猪腔前卵泡机械分离研究

本研究以分离到的卵泡数量、分离时间和卵泡在体外培养3 d后的存活率为指标比较了两种机械方法分离猪腔前卵泡的效果。结果表明:用针刮法分离猪腔前卵泡的数量(Φ<50μm:203600±59000;50μm≤Φ≤150μm:29.40±10.34;Φ>150μm:9.30±3.29)极显著(P<0.01)高于剪碎法(Φ<50μm:18900±12000;50μm≤Φ≤150μm:13.95±3.70;Φ>150μm:4.95±1.61),而且针刮法16.16±1.43 min分离时间比剪碎法(20.30±1.48)min短,(P<0.01)。体外培养3 d后,腔前卵泡存活率在两种方法之间没有明显差异。说明应用针刮法分离猪腔前卵泡能有效保护卵母细胞和颗粒细胞的正常形态以及基膜的完整性,从而使分离到的猪腔前卵泡维持正常的生理活性。     

哺乳动物腔前卵泡卵母细胞的研究进展

本文简要回顾了哺乳动物腔前卵泡卵母细胞的研究历史,重点讨论了有关理论及方法学问题。     

牛腔前卵泡的机械分离与采集

本实验建立了皮肤移植刀切割、剪碎、分级过筛的牛卵巢腔前卵泡体外分离技术 ,分离出了在直径 6 0～180 μm的不同大小的腔前卵泡 ,提高了腔前卵泡的回收效率 [5 7.2 3± 10 .2 1(个 /h) ,n =2 0 ]。     

哺乳动物腔前卵泡卵母细胞的体外培养

阐明哺乳动物卵泡体内发生的一般模式，回顾腔前卵泡体外培养的研究历史，着重论述腔前卵泡的获取及鉴定标准，常用的培养体系和影响腔前卵泡体外发育的多种因素。     

牛腔前卵泡的简易机械分离方法

采用两种机械法分离牛腔前卵泡。方法一 (M -1) ,皮肤移植刀切割、剪碎、过滤镜下直接捡卵法。方法二 (M -2 ) ,皮质片剪碎、离心、悬浮、过滤镜下捡卵法。M -1平均每卵巢采卵数为 46 9个± 18 2个 ,M -2为 6 8 4个± 12 5个 ;处理时间M -1为 2 5 4min± 6 7min ,M -2为 46 3min± 16 8min ,两种方法采集腔前卵泡数量及处理时间均存在显著差异。平均每小时采集卵泡数分别为 99 5和 87 2个 ,M -1多于M -2。两种方法获得腔前卵泡大小分布规律也有明显差异 ,M -1采集腔前卵泡直径为 6 0～ 15 0 μm ,绝大部分是次级卵泡 ,而M -2获取腔前卵泡则偏小。总的看来 ,M -1处理时间短 ,回收效率高 ,方法简便 ,且分离卵泡直径较大 ,适于体外培养 ,是机械分离牛腔前卵泡的一种理想方法。     

山羊腔前卵泡卵母细胞体外发育与体外成熟的研究

通过比较3种培养基、5个培养系统和4种培养方法对卵母细胞生长率的影响,结果发现,就卵母细胞生长率而言。以MEM HEPES培养液＋5％FCS＋40μg/mlFSH 20ng/ml IGF-1 2mmol/L cAMP 2mmol/L次黄嘌呤培养系统为佳。在腔前卵泡体外培养过程中,12个卵泡经腔期发育,约占同等培养条件下卵泡九的2％（12／603）。培养卵泡经腔期发育并未改善其卵母细胞的成熟率（0／12）。腔前卵泡卵母细胞经过不同时间的体外培养,发现经12和14d培养结不的卵母细胞中,有81％（47／58）生发泡明显迁移至质膜下;培养14d的卵母细胞中,约16．4％（9／55）产生pbI但不排出,因而在胞质中见到极体;;培养16d得到1枚排出pbI的孤雌激活卵;同时发现培养16－18d卵母细胞退化率明显增高（P＜0．01）。推测山羊腔前卵泡卵母细胞体外培养的适宜时间为16d。     

猪腔前卵泡的分离及培养试验

试验建立了两种猪腔前卵泡的分离方法.方法Ⅰ采用将卵巢剪成碎块(约2 mm左右),通过孔径180 μm网筛挤压过滤,其滤液用孔径40 μm网筛过滤,检卵.方法Ⅱ是将剪碎的卵巢碎块用胶原酶消化1 h,然后用孔径180 μm网筛挤压过滤,滤液用孔径40 μm网筛过滤,检卵.通过对猪卵巢腔前卵泡的分离及培养,发现方法I分离的总体效果要优于方法II.另外,还发现猪龄越大,腔前卵泡的回收率越低.不同的胶原酶浓度,其分离的效果也不一样,浓度越高越不利于培养.     

