鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定及河北弱毒株培育的研究

从河北省６个地区鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的鸡群中，分离到６株强毒，均能使易感鸡３６小时发病并死亡，发病率达６０～１００％，死亡率１０～７０％。人工感染鸡能见到与野外病例相同的病变。经血清学试验、鸡胚接种、电镜观察均证明，分离物为传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），其中有的毒株，毒力非常强。利用其中毒力最强的１株病毒，经鸡胚多次传代培养育成１株免疫原性好，免疫期长，免疫效果容易监测的弱毒株，经野外试验证明，该毒株是防治ＩＢＤ的一个很理想的毒株。     

河南省鸡传染性法氏囊病病毒株的分离及其某些生物学特性

应用鸡胚培养、电镜观察、血清学试验及病理组织学检查,分离与鉴定了来自河南省鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）免疫鸡群Ｈｅ１、Ｈｅ２、和Ｈｅ３三株ＩＢＤＶ毒株。鸡胚传代试验表明,Ｈｅ１和Ｈｅ２株连续传代到第４代出现规律性死亡和ＩＢＤ病变,而Ｈｅ３株在第１代时鸡胚即全部死亡,且出现ＩＢＤ典型鸡胚病变。Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株对易感鸡致病力有一定的差异。病死率分别为２０％、１０％和４０％,多数为弱毒株。免疫保护试验证明,用常规的ＩＢＤＶ血清Ｉ型病毒株Ｂ２疫苗对Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株的免疫保护试验,与对照组相比保护率分别为０％、０％和１０％。未死亡扑杀的免疫试验鸡法氏囊有不同程度的病理组织学病变,表明Ｉ型毒株疫苗对ＩＢＤ基本上无免疫保护作用。所分离的毒株可能是ＩＢＤＶ的变异株。     

鸡传染性法氏囊病病毒12个野毒株的毒力比较

对3－7周龄SPF鸡人工感染的致病性比较试验表明，从不同地区收集的12个鸡传染性法氏囊病病毒（IBDV）野毒株的毒力差异甚大，致病性最强的GX8／99株可引起易感年龄的SPF鸡70％－92％的死亡率，属超强毒，而人工接种YN2／99株的SPF鸡死亡率几乎为零。其余毒株对SPF鸡的致死率介于20％－60％，它们的毒力介于IBDV的标准毒与超强毒之间。     

鸡传染性法氏囊病病毒山东地方野毒株的分离与鉴定

从山东省多个地区患传染性法氏囊病的鸡群中,分离到５个野毒株,经过琼脂双向双扩散试验、ＥＬＩＳＡ试验、血凝试验、病毒感染力测定、回归试验、电镜观察等６项鉴定,证明是鸡传染性法氏囊病病毒。并且,各毒株毒力差异较大,有的毒株感染力相当强,ＥＬＤ５０／０．２ｍＬ＝１０６．００。     

鸡传染性法氏囊病毒超强毒株的分离及生物学特性鉴定

用SPF鸡及鸡胚，从吉林某鸡场病死鸡的法氏囊组织到一株超强毒株（J20株）。此病毒不能凝集鸡的红细胞，可以被IBDV标准阳性血清检出IBDV抗原。通过对J2001分离毒株进行回归实验，测定病毒效价EID50达10^6/0.2ml，发病率为100％，死亡达70％；病毒理化特性试验，电镜观察等证实J20株为鸡传染性法氏囊病超强毒株。     

鸡传染性法氏囊病(IBD)地方毒株的分离与鉴定

鸡传染性法氏囊病(IBD)是一种以侵害免疫器官为主的免疫抑制性疾病,主要危害雏鸡和青年鸡的急性接触性传染病,病死率为10%～70%.多年来,该病在全国广泛流行,接种疫苗是预防本病的主要措施,但仍有部分免疫鸡群发病,给养鸡业带来了巨大的经济损失.现就一地方株IBDV的分离与鉴定报告如下.     

鸡对传染性法氏囊病病毒强毒株的易感性试验

无病传染性法氏囊病的病毒（ＨＢＤＶ）母源抗体不同日龄的鸡,经人工感染强主ＨＢＤＶ,按法氏囊肉眼眼病变判断,３周龄的鸡不易感,而４周龄￣１０周龄的鸡都易感,不管ＳＰＦ欢度呈是普通鸡,对强毒ＢＤＶ的易感性,主要取决于其日龄。     

河北省鸡传染性法氏囊病超强毒株的分离鉴定

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由鸡传染性法氏囊病毒引起鸡的急性、高度接触性、杀淋巴细胞性疾病。其特征是突然发病、病程短、发病率高、病鸡严重委顿、白色下痢、法氏囊内B淋巴细胞损伤、鸡体免疫能力抑制。我国于1979年先后在广东、上海等地发现本病，现已遍及全国各     

