用台盼兰—姬姆萨染色检测家畜精子顶导反应的研究

本文探讨了用台盼兰—姬姆萨染色检测家畜精子顶体反应的可行性。用肝素或钙离子载体诱发精子顶体反应。根据染色结果将精子分为四类:a)核后帽部不着色或淡青色,顶体不着色或部分紫红色(有顶体反应活精子);b)核后帽部暗青色.顶体部不着色或部分暗红色(有顶体反应死精子);c)核后帽部不着色或淡青色,顶体部紫红色(无顶体反应活精子);d)核后帽部暗青色,顶体部暗紫红色(无顶体反应死精子)。有顶体反应活精子百分率与仓鼠卵穿透率呈强正相关。从而证明台盼兰—姬姆萨染色是检测家畜精子顶体反应的有效手段,并能预测获能处理后精子的受精能力。     

熊精子顶体反应的检测

用Ionophore A23187(I—A)和咖啡因诱发熊精子的顶体反应,采用台盼兰—姬姆萨染色进行检测。根据染色结果可将精子分为四类:a)有正常顶体的活精子,b)无正常顶体的活精子,c)有正常顶体的死精子,d)无正常顶体的死精子。其中B类精子的百分率与仓鼠卵穿透率呈强正相关(r=0.9426,n=6.P<0.01)。     

肝素和钙离子载体诱导猪射出精子体外获能的研究

本文采用肝素和钙离子载体诱导猪射出精子体外获能,根据对去透明带仓鼠卵的穿透情况评价获能效果,并用台盼兰·姬姆萨染色观察精子的死活及顶体状态。结果表明,未经获能处理的猪精子不能穿透仓鼠卵,肝素和I-A均能诱导猪精子体外获能并引起顶体反应。经获能处理的精子,在授精后2小时穿透卵子,4小时开始形成雄原核,6小时形成发育良好的雄原核。肝素处理以100μg效果最好,穿透率达77.8%,有原核卵百分率达47.2%;I-A处理以0.3uM为宜,穿透率达66.7%,有原核卵百分率达42.4%。咖啡因与肝素和I-A具有协同作用,能提高精子的穿透能力。有顶体反应的活精子百分率与穿透率呈强正相关(肝素组:r=0.97,P<0.01;I-A组:r=0.94,P<0.01)。     

钙离子载体诱导猪冷冻精子体外获能的研究

本研究首次报道了猪冷冻精子的体外获能。用 I—A 诱导猪冷冻精子体外获能,可穿透去透明带仓鼠卵。I—A 浓度以0.3μM 为宜,穿透率为60%,有原核卵百分率为39.2%。咖啡因可促进 I—A 的作用,并能促进卵内原核的发育。I—A 可诱导猪冷冻精子的顶体反应,有顶体反应活精子百分率与穿透率呈强正相关(r=0.968,P<0.01,n=12)。结果说明,用 I—A 诱导获能的猪冻精可用于猪的卵子的体外受精。猪冻精在卵内的发育能力较低,推测这是猪冷冻精子受胎率低的一个主要原因。     

肝素或钙离子载体诱导牛、羊冻精体外获能的研究

本文采用肝素或钙离子载体(I-A)诱导牛、羊冻精体外获能,根据对去透明带仓鼠卵的穿透情况评定获能效果,并用台盼蓝·姬姆萨(TG)染色观察了精子的死活及顶体状态.结果发现,牛、羊冻精经肝素或I-A处理后与卵子一起培养,2 h穿透仓鼠卵,4 h开始形成雄原核,6 h形成发育良好的雄原核.牛冻精用50μg/mL肝素及0.1μmol/L I-A处理效果最好,穿透率分别为72.8％和92.3％;羊则以20μg/mL肝素及0.3μmol/L I-A为宜,穿透率分别为73.1％和68.O％.咖啡因与I-A或肝素并用均有协同作用,能提高精子的穿透能力,并能促进卵内原核的发育.肝素和I-A均能在体外诱导牛、羊冻精的顶体反应,有顶体反应活精子百分率与穿透率呈强正相关,羊冻精比较脆弱,获能处理后活力较低.     