无血清培养液对牛腔前卵泡体外发育的影响

本文研究了基础培养液中不添加犊牛血清(FCS)及添加不同比例FCS对牛腔前卵泡体外发育和激素分泌的影响。结果显示:添加FCS对腔前卵泡体外生长无明显促进作用,对腔前卵泡的体外发育、存活及激素分泌也影响不大。腔前卵泡在无血清条件下可持续生长、分泌性腺激素。     

影响牛腔前卵泡机械分离效率的因素

哺乳动物卵巢皮质中有大量的腔前卵泡，这是体外生产胚胎的一个潜在的卵母细胞来源。通过腔前卵泡体外培养获得成熟卵母细胞，以最大限度地发挥优良母畜的遗传和繁殖潜力。然而腔前卵泡分离效率一直制约着有关研究工作的开展。牛卵巢组织结构致密，纤维化程度高，机械分离牛腔前卵泡技术上有很大难度。许多研究者尝试酶消化分离腔前卵泡。虽然能分离到相对较多的腔前卵泡，但酶处理不但费用昂贵，处理时间长．而且酶处理及酶的残留都会降低卵泡活力。有人用显     

哺乳动物腔前卵泡的分离与培养

哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在，有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系，获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展，并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。     

哺乳动物腔前卵泡培养方法研究进展

目前，各种动物腔前卵泡的研究已经取得了一定进展。但体外培养获得的卵母细胞质量与体内相比还有一定的差距。有效的腔前卵泡培养方法是腔前卵泡研究取得成功的关键。腔前卵泡的培养方法有普通培养法、二维培养法、三维培养法以及培养板倒置培养；另外依据卵泡培养密度又可分为单个卵泡和多个卵泡培养法。研究者可以根据不同的需要选择合适的培养方法。     

胶原酶对水牛腔前卵泡的分离及培养的影响

研究旨在找出一种水牛腔前卵泡的有效分离方法。采用酶消化结合机械法来分离水牛的腔前卵泡 ,并分别进行培养。来自屠宰场的水牛卵巢 ,先用剪刀去掉髓质部 ,用眼科手术剪刀将其剪碎 ,然后分别用浓度为 0 (CK )、0 0 2 %、0 0 4%、0 0 8%的胶原酶消化 2 0分钟 ,采集腔前卵泡 ,每个卵巢分别获得 3 3 5 6± 6 1 5、40 3 8±6 1 2、47 75± 6 84和 5 2 69± 6 1 5个腔前卵泡 ,试验组的数量明显多于对照组 ( p <0 0 5 )。体外培养 72h后的腔前卵泡存活率分别为 5 0 86%、43 5 5 %、43 0 6%和 2 7 3 1 % ,用 0 0 8%胶原酶消化的存活数显著低于其它组 ( p <0 0 1 )。用胶原酶分离水牛的腔前卵泡 ,适宜的浓度为 0 0 4%。     

哺乳动物腔前卵泡的分离与培养

哺乳动物卵巢中绝大多数卵母细胞以无腔形式存在，有腔卵泡所占比例很少。通过建立腔前卵泡的培养体系，获取大量的具有成熟和受精能力的卵母细胞，将极大地促进体外受精、核移植等胚胎工程技术的发展，并有利于研究卵泡和卵母细胞的发育规律。     

哺乳动物腔前卵泡体外培养及研究进展

哺乳动物卵巢内的原始卵泡库是雌性生殖资源的储存库,但大部分卵泡在腔前阶段已退化闭锁了,这无疑是对这一资源的巨大浪费。因此,越来越多的学者致力于腔前卵泡的开发和利用,建立了一系列的培养体系,尤其在小鼠上做的比较成功,已经得到了少量后代。文章主要就卵泡的发生发育过程,腔前卵泡的分离方法,培养基的选择,不同直径腔前卵泡培养体系的建立,影响腔前卵泡发育的因素及研究进展进行了阐述,为进一步完善腔前卵泡培养体系,揭示其发育机理提供参考。     

