福建省毛豆根结线虫种类鉴定及初侵染来源

福建省漳州市一基地毛豆(品种:‘毛豆64’)苗期发生严重根结线虫病, 发病株率为78%。为明确其病原的种类及其初侵染来源, 通过形态学、分子生物学方法进行了种类鉴定。研究结果表明, 该线虫雌虫、雄虫、2龄幼虫(J2)的形态学特征与测量值和拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicola相吻合;基于线虫rDNA-ITS序列和28S rDNA D2D3序列构建的系统发育树进一步确定其为拟禾本科根结线虫;室内接种试验确定了其致病性。这是首次在福建省毛豆上发现拟禾本科根结线虫。在毛豆基地畦地残留的前作水稻稻茬根内和根际土壤中均分离到大量J2s, 经特异性引物扩增确定为拟禾本科根结线虫, 研究认为前作水稻根系受拟禾本科根结线虫侵染, 在灌溉淹水状态下线虫2龄幼虫和卵在根内与土壤中长期存活, 成为轮作毛豆根结线虫病的初侵染源。     

水稻拟禾本科根结线虫发生与防治

拟禾本科根结线虫是严重影响水稻产量的植物寄生线虫之一,已成为制约中国及亚洲地区水稻产量的重大问题。拟禾本科根结线虫寄主范围广泛,可危害高地、低洼地和深水水稻;通过巨细胞从水稻根中摄取营养物质,从而在根系上形成许多弯钩状根结;其食道腺分泌物可以直接对水稻产生危害,影响水稻细胞代谢和免疫,从而影响水稻产量。目前水稻抗根结线虫病的品种较少,主要通过化学药剂在苗床进行防治。本文对拟禾本科根结线虫的寄主范围、危害特性、侵染特点、致病机制及防治方法等进行了综述,并对将来通过基因编辑等遗传工程技术提高水稻品种抗性的策略进行了展望,以期为我国水稻拟禾本科根结线虫的防治提供理论依据。     

拟禾本科根结线虫形态和分子鉴定

在浙江杭州富阳区中国水稻研究所试验田水稻根际土壤中发现了大量根结线虫2龄幼虫和少量雄虫。2龄幼虫的形态学特征与已报道的拟禾本科根结线虫(Meloidogyne graminicola)基本一致。进一步通过对核糖体DNA(rDNA)18S、28S和ITS基因,以及线粒体COⅠ基因进行扩增和测序,并在Genbank中与已登录的拟禾本科根结线虫序列比对,发现其相似度高达99%～100%。在Genbank中登录其序列并构建系统进化树后,发现rDNA ITS和线粒体COⅠ可以作为快速鉴定拟禾本科根结线虫的基因,能将其与其近似种完全区分。     

水稻拟禾本科根结线虫生防细菌的分离鉴定与防治效果评价

为获得对水稻拟禾本科根结线虫具有较高杀线虫活性的生防细菌,初筛以马铃薯腐烂茎线虫、复筛以拟禾本科根结线虫2龄幼虫为靶标线虫,采用直接触杀法对土壤分离细菌进行筛选。获得8株具有较高杀线虫活性的菌株,其中D45菌株发酵液的杀虫活性最好。其发酵液上清5倍稀释液处理24、48 h后,马铃薯腐烂茎线虫和拟禾本科根结线虫2龄幼虫的死亡率分别为69.8%、72.1%和60.9%、70.4%。盆栽试验和田间试验表明,在拟禾本科根结线虫侵染前采用D45菌株发酵液进行土壤处理,可显著减少水稻根结数。D45高活性菌株产生的杀线虫物质对蛋白酶稳定,但不耐热和酸。经生理生化测定结合16S rRNA基因序列分析,D45菌株为巨大芽胞杆菌Bacillus megaterium。D45菌株对防治水稻拟禾本科根结线虫具有应用潜力。     

水稻中MPK5稳态失衡抑制拟禾本科根结线虫与水稻的亲和互作

 拟禾本科根结线虫(Meloidogyne graminicola)为水稻的重要土传病原,可严重为害水稻。本研究旨在探究水稻中丝裂原活化蛋白激酶5(MPK5)稳态失衡对拟禾本科根结线虫与水稻亲和互作的影响,并初步探讨其机制。首先,通过线虫侵染试验发现,在水稻中超表达和沉默MPK5 引发的MPK5 稳态失衡均可抑制拟禾本科根结线虫与水稻的亲和互作。qRT-PCR 分析结果显示,与水稻野生型不同,在MPK5 超表达和沉默水稻株系中MPK5 均受拟禾本科根结线虫诱导表达。同时,拟禾本科根结线虫可抑制MPK5 超表达株系中几丁质酶的表达,但诱导MPK5 沉默株系中病程相关基因PR5 与PR10 的表达。上述试验结果表明,MPK5 稳态失衡可导致MPK5 响应拟禾本科根结线虫的侵染,且在MPK5 超表达和沉默水稻株系中MPK5 介导水稻产生拟禾本科根结线虫抗性的机制不同。     