黑白花公牛冻精受精力的检测—穿透仓鼠卵的试验

本试验用SPA法(Sperm Penetration Assay)即精子穿透分析法对8头黑白花公牛冻精的受精力进行检测,以预测各公牛精液受精力的水平。结果:每卵表面平均精子数为3.2～9.5个,每卵内精子数为1.6～3.4个,被穿透的卵子比例即穿透率为34.9～65.7％,具雄原核的卵子比例即原核卵率为16.0～32.4％。这些数值与各公牛冻精授精500多头母牛的效果作对照,8头公牛平均80(70～90)天的不返情率为56％(45.8～71.1％),不返情率与雄原核卵率,穿透率呈高度正相关,相关系数分别为 0.82和 0.92。 另一组试验结果表明:授精时间对穿透率特别是对雄原核形成有很大影响。授精2小时后观察,没有雄原核形成,只有附着于卵子表面的精子;授精4小时后,精子已通过卵黄膜进入卵内,并开始形成雄原核;授精6小时后形成发育良好的雄原核。 这些观察结果有助于利用这项技术在生产上对公牛精液的受精力进行客观评定,为选择后备公牛提供重要的生理指标,特别是对评定冷冻精液的品质具有一定的参考价值。并为精子顶体反应、受精机理、体外受精、遗传学和胚胎学等领域的研究提供新的手段。     

肝素和钙离子载体诱导波尔山羊精子体外获能和体外受精

运用肝素、钙离子载体（IA）协同咖啡因诱导波尔山羊精子体外获能，利用去透明带金黄地鼠卵穿透试验检测了精子的获能效果。结果发现：精卵孵育4h和6h时的穿透率均高于2h时的穿透率；肝素和钙离子载体对精子获能有明显的促进作用，与未添加组相比差异极显著（P〈0．01）；20mg／L和50mg／L的肝素剂量组，去透明带金黄地鼠卵穿透率为64．7％、68．4％；钙离子载体的添加剂量在0．3μmol／L时，穿透率达到68．2％；咖啡因与肝素、钙离子载体具有明显的协同作用。将获能的精子与山羊卵母细胞进行体外受精孵育17h，也获得了60％以上的受精率。     

前列腺素PGF2α对冷冻保存的大熊猫精子受精能力的影响

以Ham′s F-10为基础液,添加了不同浓度的前列腺素PGF2α与大熊猫冷冻保存后解冻的精子在37℃水浴中孵育不同时间,通过检测精子的活力、存活时间、精子质膜完整性、顶体反应率和异种穿卵率来评估其对大熊猫冷冻精子体外受精能力的影响,结果显示：PGF2α能影响大熊猫冷冻精子体外受精能力。50μg/LPGF2α对大熊猫冷冻精子体外功能没有较大影响,较高浓度的PGF2α则会造成精子活力的损伤和精子顶体反应率降低,导致精子受精能力下降。     

不同培养液对蓝狐精子体外获能效果的比较试验

采用上游法分离优化精子,用mTyrod’s液(T)、BO液(B)以及高渗液(HIS)3种不同培养液,在5%CO2的培养箱中进行获能培养,获能培养时间为6h。利用考马斯亮蓝染色法检测精子顶体反应率,伊红-苯胺黑染色法检测活精子比率以及观测法检测精子活力。在培养的0、1、2、4、6h时分别检测上述指标并统计分析,从而筛选出适合蓝狐精子体外获能的培养液。结果显示:B培养液优于T、HIS培养液,最佳获能培养时间t≥6h;HIS可以提高精子顶体反应率,但较高的渗透压不利于精子保存,不建议使用。     

连续射精对公牛异常精子出现率的影响

使用电刺激采精器,按15分钟间隔连续六次采集19头公牛射出的精液,研究其异常精子的出现率。11头公牛(A组)的严重异常精子数<10％。另外8头公牛(B组)的严重异常精子数则>10％。连续六次射精的畸形精子平均值:A组为6.7,5.6,6.9,7.4,7.2和7.0％。B组为11.7,13.0,11.9,9.0,12.5和10.3％。连续射精对全部严重异常精子或任何其它畸形精子的数值均无显著影响。     

牛精子体外获能前后超微结构的研究

应用透射电镜技术,对牛精子体外获能前后超微结构观察的结果表明,牛精子的超微结构相似于其他哺乳动物,但顶体较大;获能后精子发生了顶体反应.在顶体反应中,囊泡化有3种形式:(1)顶体外膜相互融合,形成囊泡;(2)顶体外膜内陷形成囊泡化;(3)顶体外膜和质膜融合形成囊泡.此外,对精子的结构特点和囊泡形成过程进行了讨论.     