体外培养牛腔前卵泡卵母细胞微绒毛的超微结构观察

牛腔前卵泡在无血清下体外培养 1 5d。超微结构研究显示 :培养前腔前卵泡卵母细胞微绒毛短小 ,分布均匀 ;培养 6d时 ,微绒毛略变粗长 ,但数量减少 ;培养 1 5d时 ,微绒毛增多 ,变长 ,斜向或垂直插入已经形成的透明带中。微绒毛的存在和变化表明腔前卵泡在该无血清体系中发育正常。     

猪腔前卵泡的分离及培养试验

试验建立了两种猪腔前卵泡的分离方法。方法I采用将卵巢剪成碎块（约2mm左右），通过孔径180μm网筛挤压过滤，其滤液用孔径40μm网筛过滤，检卵。方法Ⅱ是将剪碎的卵巢碎块用胶原酶消化1h,然后用孔径180μm网筛挤压过滤，滤液用孔径40μm网筛过滤,检卵。通过对猪卵巢腔前卵泡的分离及培养，发现方法Ⅰ分离的总体效果要优于方法Ⅱ。另外，还发现猪龄越大，腔前卵泡的回收率越低。不同的胶原酶浓度，其分离的效果也不一样，浓度越高越不利于培养。     

牛卵巢黄体状况与腔前卵泡采集数量的关系

根据牛离体卵巢黄体的不同状况，将31枚卵巢分为5种类型，并采用机构方法分离腔前卵泡，观察不同黄体状况卵巢与腔前卵泡采集数量的关系，结果表明，火山口型，圆锥型和蘑菇型3种大黄体的卵巢腔前卵泡采集量多，扁平片状和表面无黄体型卵巢腔前卵泡采集量较少，具有黄体状况的卵巢初级卵泡（Pm)采集数量多于无黄体类型卵巢，原始卵泡（Pf) 以3种黄体较大的卵巢采集数量最多，次级卵泡（Sc)则以黄体为火山口型卵巢为最多，说明卵巢黄体状况不同，其腔前卵泡采集数量有所不同。     

哺乳动物腔前卵泡的分离

随着胚胎移植、体外受精、性别鉴定、动物克隆、基因转移等技术的发展,卵母细胞来源匮乏成为制约这些技术研究进展的主要因素;开辟胚胎移     

哺乳动物腔前卵泡的研究进展

哺乳动物的卵巢中,含有数万个卵泡．其中绝大部分为原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡等腔前卵泡。然而能发育到成熟并排卵的卵泡为数甚少,约99．9％的卵泡在腔前卵泡阶段闭锁、退化,这无疑是动物遗传和育种资源的极大损失。目前,卵母细咆是休外受精胚胎移植、性别控制、胚胎分割、动物克隆和转基凶等胚胎生物技术研究和开发必不可少的材料,卵母细胞来源匮乏成为制约这些技术研究进展的主要因素,因此卵巢腔前卵泡的开发无疑是解决这一难题的有效途径。本文介绍了腔前卵泡研究的历史和现状以及最新的研究情况．目的是为有关的研究工作提供有益的启示和参考。     

卵巢大小及发育状况与牛腔前卵泡采集数量的关系

用简单机械分离法处理了 12 7枚成年牛卵巢。结果显示 ,在外观正常的卵巢中 ,腔前卵泡的采集数量与卵巢的大小成正相关关系 ,而有无黄体与腔前卵泡的采集数量无明显关系 ;卵巢上不同大小的可见卵泡的数量和分布与腔前卵泡的采集量有关。卵巢上可见卵泡分布均衡 ,大、中、小卵泡均有分布 ,小卵泡不过多以及无大卵泡 ,但中、小卵泡较多的 ,无论是否有黄体存在 ,均可获得较多腔前卵泡。而卵巢表面脂肪化、卵巢充血、有弥散性片状黄体及幼稚卵巢的 ,则腔前卵泡分离很少或几乎分离不到