中国南方稻田及其周边环境根结线虫种类鉴定

为了解根结线虫在中国南方稻区的分布和种类, 从15个省(直辖市/自治区)采集1 181份土样, 经生物测定发现312份土样中种植的水稻或番茄幼苗根系会产生根结, 阳性总检出率为26.42%。利用线虫特异性引物从171份阳性样品中鉴定出6种根结线虫:拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicola、北方根结线虫M.hapla、花生根结线虫M.arenaria、爪哇根结线虫M.javanica、象耳豆根结线虫M.enterolobii和南方根结线虫M.incognita, 分别占鉴定总样品数的88.89%、41.52%、29.82%、10.53%、4.09%和3.51%。被1、2、3、4、5、6种根结线虫混合侵染的土样比例分别为42.11%、41.52%、12.87%、2.92%、0.58%和0, 其中最常见的为拟禾本科根结线虫单独侵染(34.50%)、拟禾本科根结线虫与北方根结线虫(22.81%)或花生根结线虫(13.45%)混合侵染。本研究结果将为制定相应的传播阻断策略和防控措施提供参考。     

不同地理来源的拟禾本科根结线虫对温度胁迫的耐受性

为明确拟禾本科根结线虫不同地理群体对温度胁迫的耐受性, 本文比较了河南新乡?湖南平江?湖南益阳?湖南望城?广西融安?广西临桂?广东湛江?海南临高等8个地理群体的2龄幼虫和卵对0?4℃和37℃的耐受性以及2龄幼虫经4℃预处理5 d后在0℃下的存活率?结果表明:不同地理来源的拟禾本科根结线虫对温度的耐受性存在差异?2龄幼虫在0℃和4℃低温下存放不同时间, 其死亡率由低到高为:新乡群体<平江?望城?益阳群体<融安?临桂?湛江?临高群体, 表现出随纬度增加耐寒性增强的趋势; 不同纬度群体卵在0℃或4℃存放不同时间后其孵化率由高到低为:新乡?平江?望城?益阳?融安?临桂群体>湛江?临高群体?卵经37℃高温处理10 d后, 低纬度的临高群体的孵化率明显高于其他纬度较高的地理群体, 显示临高群体对高温具有较强的适应性?4℃低温预处理可以提高各群体在0℃下的存活率, 湖南平江?望城?益阳群体的存活率提高最明显, 表明湖南3个群体对低温具有较高的适应性?     

近年水稻主要线虫病害的研究进展

目前,以拟禾谷根结线虫Meloidogyne graminicola、水稻干尖线虫Aphelenchoide besseyi、水稻潜根线虫Hirschmanniella oryzae、水稻茎线虫Ditylenchus angustus和旱稻孢囊线虫Heterodera elachista为主的水稻寄生线虫侵染水稻以及其它禾本科作物引致的线虫病害,已造成了严重的经济损失。近年来,对拟禾谷根结线虫的致病机制和寄主的防御机制等方面的研究已取得了显著进展,但对其它水稻寄生线虫与寄主互作机制的研究还存在较大空白。水稻寄生线虫的防治多依赖化学农药,抗性品种和生物防治等措施的实施存在一定的局限性。本文对上述5种主要水稻寄生线虫病的发生为害、致病机制以及防治方法等进行了综述,并对水稻寄生线虫致病机理的研究以及抗性品种、生物防治和诱导化合物的应用进行了探讨。     

湖南省辣椒上首次发现象耳豆根结线虫

应用线虫比较形态学、同工酶技术和IGS-PCR技术,对采自湖南省永州地区辣椒上的根结线虫进行种类鉴定。结果表明,该病原线虫为象耳豆根结线虫(Meloidogyne enterolobii),这是首次在湖南地区发现象耳豆根结线虫。     

