应用ELISA检测种鸡白血病病毒群特异性抗原

禽白血病是由病毒引起的一种肿瘤性传染病,在自然界中鸡广泛发生的是淋巴细胞性白血病（ＬＬ）。本病在世界各地均有发生,感染率高,发病率低,是危害养鸡业的主要疾病之一。我国５０年代在甘肃省兰州市发现可疑病例,７０年代有１４个省市自治区发现此病［１］。随着养鸡业向集约化高密度饲养的转化,８０年代,北京市有５个县呈散发流行［２］,据抽测某种鸡场禽白血病阳性率高达２８．２％。北京市于１９８５年开始用禽白血病琼脂扩散试验检疫种鸡群,对阳性鸡淘汰处理。１９９７年至１９９８年上半年用ＤＡＳ－ＥＬＩＳＡ方法对本市２…     

种鸡禽白血病净化方案制定的关键问题探讨

禽白血病对种鸡群的危害巨大,且目前尚无商品化疫苗,只能依靠对种鸡群的净化进行防控.文章总结了种鸡禽白血病净化实践中的经验,对禽白血病净化方案制定时需考虑的检测时间点、检测方法和试剂盒的选择、检测样品的选择、净化群体大小的确定及横向传播与硬件隔离等关键问题上进行了探讨.     

4种ELISA试剂盒检测禽白血病病毒效率比较

对采集鸡蛋清、泄殖腔肛拭子以及蛋清或泄殖腔肛拭子检测阳性的鸡只之血清接种DF-1细胞的上清液,分别采用A、B、C、D 4种ELISA试剂盒进行ALV-P27抗原的3次试验检测。结果显示,A试剂盒的蛋清和病毒分离的敏感度最高,B试剂盒对肛拭敏感性最高。A试剂盒的3次试验检测的符合率都在87%以上,并且较稳定,结果可信度高;C试剂盒的符合率在79%以上,相对稳定;B和D试剂盒的符合率都不稳定。     

不同类型鸡泄殖腔棉拭子禽白血病病毒p27抗原检测与病毒分离的相关性分析

为探讨泄殖腔棉拭子或种蛋中禽白血病病毒(ALV)-p27抗原检测与病毒分离检测之间的相关性,对不同类型鸡编号后分别对应采集泄殖腔棉拭子或蛋清后以ALV-p27抗原检测试剂盒检测,同时无菌采集抗凝血接种DF-1细胞进行ALV的分离鉴定。结果显示,人工感染A亚群ALV的SPF鸡群泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测与病毒分离有很高的吻合率,相对于病毒分离法,119次泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测中出现有1例假阳性和3例假阴性;从美国进口的200只祖代肉鸡3次采血DF1细胞分离病毒结果均为阴性,而泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原阳性率依次为4.00%(8/200),2.97%(5/168)和2.61%(4/153),假阳性率为3.30%。相对于病毒分离法,正在实施ALV净化的不同遗传背景地方品系鸡泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原检测的假阳性率高达93.20%~100.00%,还有一定比例假阴性(1/9,1/4,1/3)。本研究大量对应比较的数据表明,相对于血浆病毒分离法,不同类型鸡的泄殖腔棉拭子ALVp27抗原检测法不仅有很高的假阳性率,还有一定比例的漏检率。在种鸡场的ALV净化过程中考虑到成本,不建议以泄殖腔棉拭子作为检测材料。本试验为我国鸡群禽白血病净化检测和临床鉴别诊断提供参考依据。     

蛋种鸡J亚群-禽白血病组织病理学与超微病理学研究

本研究旨在探讨蛋种鸡J亚群-禽白血病的发病机理。针对山东济宁某蛋种鸡场200日龄产蛋鸡的组织病料,分别进行组织病理学与超微病理学研究,检测禽白血病病毒(ALV-J)抗原与抗体,分离病毒,并对其进行单克隆抗体间接免疫荧光试验检测。患病鸡群出现渐进消瘦、瘫痪和最后死亡现象,全群死亡率达10%左右。病鸡的肝、脾等内脏器官明显肿大,表面可见大小不一的灰白色结节;其肾脏、脾脏、肺脏和肝脏等组织中有一定比例的胞质含红色嗜酸性颗粒的骨髓样细胞瘤细胞增生,也发现间质中淋巴细胞和成淋巴细胞浸润增生。同时在脾脏和法氏囊组织中均看到病毒颗粒,有囊膜,直径约100nm。病料中p27抗原和血清中抗体均呈阳性,并分离到ALV-J。以上结果提示该蛋种鸡群发生的肿瘤病是由ALV-J引起的。随着越来越多的禽白血病病例在蛋鸡中确诊,预示着我国蛋鸡业面临新的威胁,值得引起重视。     

