培获得了小植株。基本培养基、激素和附加营养成分等是影响组织培养的重要因素,其中,基本培养基以MS使用最多,初代培养中占83.3%,继代培养也有66.7%,而66.7%的生根培养基采用的是1/2MS;芽的诱导中使用的激素有BA、NAA、IBA、BAP、IAA、KT、TDZ等7种,其中MS+0.1mg/L6-BA效果最好,诱导率达到96.7%;BA、NAA、IAA、BAP、GA3等5种激素对芽的增殖起作用,其中以MS+2.0mg/LBA+0.05mg/LNAA效果最好,增殖系数达3.69;而生根所需激素主要有NAA、IBA、GA,其中以IBA1.5mg/L或2.0mg/L效果最好,生根率达到92.5%;杜仲组织培养中常用的附加营养成分有酵母浸提物和谷氨酰胺等。     

花花柴组织培养与植株再生体系的优化

【目的】探讨植物生长调节剂、外植体及NaCl等因子对花花柴愈伤组织诱导、分化与植株再生的影响,并优化花花柴的再生植株体系,建立直接从茎端诱导丛生芽的植株再生体系。【方法】对生长约为2个月的花花柴植株进行不同的处理。采用不同浓度组合的细胞分裂素6-BA(6-Benzylaminopurine)和生长素NAA(α-Naphthaleneacetic acid)的MS(Murashige and Skoog)培养基(0.8%(w/v)琼脂粉)。【结果】最佳的愈伤组织诱导培养基为MS+6-BA 1.2 mg/L+NAA 0.6 mg/L;愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA3.0 mg/L+NAA2.0 mg/L;从外植体直接诱导不定芽的最佳培养基是MS培养基;诱导根的最佳培养基是1/2MS+NAA mg/L。【结论】花花柴叶片是愈伤组织形成的最佳材料,NaCl胁迫对愈伤组织的诱导有一定的抑制作用。     

生菜组织培养再生体系的建立

以“四季耐热抗抽薹”生菜为试材,10d苗龄的真叶为外植体,MS培养基为基本培养基,附加不同浓度的6-BA和NAA激素配比,经愈伤组织诱导、芽分化、生根3个步骤的离体培养,建立生菜快速、高频再生体系,以期为进一步研究生菜遗传转化奠定基础.研究表明:该品种最佳诱导外植体分化培养基为MS+0.15 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,出愈率达到100％,出芽率达到87％.     

杜仲RAPD反应体系的优化

以杜仲优良品种的幼叶为材料提取总DNA,采用单因素梯度试验筛选法进行了杜仲RAPD反应的优化.确定的优化反应体系为:25 μL反应体积中,10×buffer 2.5 μL,TAqDNA聚合酶1 U,随机引物(5 μmol/L)2.0 μL,MgCl2(25 mmol/L)2.0 μL,dNTP(2.5 mmol/L)2.0 μL,模板2 mg/L,补ddH2O至25 μL.扩增程序为:94 ℃预变性5 min,94 ℃变性30 s,37 ℃退火30 s,72 ℃延伸90 s,35个循环,72 ℃延伸10 min,4 ℃保持产物.在此条件下得到的RAPD图谱清晰、稳定,为进一步利用该技术开展杜仲有关分子生物学研究提供了技术参考.     

红掌组织培养再生体系建立的研究

以红掌"骄阳"幼嫩叶片为材料,筛选出红掌愈伤组织诱导、不定芽分化、生根的最佳培养基及激素配比。结果表明:红掌愈伤组织诱导的最佳培养基为改良MS+6-BA 1.0 mg/L+2.4-D0.5 mg/L,不定芽分化培养基为改良MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L,生根培养基为改良MS+IBA 0.6 mg/L+IBA 0.3 mg/L,生根率达到100%。     

悬铃木再生组织培养体系的建立

为优化从而建立悬铃木再生的组织培养体系,本研究以茎段作为外植体,设计不同的实验方式进行其诱导,分析消毒时间、激素配比、生根培养等对悬铃木再生的组织培养体系的影响,筛选出不同阶段的最佳培养基。结果表明:悬铃木茎段的最佳的消毒条件是0.1%HgCl2消毒17min,最适初代培养基为MS+ZT4mg/L+IAA1.0mg/L,增殖培养基为MS+ZT3mg/L+IAA1.0mg/L,生根培养基为MS+IBA0.1mg/L。     

杜仲组织培养中杜仲胶的提取与检测研究

用苯浸提－甲醇沉淀法,从仲愈伤组织干粉中提取杜仲胶。仲胶的平均得率为２．４５％。比较了不同浸提时间和不同浸提温度对胶产量的影响。２４－２８ｈ是最佳 浸提高时间,２８－３５℃最于胶的提取。经红外光谱和紫外光谱检测,证明了愈伤组织中的杜仲胶与原植株中的相同。     