拟悬铃木根结线虫及其相似种的rDNA-ITS-RFLP分析

本文用特异性引物F195和V5367,对拟悬铃木根结线虫和花生根结线虫的核糖体DNA内转录间隔区（rDNA-ITS）进行了PCR扩增,扩增产物用5种限制性内切酶Taq Ⅰ、Rsa Ⅰ、Msp Ⅰ、Cla Ⅰ、HaeⅢ进行限制性片段长度多态性（RFLP）分析.Taq Ⅰ、Rsa Ⅰ、Msp Ⅰ、Cla Ⅰ酶切拟悬铃木根结线虫的rDNA-ITS扩增产物所获得限制性酶谱与花生根结线虫的限制性酶谱一致,只有HaeⅢ酶切拟悬铃木根结线虫和花生根结线虫的rDNA-ITS产物所得酶谱不同.rDNA-ITS扩增产物的HaeⅢ酶切图谱可以区分拟悬铃木根结线虫和花生根结线虫.     

成都平原水旱轮作田常见根结线虫调查

调查四川省成都平原地区水旱轮作田根结线虫发生情况及种类分布,为水旱轮作田根结线虫的防治提供依据。对成都平原15个县(市、区)28个乡(镇)共159块水旱轮作田的土样进行根结线虫普遍率调查,利用线虫ITS通用引物和8对根结线虫特异性引物对其中检出率高的地区重新采集的土样进行根结线虫种类分子鉴定。结果表明,成都平原水旱轮作田根结线虫平均检出率为40.25%。重新采集的土样共鉴定出5种根结线虫:拟禾谷根结线虫Meloidogyne graminicola、花生根结线虫M. arenaria、南方根结线虫M. incognita、北方根结线虫M. hapla和爪哇根结线虫M. javanica,各线虫的检出率分别为40.91%、34.09%、13.64%、13.64%和2.27%,其中29.55%的样品由2种以上根结线虫混合侵染。拟禾谷根结线虫和花生根结线虫为该地区优势种群。     

氟吡菌酰胺不同施药方式对水稻拟禾本科根结线虫的防治效果

为评价41.7%氟吡菌酰胺悬浮剂防治水稻拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicola的应用潜力,将氟吡菌酰胺与吡虫啉种衣剂混合后采用种子包衣法及喷洒法研究其对水稻拟禾本科根结线虫的田间防效,并测定了不同施药方法对水稻生长和产量的影响。结果表明,氟吡菌酰胺4.2、8.3、12.5 g（a.i.）/kg种子与吡虫啉18.0 g（a.i.）/kg种子混合包衣处理,播种后35 d其根结抑制率和防效分别为41.0%~51.8%和47.4%~58.6%,土壤中2龄幼虫减退率为38.6%~40.4%,显著高于单施吡虫啉18.0 g（a.i.）/kg种子处理。水稻播种后连续3次以氟吡菌酰胺250.2、375.3、500.4 g（a.i.）/hm²进行土壤喷洒,最后1次施药后7 d,其根结抑制率和防效分别为81.0%~89.9%和65.9%~74.3%,土壤中2龄幼虫减退率为65.4%~73.4%,均显著高于对照药剂克百威1 800.0 g（a.i.）/hm²处理。氟吡菌酰胺各处理对水稻苗期生长均有较好的保护作用,能显著提高千粒重和有效穗数,产量比空白对照增加50.0%~61.2%,保产效果显著。水稻播种后35 d采用氟吡菌酰胺对稻田进行1次喷洒,对水稻具有一定的保护作用,保产效果不明显。表明采用氟吡菌酰胺与吡虫啉混合包衣种子处理及在水稻苗期进行喷洒处理对水稻拟禾本科根结线虫防效显著,具有显著的保产效果。     

河南省怀地黄根结线虫病发生分布与种类鉴定

对河南省焦作市田间辖区种植的怀地黄根结线虫病发生情况进行了调查与研究,并采用作物根结线虫特异性(sequence characterized amplified region SCAR)标记引物对其病原根结线虫PCR扩增检测,结合雌虫会阴花纹的比较形态学和rDNA-ITS区序列测序分析的方法对怀地黄病原根结线虫进行种类鉴定。结果表明,我国焦作地区怀地黄的根结线虫为南方根结线虫[Meloidogyne incognita (KofoldWhite) Chitwood]。本研究首次明确了河南省焦作地区怀地黄病原根结线虫为南方根结线虫。     