进口白羽肉种鸡禽白血病疫情鉴定

2018年以来,某进口品种肉种鸡发生疑似禽白血病病例,流行范围广,危害严重,为确定该次疫情的病原,本研究从辽宁、山东等地发病鸡场采集55份疑似禽白血病病料样品。病理组织切片观察显示,病料样品肝脏和脾脏均有髓细胞样肿瘤细胞增生。针对禽白血病病毒(ALV)、鸡马立克氏病病毒(MDV)和网状内皮组织增生症病毒(REV)的特异性PCR检测结果显示,55份病料样品中ALV阳性样品12份(21.8%),MDV阳性样品1份(1.82%),REV均为阴性。将12份ALV阳性病料样品经处理后接种DF-1细胞进行病毒分离,ELISA检测结果显示有8份ALV群特异性抗原阳性。ALV多重PCR检测结果表明,8个分离株均为J亚群ALV(ALV-J),测序结果显示,8个分离株之间核苷酸序列同源性为99.5%~100%,与A、B、C、D、E亚群ALV的同源性仅为56.5%~58.8%,与ALV-J的同源性为90.7%~96.6%,进一步表明所有分离株均为ALV-J。上述结果表明,引起该次进口白羽父母代肉种鸡发生禽白血病的病原主要以ALV-J为主,该研究结果为疫情的溯源和有效防控奠定了基础。     

蛋用型祖代鸡群禽白血病病毒感染状态的持续观察

为了检测从国外直接进口的蛋用型祖代鸡群是否存在外源性禽白血病病毒(ALV)的感染,将240只1日龄鸡饲养在严格的SPF环境中。在不同日龄采集泄殖腔棉拭子检测ALV群特异性p27抗原、采集血浆分离外源性ALV和采集血清检测ALV-AB及J特异性抗体。结果表明:在近3个月的6次采样检测中,6个不同的配套系间泄殖腔棉拭子检出率显著不同。其中1个配套系6次完全阴性,其余5个则在不同时期呈间隙性阳性。各品系之间ALV p27抗原检出率与快慢羽性状没有相关性。慢羽的配套系C,36只鸡中在45日龄检出了1例ALV-AB抗体一过性阳性,在60日龄检出了2例ALV-J抗体一过性阳性。分别在5、21日龄采血浆在DF1细胞分离病毒,所有的6个配套系的204只鸡外源性ALV的病毒分离均为阴性。     

蛋种鸡ALV-J与REV共感染病变新特点

2009年8月,山西榆次某鸡场蛋种鸡群产蛋量急剧下降,部分鸡产蛋停止.病理组织学观察发现,病鸡肝脏、肾脏、肺脏、心肌等组织中出现小灶状淋巴细胞瘤,肿瘤细胞为成熟的淋巴细胞;聚合酶链式反应(PCR)、酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接免疫荧光(IFA)检测显示,被检鸡ALV-J感染率为8/8,而且7/8为病毒血症,与REV共感染率为2/8,未出现REV单感染;从发病情况看,淋巴细胞瘤均出现于共感染病例,特别是ALV-J病毒血症的共感染鸡病变最为严重,但未见ALV-J的特征性髓细胞瘤.囊膜蛋白氨基酸同源性分析显示,ALV-J毒株与英国HPRS-103原型株同源性最高(96.9％以上),共感染的REV毒株与suv-env株同源性最高(93.8％).本病例揭示,先天传播的ALV-J引起的病毒血症状态可能为REV的致瘤创造了环境,使临床罕见的REV淋巴瘤早于髓细胞瘤出现,因此,严格种鸡群的ALV-J净化是防控此病的重中之重.对于ALV-J与REV协同的机制还需进一步研究.     

皖南黄肉种鸡种蛋中禽白血病病毒的感染状态检测

本研究首次通过检测种蛋中禽白血病病毒(ALV)评价了皖南黄父母代肉种鸡的ALV感染状态.收集该鸡群的120枚鸡蛋,取40枚鸡蛋孵化至9～11 d后分别制备CEF,培养10 d,取细胞上清用ELISA试剂盒检测ALV p27抗原.另取80枚鸡蛋卵白直接检测p27抗原,同时分别将80枚鸡蛋卵白接种CEF(DF1),培养10 d后取细胞上清检测p27抗原.比较p27阳性检出率的结果表明,受精蛋孵化9～11 d后制备CEF,再培养10 d的细胞上清检出率(10/36)高于直接检测卵白(17/80)与卵白接种CEF(DF1)的细胞上清(7/80).将经DF1培养后p27抗原阳性样品,用针对ALV-J的单抗JE9做IFA,ALV-J的阳性率为6/7.检测该80枚鸡蛋的卵黄抗体,ALV-J、ALV-AB的抗体阳性率分别为18/80、1/80.结果表明,该皖南黄父母代肉种鸡群存在的外源性ALV感染主要为ALV-J.该研究为ALV的净化提供了可行性检测方法.     

麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒的分离与遗传鉴定

为了解麻黄肉种鸡蛋清中内源性禽白血病病毒(内源性ALV)的分布情况,从广东某麻黄肉种鸡场采集1 038份蛋清,经ALV p27抗原ELISA检测出30份阳性蛋清;将阳性蛋清同时接种DF1和CEF细胞,培养7 d后,p27抗原ELI-SA检测到13份样品为DF1-CEF+;以这13份CEF+细胞培养物的基因组DNA为模板,经PCR扩增克隆测序最终得到了1株内源性ALV前病毒序列。将经ELISA、PCR和IFA等方法鉴定的该内源性ALV命名为HN1301株。基于遗传分析表明,HN1301株的前病毒基因序列与已知的E亚群毒株ev1、SD0501的相似性均为99.4%。表明该麻黄肉种鸡品系中存在有复制能力的内源性ALV,因而易干扰基于p27抗原的ELISA检测;本研究对于麻黄肉种鸡禽白血病的防控与净化有参考价值。     

公鸡精液和肛拭子样品禽白血病抗原检测对比研究

本研究对2014—2015年某地方品种5个品系12个批次共1 512只公鸡的精液和肛拭子样品进行了禽白血病p27抗原ELISA检测和对比分析,结果发现二者的一致性平均为83%左右。当精液和肛拭子抗原阳性率越高时,二者的一致性越差。经过两个世代的净化,无论是精液还是肛拭子p27抗原平均阳性率都下降了4个百分点左右。因此,需要采取精液结合肛拭子ELISA检测的方法,共同检测淘汰阳性个体。对公鸡进行单一检测方法难以满足净化需要。     

广西麻(花)鸡禽白血病净化研究初报

鉴于禽白血病(Avian leukosis, AL)流行病学调查发现广西麻(花)鸡禽白血病病毒(Avian leukosis virus,ALV)感染率较高,我们对DGGX5公司的麻鸡一个三系配套的品系开展了ALV净化的研究.初步结果显示,母系一世代公鸡和母鸡J-ALV的阳性率比零世代的下降了33.33个百分点和21....     

云南省部分地方品种鸡禽白血病病毒感染情况调查及南涧乌骨鸡种鸡禽白血病净化效果评估

为了解云南省部分地方品种鸡禽白血病病毒(ALV)的感染情况并评估禽白血病(AL)净化效果,本试验于2019—2021年自云南省5个地区采集12种地方品种鸡的血清和血浆样本共3 321份,通过ELISA试剂盒检测禽白血病病毒J亚群(ALV-J)抗体和ALV p27抗原阳性率,分析云南省部分地方品种鸡ALV的感染情况;于2020—2022年对南涧乌骨鸡进行连续3个世代的AL净化并评估净化效果。结果显示：被调查的12种地方品种鸡均存在ALV感染,ALV-J抗体群体平均阳性率为44.82%(765/1 707),ALV p27抗原群体平均阳性率为14.06%(227/1 614);在不同地方品种鸡群中,公鸡群体阳性率30.52%(405/1 327)高于母鸡群体阳性率29.44%(587/1 994),散养户ALV-J抗体群体阳性率47.72%(325/681)高于种鸡场ALV-J抗体群体阳性率42.88%(440/1 026)。南涧乌骨鸡种鸡经过3个世代净化,与1世代ALV p27抗原阳性率[精液58.33%(658/1 128)、蛋清33.71%(360/1 068)、40周龄公鸡血浆22...     