白三叶高频组织培养再生体系的研究

高频稳定的组织培养再生体系是开展白三叶遗传转化的重要前提。为进一步优化白三叶再生体系,本研究以白三叶子叶节为外植体,对影响丛生芽诱导、增殖的激素种类(2,4-D、KT、6-BA和NAA)和浓度进行了优化;同时研究了不同基质配比对组培苗移栽成活率的影响。结果表明:在含6-BA 0.5 mg.L-1和NAA0.1 mg·L-1诱导培养基上丛生芽诱导率最高,达68.33%,且生长状态最好;在含IBA 0.2 mg·L-1的1/2MS培养基上诱导生根率为90%以上,平均每株生根数达6条以上;移栽至腐殖土和珍珠岩(2:1)混合基质中的再生苗成活率可达85%。本研究结果可为建立豆科植物转化体系、加快白三叶基因工程改良及创制白三叶新种质奠定基础。     

杜仲组织培养的研究

为了筛选出杜仲(Eucommia ulmoides)组织培养的最优培养条件,主要从外植体的选择、基本培养基、植物激素、光照条件、其他理化条件等方面对杜仲愈伤组织的诱导、增殖及分化培养的影响进行了综述,分析了杜仲组织培养过程中常见的问题并提出了解决方案,以期为杜仲快繁体系的建立提供理论依据。     

杜仲杂交子代的组织培养及无性系化

以杜仲人工杂交获得的种子为材料,进行了组织培养及无性系化研究.结果表明:无茵苗培育的方法可以提高杜仲种子的发芽率;子叶节不定芽诱导的最适宜培养基为MS+6-BA2mg·L-1,诱导率为85;单节茎段快速增值的最适宜培养基为MS+6-BA2mg·L-1,增值系数为3.80;而最适宜单节茎段生长的培养基为MS+6-BA1 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1,生长系数为3.71;无根苗的最佳生根培养基为1/2MS+IBA1.5 mg·L-1,生根率达90.     

枸杞组织培养再生体系优化

以"宁杞2号"初春茎段为外植体,研究了不同灭菌时间对枸杞茎段无菌外植体建立的影响及不同激素、不同浓度组合对枸杞茎段丛生芽的诱导、增殖和生根的影响。结果表明:外植体灭菌采用升汞消毒7 min效果最佳,其污染率和死亡率分别为9.2%和15%;丛生芽诱导的最适培养基为6-BA 0.5 mg.L-1+NAA0.5 mg.L-1,其侧芽萌发率可达90%;芽增殖的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg.L-1+NAA 0.6 mg.L-1+活性炭0.5 g.L-1,其增殖系数可达4.68;诱导生根的最佳培养基为1/2MS+IBA 0.5 mg.L-1,芽苗的生根率和生长数分别为95.0%和11.6,且根的生长速度较好,根系粗壮、愈伤较少。     

杜仲愈伤组织的诱导及植株再生的研究

在附加不同浓度ＮＡＡ,６—ＢＡ的ＭＳ培养基上对杜仲的下胚轴和子叶进行愈伤组织的诱导并获得两类不同的愈伤组织,一类是白色的结构松散的非胚性愈伤组织,虽然能继代培养,但在附加较高浓度的６─ＢＡ的ＭＳ培养基上都不能再生植株;另一类是黄绿色的结构紧密的有颗粒状突起的胚性愈伤组织．在附加适量的６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能较容易再生小植株。实验表明,杜仲的下胚轴和子叶在附加１．０ｍｇ／ＬＮＡＡ和１．０ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上能１００％诱导成胚性愈伤组织;胚性愈伤组织在附加０．５ｍｇ／ＬＮＡＡ和２．５ｍｇ／Ｌ６—ＢＡ的ＭＳ培养基上培养,植株再生频率高达９２％;小植株转移到附加１．５ｍｇ／Ｌ的ＩＢＡ的１／２ＭＳ培养基上,１５ｄ左右长出较粗的根。     

无花丹参叶盘组织培养再生体系的优化选择

以丹参极品———无花丹参幼嫩叶片为外植体,对丹参的组织培养及植株再生体系进行优化选择,筛选出了能直接诱导芽再生的培养基MS+6-BA及直接诱导生根的培养基1/2MS+IBA。结果表明,该体系与通过愈伤组织获得的再生体系相比,提高了其有效化学成分的含量,为改良丹参品质及产量提供了技术支撑。     

杜仲优树的组培繁殖技术

以本校杜仲优树采穗圃的2号优树(代号黔9)的新梢为试材进行组培繁殖,不同组合的培养基上试验得出,MS+6-BA1.0+NAA0.2+蔗糖4对嫩梢诱导率最高,达82.5;MS+6-BA1.0+BAA1.0对茎尖顶梢诱导率达87.5,MS+IAA1+BA1对幼梢的促长效果最佳.有效的生根培养基为1/2MS+GA0.5+蔗糖6,生根率20.7.     

菘蓝组培再生体系的建立

以菘蓝(Isatis indigotica)无菌苗的叶片和叶柄为外植体,分别接种到添加不同生长调节剂浓度的MS培养基上,研究不同生长调节剂配比对菘蓝愈伤组织诱导与分化的影响,建立菘蓝组培再生体系。结果表明,叶片是菘蓝愈伤组织形成的最佳外植体,菘蓝愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L,愈伤组织分化的最佳培养基为MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L。以1/2MS培养基添加0.1 mg/L NAA可使再生植株的生根率达到92.3%。