陕西省首次发现象耳豆根结线虫危害洛南白菜

采用形态学鉴定、特异性引物鉴定及rDNA-ITS序列分析方法,对采自陕西省洛南县白菜的根结线虫进行了种类鉴定,并结合构建系统发育树,确定了感染洛南县白菜的根结线虫为象耳豆根结线虫。切片观察发现,其会阴花纹整体呈圆形至卵圆形,线纹较密且平滑,背弓较高,为方形或近圆形,无明显侧线。利用象耳豆根结线虫特异性引物进行PCR扩增,得到大小约236 bp的目的条带,说明所鉴定线虫为象耳豆根结线虫。系统发育树结果显示,所鉴定根结线虫与已知的不同地区象耳豆根结线虫聚为同一进化分支,进一步确定陕西省洛南县采集的根结线虫为象耳豆根结线虫。本文首次发现并报道了陕西省有象耳豆根结线虫为害,为该线虫的扩散及防治研究奠定了基础。     

海南岛胡椒病原根结线虫种类鉴定

对海南岛12个县市胡椒产区的27个胡椒病原根结线虫种群进行了纯化培养,运用形态学、同工酶技术及mtDNA扩增技术进行了种类鉴定,结果发现27个纯培养种群中有26个是南方根结线虫,1个是花生根结线虫,南方根结线虫占了96.3％。     

九叶青花椒根结线虫病的病原鉴定

为确定四川省蓬溪县九叶青花椒种植区发病植株花椒根结线虫的种类, 进而为九叶青花椒根结线虫病防治提供依据, 本文根据根结线虫雌虫与2龄幼虫的形态特征及雌成虫的会阴花纹、雌虫酯酶同工酶图谱, 并结合特异性扩增及rDNA-ITS扩增, 根据ITS序列构建系统发育树, 对该地区九叶青花椒根结线虫病的病原进行了种类鉴定。结果表明该病原为南方根结线虫Meloidogyne incognita (Kofold & White) Chitwood。这是我国首次在九叶青花椒上发现南方根结线虫。     

根结线虫在中国的一新纪录种——拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicol

本文描述了采自海南省三亚市葱 ( Allium tistulosum)上的拟禾本科根结线虫 Meloidogynegraminicola。该种雌虫的会阴花纹多为上下长的卵圆形 ;线纹细弱 ,通常平滑连续 ,但在局部区域骤然出现将线纹截断的短线纹 ;侧区不明显 ;侧尾腺口小 ,相隔很近。雄虫的头冠与头区等宽 ,头区很低、光滑或有 2条不明显的环纹。二龄幼虫的尾相当长 ,尾透明末端的界限通常明显 ,尾端细长 ,末端呈细棍棒状。拟禾本科根结线虫在中国属首次报道 ,其寄主葱及其所属的百合科为拟禾本科根结线虫寄主植物的新纪录种和新纪录科     

黄花倒水莲根结线虫病的病原鉴定

2019年在福建省多个地方发现黄花倒水莲Polygala fallax遭受根结线虫的严重侵染,为明确病原线虫种类,运用形态学、rDNA-ITS序列分析及特异引物PCR扩增的方法对分离获得的根结线虫进行种类鉴定。结果表明,该病原线虫为南方根结线虫Meloidogyne incognita。黄花倒水莲根结线虫病在我国为首次报道。     

湖南柑橘根结线虫种类鉴定及特异性PCR检测

根结线虫病是严重危害湖南柑橘生产的主要病害,快速准确地进行病原线虫鉴定,从而制定针对性的防治措施,对柑橘产业的稳定发展至关重要。运用形态学和分子生物学技术对湖南永州地区柑橘根结线虫进行病原种类鉴定,确定其为番禺根结线虫Meloidogyne panyuensis。通过引物设计与筛选,建立了番禺根结线虫特异性PCR检测技术。结果表明,该检测方法特异性好,灵敏度高,操作简单,能有效地从多种根结线虫中特异性检测出番禺根结线虫,为柑橘病原线虫的快速检测鉴定提供技术支撑。     

根结线虫在中国的一新纪录种——拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicol

 本文描述了采自海南省三亚市葱(Allium tistulosum)上的拟禾本科根结线虫Meloidogyne graminicola。该种雌虫的会阴花纹多为上下长的卵圆形;线纹细弱,通常平滑连续,但在局部区域骤然出现将线纹截断的短线纹;侧区不明显;侧尾腺口小,相隔很近。雄虫的头冠与头区等宽,头区很低、光滑或有2条不明显的环纹。二龄幼虫的尾相当长,尾透明末端的界限通常明显,尾端细长,末端呈细棍棒状。拟禾本科根结线虫在中国属首次报道,其寄主葱及其所属的百合科为拟禾本科根结线虫寄主植物的新纪录种和新纪录科。