影响精子对体外猪卵穿透的因素

猪卵体外受精的可靠方法尚未建立。作者最近发现被透明带和卵丘包围着的猪卵在体外可由经二价阳离子载体 A23187预先处理的体外精子穿透。本文描述一些因素对于射出精子和附睾精子对体外卵的穿透比率的影响。新鲜公猪精液的富含精子部分(18—20×10~8个精子/ml)用精子预处理液稀释,该稀释液是一种修正了的小鼠受精稀释液,其中不含 NaHCO_3,而含20mM Hepes(pH7.4)。稀释精液含有2.5×10~8个精子/ml,离心冲洗两次,且用或不用 A23187预先进行不同时间的培养。从成     

公牛冻精品质检测方法比较

<正> 1.材料与方法①精液样本:中国荷斯坦牛颗粒冻精(山西省种牛站)。②染色原理:利用活精子对特定染料不着色而死精子着色的特点来区分死精子和活精子,从而得出存活率指标。通过油镜检精查子的形态和顶体,统计出畸形率和顶体完整率指标。③染色试剂:刚果红、苯胺兰、伊红、美兰、10%葡萄糖、柠檬酸钠、姬姆萨染液(姬姆萨原液:磷酸缓冲液:蒸馏水=2:3:5)、甲醇。④制片方法:先将冻精用2.9%的柠檬酸钠解冻,并置于37℃温度下,孵育2小时染片。方法1(常规染色法):(1)存活率:采用伊红法,取精液和5%伊红溶液各一滴,置于清洁载玻片一端,迅速混合均匀,制成抹片,在400～600倍显微镜下观察。     

第二十九次全国联合后裔测定公牛冻精质量状况分析与讨论

第二十九次全国联合后裔测定工作会议于2003年4月5日至8日在南京召开,会议期间对47头参加全国联合后裔测定公牛的冻精进行了质量检测。检测首次引用WLJY-9000伟力彩色质量分析系统全自动检测了冻精的活力、活率、A级精子百分率、B级精子百分率、C级精子百分率、D级精子百分率、曲线速度、直线速度、平均移动角度、平均路径速度、侧摆幅度、鞭打频率、摆动性、直线性、前向性等15项指标。结是表明,冻精整体质量水平尚可,个别公牛站、有些牛较差。具体结果见精液质量一览表(为了保护生产者的利益,单位栏没有给出具体的单位名称而用字母代替,参测牛号为顺序号,略去具体牛号)。     

间情期犬间母细胞体外受精的影响因素

试验对间情期犬卵母细胞体外受精的影响因素进行了系统研究。结果表明①以TALP液作为犬精子获能液，精子回收率(64±10.5)%、顶体反应率(41.5±4.1)%高于TCM199+20%FCS液。②用TCM199+20%FCS作为受精液，卵母细胞单精受精率(18.6%)、原核形成率(10.4%)，高于TALP受精液，而退化率低于TALP受精液(4.9%比19.7%，P＜0.01)。③犬精子与卵母细胞在受精液中共同孵育12h，单精受精率(23.5%)、原核形成率(12.7%)高于共同孵育8、16、20h，而多精受精率(15.7%)、退化率(3.9%)低于共同孵育16、20h。④犬精子为2×106个/mL时，单精受精率(26.0%)、原核形成率(14.6%)，高于0.5×106、1×106、3×106、5×106个/mL组。卵母细胞多精受精率和退化率随精子含量增加而增加。⑤肝素为29mg/L时,卵母细胞单精受精率(24.4%)、原核形成率(12.2%)高于0、10、20、40、50mg/L组。而犬精子获能2h后，顶体反应率和卵母细胞多精受精率随肝素质量浓度增加而增加。     

依葡柠解冻液对种公牛精子寿命及完整顶体率的影响

采用复方依葡柠解冻液 (EDTA 葡萄糖 柠檬酸钠 ,试验组 )与常用的单方柠檬酸钠解冻液 (2 .9%柠檬酸钠 ,对照组 )对肉用种公牛颗粒冻精进行解冻对照试验。结果显示 ,解冻后精子的复苏率 ,试验组与对照组相差不大 (P >0 .0 5 ) ;常温 (18～ 2 0℃ )和低温 (5～ 7℃ )下再贮存 ,精子的存活时间和生存指数 ,试验组高于对照组 ,且差异显著 (P<0 .0 5 ) ;解冻后在 (38± 2 )℃水浴中孵育 3h检查精子的完整顶体率 ,试验组极显著高于对照组 (P<0 .0 1)。适用于水牛的良好解冻液依葡柠 ,用做牛 (肉用牛 )的冻精解冻得到了理想效果     