河南省地方品种鸡白血病净化材料的选择

为了探讨不同材料对禽白血病病毒(ALV)p27抗原检测结果的影响,选择168日龄河南省地方品种母鸡,首先用ELISA检测泄殖腔棉拭子ALV-p27抗原,然后选取部分阳性鸡和阴性鸡分别作为阳性(P)组和阴性(N)组检测其血清和蛋清中ALV-p27抗原,并进行外源性ALV的分离鉴定。结果显示P组蛋清和血清ALV-p27抗原阳性率分别为6304%和7337%;N组蛋清ALV-p27抗原全为阴性,血清ALV-p27抗原阳性率为3315%。P组外源性ALV的分离阳性率为6875%,N组外源性ALV的分离阳性率为278%;蛋清ALV-p27抗原阳性鸡外源性ALV分离阳性率为100%,抗原阴性鸡外源性ALV的分离阳性率为10%;血清ALV-p27抗原阳性鸡外源性ALV的分离阳性率为5946%,抗原阴性鸡外源性ALV的分离阳性率为322%。结果表明,若地方品种鸡群数量较大,育种淘汰率高,采用泄殖腔棉拭子作为检测材料比蛋清检测材料阳性鸡淘汰更彻底;若种鸡群数量较少,淘汰较多影响育种工作,采用蛋清作为检测材料更为合适。     

J亚群禽白血病病毒感染鸡的抗原和血清抗体变化规律

为了解鸡感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)后抗原和血清中抗体的变化规律,本研究经卵黄囊途径对6日胚龄SPF鸡胚,肌肉途径对31日龄和56日龄的SPF鸡感染ALV-J后,于不同时间采集胎粪或泄殖腔棉拭子,同时采集血液、分离血清,以检测p27抗原、J型抗体和p27抗体。结果显示,胚胎组在各检测点均可检测到p27抗原(仅1只鸡在1日龄时为阴性),而31日龄组和56日龄组检测不到p27抗原;胚胎组没有检测到p27抗体,31日龄组中80%的鸡在3次重复感染后可检测到p27抗体,56日龄组在首次感染后p27抗体的检出率较高(60%);各组J型抗体在各检测点基本为阴性(仅个别鸡在个别检测点为阳性)。结果提示,p27抗原和抗体的检测在ALV-J感染的早期诊断及禽白血病净化工作中具有重要意义。     

江西地方鸡禽白血病P27抗原消长规律的研究

随机选取1日龄崇仁麻鸡及东乡黑鸡(原种鸡)各92只,带翅号。于1、7、14、21、28、35、42、49、56、70、98、112、140、150、160、170、180、190、200、230、260、290、320日龄按号对应采集泄殖腔棉拭子进行ELISA检测ALV-P27抗原,查清崇仁麻鸡及东乡黑鸡禽白血病的排毒规律,找出最佳净化时机。结果显示:全群鸡在监测的320日龄内均有ALV感染发生,崇仁麻鸡与东乡黑鸡均在8周龄达到第1个排毒高峰,经过10周龄至12周龄ALV-P27阳性率降低之后,崇仁麻鸡与东乡黑鸡ALV-P27阳性率在20周龄再一次达到高峰,随后进入一个相对的平稳期。试验结果为种鸡场开展净化工作提供了科学依据。     

地方鸡种禽白血病病毒感染动态及检测方法比较

为了解我国地方鸡种禽白血病病毒自然感染动态,掌握其育雏及育成期带毒、排毒规律和检测敏感期,试验应用ELISA试剂盒检测泄殖腔拭子p27抗原和血浆病毒分离的方法,对来自保种群的1日龄胎粪p27抗原检测为阳性的绿壳蛋鸡,与同栏饲养在隔离环境中的阴性全同胞,分别于1、3、5、7、9、11周龄进行采样跟踪检测。结果显示,该鸡群检测期内全程带毒、排毒。其中,泄殖腔拭子p27抗原检出率在5周龄达到最高峰,为67.7%;而血浆病毒分离对全群检出最高峰为9周龄,达25.8%,对公鸡和母鸡检出最高峰分别为11和9周龄,净化过程中可以此作为检测敏感期;各检测时间点,泄殖腔拭子p27抗原阳性率普遍高于血浆病毒分离率,二者符合率最高为65.0%,表明对我国地方鸡种实施禽白血病净化,泄殖腔拭子p27抗原检测不能完全取代病毒分离检测,多种方法联合运用意义重大。试验结果为快速、有效开展地方鸡种外源性禽白血病的检测与净化提供了可靠依据。     

祝氏麻鸡核心种群禽白血病净化效果评估

为了解祝氏麻鸡核心种群连续开展8个世代禽白血病净化的效果,试验制定了净化检测方案以及在净化过程中及时调整更严格的检测标准,并加强实施阳性鸡淘汰后阴性鸡群的管理等核心措施。结果显示：至第七世代,祝氏麻鸡核心种群禽白血病病毒检测阳性率已降至0,入舍母鸡产蛋期死淘率由零世代的6.89%下降至5.20%,66周入舍母鸡产蛋数由零世代的167.3个/只增加至188.8个/只。结果表明目前采取的禽白血病净化方案效果显著,具有一定参考价值。