传染性法氏囊病病毒超强毒株河北分离株HB-bp的生物学特性

将分离毒HB-bp与STC(Ⅰ型)、CJ801(Ⅰ型)标准毒株比较，分析了其病原性、形态结构、理化特性、血凝活性、血清型、抗原特异性及结构蛋白分析。结果表明，HB-bp的病毒基因组有两个特征性片段，电泳后呈现两个条带，在SDS-PAGE中出现5条病毒特异蛋白带，在形态学、密度、理化特性、血凝性上与标准IBD毒株相似，具有较好的抗原性。血清中和试验测定该毒株为血清Ⅰ型毒株，鸡胚接种传代培养可引起鸡胚规律性死亡，致病力试验具有超强毒株的高致病性和高死亡率的特征，表明本分离株为超强毒株。     

羊传染性脓疱病毒分离及生物学特性研究

用犊牛睾丸细胞及BK细胞，从我国内蒙古自治区达拉特旗发病的进口小尾寒羊痂块中分离到1株病毒，对其进行连续传代至病变稳定。通过对该分离株进行动物回归试验，在犊牛睾丸细胞及BK细胞中的增殖特性试验、病毒核酸类型鉴定试验、脂溶剂敏感试验及其它生物学特性试验、电镜观察等，初步鉴定该分离株为羊传染性脓疱病毒。     

乳酸菌噬菌体的分离及生物学特性鉴定

为了解乳酸菌噬菌体的生物学特性,并为制定乳酸菌发酵生产过程中噬菌体污染的防控措施提供试验数据和参考,本研究通过斑点试验和双层琼脂平板法,以干酪乳杆菌（L. casei） ATCC 393、戊糖乳杆菌（L. pentosus） KLDS 1.0413、短小乳杆菌（L. brevis） ATCC 367为指示菌从乳制品、泡菜样品中分离乳酸菌噬菌体,通过透射电镜观察噬菌体形态,噬菌体基因组限制性内切酶作用分析其包装机制,并进行宿主范围和一步生长曲线的测定,SDS-PAGE分析噬菌体结构蛋白,对获得的噬菌体进行生物学特性鉴定。结果显示,分离获得3株烈性乳酸菌噬菌体,依次命名为Lc、Lpen和Lbre。电镜结果显示,噬菌体Lc、Lpen均由多面体头部和非收缩性尾部组成,而噬菌体Lbre由多面体头部和收缩性尾部组成。根据形态学分析,Lc和Lpen属于长尾噬菌体科（Siphoviridae）,B1类,Lbre属于肌尾噬菌体科（Myoviridae）,A1类。噬菌体基因组经限制性内切酶作用后,核酸电泳结果显示,噬菌体Lc、Lpen基因组均为异质平末端,其包装机制属满头包装,即pac-型,而Lbre含有黏性末端,其包装机制属于cos-型。宿主范围测定结果显示,噬菌体Lc、Lbre对宿主专一,而Lpen宿主谱较广。一步生长曲线显示,噬菌体Lc、Lpen和Lbre潜伏期分别为60、45和150 min,裂解期分别为45、90和105 min,裂解量分别为47、24和30 PFU/cell。SDS-PAGE分析显示,噬菌体Lc结构蛋白有7个,主要结构蛋白分子质量约为50 ku;噬菌体Lpen和Lbre结构蛋白均有5个,主要结构蛋白分子质量分别约为55和50 ku。综上,本研究分离获得3株乳酸菌烈性噬菌体,并对其主要生物学特性进行鉴定,对了解乳酸菌噬菌体及后续乳酸菌噬菌体污染的防治提供了试验数据和理论依据。     

1株犬副流感病毒的分离鉴定及生物学特性研究

试验旨在分离鉴定犬副流感病毒(canine parainfluenza virus,CPIV),并对其生物学特性进行研究。用Vero细胞接种感染CPIV阳性犬肺脏组织,盲传4代,收集72 h病毒液进行RT-PCR鉴定、电镜观察、血凝试验、热敏性试验、紫外照射试验及病毒一步生长曲线的测定,同时扩增N基因进行序列分析,并构建系统进化树。结果显示,试验成功从出现咳嗽、流鼻涕等呼吸系统疾病症状的病犬肺脏中分离出1株CPIV,命名为CPIV-BJ01;RT-PCR扩增结果发现,在534 bp处有特异性目的条带。病毒电镜观察发现,其超微结构呈圆形、有囊膜、直径在80～200 nm之间;血凝试验显示,病毒在4和37℃均能凝集1%猪红细胞,与报道的CPIV血凝特性一致;病毒对热敏感,长时间高温下病毒毒价会随之下降;紫外照射可使病毒在短时间内对细胞的感染性急剧下降。病毒一步生长曲线测定结果显示,在12～48 h病毒高速增殖,细胞培养液中病毒滴度急剧上升,之后趋于稳定。CPIV N基因序列与19株有代表性的副流感病毒N基因相比,其核苷酸序列同源性为97.1%～99.8%。遗传进化分析表明,CPIV-BJ01与PIV5 1168-1(登录号:KC237064.1)和PIV5 ZJQ 221(登录号:KX100034.1)位于同一分支上,亲缘关系较近。     