牛死精中芳香族L-氨基酸氧化酶的位置与公牛间按照氧化酶活性确定死精的百分比差异

牛死精中大部分(94％)芳香族L-氨基酸氧化酶活性发现于牛精尾部制剂中。该酶柠是从浸于檬酸钠溶液的精子中释放出来,而不是在磷酸钠或氯化钠溶液中释放出来,在磷酸钠溶液或柠檬酸钠溶液中,该酶的活性没有明显差异(9.6微升O_2/小时和11.2微升O_2/小时),射出的精子活性与死亡精子百分率呈显著相关(r=0.954,P<0.01)。但在刚采集的新鲜附睾精子中没有发现这种关系。然而死亡的附睾精子表明,其氧化酶活性(10.1微升O_2/小时)与死亡的射出精子活性(9.2微升O_2/小时)相似。总之,精子死亡发生在壶腹部或在射精时,或者两者并而有之。同时公牛间死精百分率的差异是公牛间壶腹部状况在射精时体况或者两者中任何一种差异的结果。     

第三讲母猪生殖生理

第三节受精、妊娠与分娩一、受精(一)配子的运行1.射精部位在交配过程中,公猪将精液直接射到母猪子宫或子宫颈中。母猪的子宫颈没有阴道部,使得精液能顺利射入子宫内。2.精子获能精子在受精前必须在雌性生殖道内经历一段时间,并发生一系列生理性、机能性变化,才具有与卵母细胞受精的能力,这种现象称精子获能。公猪精子获能需要3～6小时。3.受精部位在输卵管上1/3的壶腹部受精。4.顶体反应精子获能之后,在穿越透明带前后,精子顶体开始膨大,精子质膜和顶体外膜开始融合,使精子顶体形成许多泡状结构,通过空泡间隙释放出透明质酸酶、放射冠穿透…     

在4℃降温平衡过程中0.2g/L咖啡因与精子共孵育时间对猪颗粒冻精质量的影响

实验旨在探讨在猪精液于4℃平衡2 h过程中0.2 g/L咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h,对颗粒冻精解冻后精子活率、活力、质膜完整性和顶体完整性以及解冻后精子体外存活时间等指标的影响,以期进一步提高猪颗粒冻精质量。实验结果表明,在精液冷冻之前,咖啡因不同平衡时间组的精子活率和活力都呈现出升高趋势,但与对照组差异不显著;咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组的精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组,前3组之间差异均不显著。而颗粒冻精解冻后,咖啡因与精液共孵育2 h、1 h和0.5 h组精子活率和活力均显著高于对照组,其中共孵育1 h组显著高于其他3组(P0.05),共孵育2 h组和0.5 h组间差异不显著(P0.05);共孵育2 h组精子顶体完整率和质膜完整率显著低于对照组和共孵育0.5 h、1 h组(P0.05),但后3组之间差异不显著;共孵育2 h组精子存活时间显著低于对照组、共孵育1 h和0.5 h组(P0.05),其中共孵育1 h组精子存活时间最长,达7 d以上。总之,在精液4℃降温平衡过程中咖啡因与精液共孵育1 h对冷冻后精子质量最有利,解冻后精子活率和活力显著高于其他各组,且解冻后精子体外存活时间最长。     

37℃条件下不同稀释液对鸡精子活率的影响

为了探讨不同稀释液对鸡精液保存效果的影响,试验配制了pH值、渗透压相近的3种稀释液,在37℃条件下每隔2 h测定1次精子活率,直到精子全部死亡为止,最后计算精子存活时间和生存指数。结果表明:精子在B液中存活时间极显著高于A液和C液(P0.01),A液、C液间差异不显著(P0.05),A液、B液、C液的精子存活时间分别为(12.6±0.5)h、(14.0±0.3)h、(12.1±0.8)h;A液、B液、C液中精子生存指数分别为(5.7±0.6),(6.6±1.7),(2.9±0.8),A液、B液中精子生存指数极显著高于C液(P0.01),A液、B液间差异不显著(P0.05),说明在鸡精液稀释液中添加果糖、柠檬酸钾能够提高精子生存指数。