鸵鸟新城疫病毒野毒株的分离及其生物学特性

用鸡胚从疑似鸵鸟新城疫的送检病料中分离到 2株病毒。 2株病毒均能凝集鸡红细胞 ,且能被抗新城疫病毒 ( NDV)阳性血清抑制 ;用抗 NDV单抗 PEG夹心 ELISA测定 2株分离毒均为阳性。对其中 1株作进一步生物学特性鉴定 ,按照国际上规定的 NDV毒力判定标准测定的该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间 ( MDT)为 54h,1日龄雏鸡脑内接种致病指数 ( ICPI)为 1 .88,6周龄雏鸡静脉接种致病指数 ( IVPI)为2 .75。结果表明 ,本分离株为鸵鸟新城疫病毒强毒     

IBD野毒株的培育

由国内ＩＢＤ高发地区分离到一株ＩＢＤ野毒，使现地鸡群发病率９６％，死亡率６０％以上，为一株超强毒。将该毒株分离，纯化，经鸡胚及鸡胚成纤维细胞传代，得到一株ＩＢＤ超强毒的细胞适应株，毒价高达２．０×１０８ＰＦＵ／ｍｌ以上。回归本动物，经免疫原性试验，致病性试验及返祖试验，证明该毒株免疫原性较好而致病力降低。     

红茶菌中乳酸菌的分离与生物学特性

红茶菌是酵母菌、醋酸菌和乳酸菌的共生物。为进一步研究红茶菌中乳酸菌的生物学特性,从红茶菌中分离纯化出4 株乳酸菌（HC、HD、HQ、HL）,以形态和生理生化鉴定、产酸情况、生长性能、耐盐性、耐酸性和耐胆盐性测定综合评价红茶菌中4 株乳酸菌的生物学特性。结果表明：4 株菌均为植物乳杆菌;4 株乳酸菌的最适生长温度均为30 ℃,在14 h后均处于稳定期;菌株HC、HD、HQ和HL的最适接种量（体积分数）分别为4%、4%、6%和6%;4 株乳酸菌均有一定的耐盐性,耐酸和耐胆盐性均较好,其中HQ以最佳。     

鸽新城疫病毒的分离及其生物学特性测定

用ＳＰＦ鸡胚从疑似鸽新城疫（鸽ＮＤ）病鸽群中分离到一株病毒ＱＬ株,该病毒株能凝集鸡红细胞（ＲＢＣ）,这种凝集作用能被抗新城疫病毒（ＮＤＶ）阳性血清抑制;用抗ＮＤＶ单抗ＰＥＧ夹心ＥＬＩＳＡ测定分离株为阳性。分离株经肌肉注射能使鸽发病和死亡,出现与自然发病鸽一致的症状和病变,但肌注ＳＰＦ鸡只感染,不见临床症状。对该分离株作进一步生物学特性鉴定,按照国际上规定的ＮＤＶ毒力判定标准,测定了该毒株最低致死量致死鸡胚的平均死亡时间（ＭＤＴ）、１日龄雏鸡脑内接种致病指数（ＩＣＰＩ）和６周龄雏鸡静脉接种致病指数（ＩＶＰＩ）,结果ＭＤＴ为１０５小时、ＩＣＰＩ为１．３３、ＩＶＰＩ为１．０。试验结果表明本分离株为鸽新城疫病毒。     

羊传染性脓疱病毒分离及生物学特性研究

用犊牛睾丸细胞及BK细胞,从内蒙古自治区达拉特旗发病的进口小尾寒羊痂块中分离到一株病毒,对其进行连续传代至病变稳定。通过对该分离株进行动物回归试验,在犊牛睾丸细胞及BK细胞中的增殖特性试验、病毒核酸类型鉴定试验、脂溶剂敏感试验及其它生物学特性试验、电镜观察等,初步鉴定该分离株为羊传染性脓疱病毒。     

新城疫病毒囊膜糖蛋白生物学特性的研究进展

新城疫是当今全球范围内最严重的禽类传染病之一。其病原新城疫病毒是单股负链RNA病毒,编码NP、P、M、F、HN和L 6种结构蛋白,其中最主要的是位于囊膜上的F和HN两种糖蛋白。F蛋白具有使病毒囊膜与宿主细胞膜融合,致使病毒穿入宿主细胞膜的作用,是决定病毒毒力的关键因子;HN蛋白具有血凝素和神经氨酸酶两种活性,这两种活性对于NDV侵染细胞具有重要的作用。这两种糖蛋白不仅对NDV的毒力及致病性方面起着决定性作用,而且也是诱导产生保护性抗体的蛋白。作者主要对这两种蛋白的结构与功能作一概述。