高山被孢霉DNA提取方法的比较与改进

利用CTAB法、SDS裂解法、氯化苄法和溶菌酶消化法提取高山被孢霉菌团的DNA.结果表明,CTAB法提取的DNA收率与纯度均较高,收率在700μg·g-1菌团以上,蛋白质污染少;SDS裂解法提取的DNA收率和纯度均较低,蛋白质污染严重;氯化苄法提取的DNA纯度较高,且无需苯酚纯化,但其易降解成DNA片段,质量稳定性较差;溶菌酶消化法无需采用液氮研磨,提取的DNA能达到分子生物学分析的要求,但收率较低,且步骤烦琐,成本较高.用改进的CTAB法可得到高纯度、高收率的被孢霉DNA,并可用于酶切或PCR扩增.     

鱿鱼肌肉组织细菌基因组DNA提取方法的优化

采用十二烷基苯磺酸钠（SDS）法结合十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、SDS法结合溶菌酶法和CTAB法结合溶菌酶法对鱿鱼肌肉组织中细菌基因组DNA的提取效果进行比较。结果表明,SDS法结合CTAB法和SDS法结合溶菌酶法提取细菌总DNA的效果相近,CTAB法结合溶菌酶法提取细菌总DNA的效果相对较差,3种方法所提取的细菌总DNA纯度均较高,无需纯化即可进行进一步PCR扩增试验。变性梯度凝胶电泳结果说明,SDS法结合CTAB法较另两种方法能更真实地揭示待测样本中微生物的实际组成。     

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺.采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离3种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测其纯度.结果显示,层析纯化后SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2 235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76％;卵转铁蛋白抑菌率为48.84％.该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产.     

鸡蛋清中3种蛋白质的连续化提取工艺初步研究

[目的]研究鸡蛋清中溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白的分离提取工艺。[方法]采用硫酸铵沉淀和离子交换层析分离三种蛋白质,并用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）检测其纯度。[结果]层析纯化后 SDS-PAGE检测其纯度达到电泳纯,溶菌酶的比活由144.13 U/mg提高到2235 U/mg,纯化倍数达15倍,回收率为15.76%;卵转铁蛋白抑菌率为48.84%。[结论]该方法分离溶菌酶、卵转铁蛋白和卵白蛋白,工艺路线简单、快捷、成本低,适用于工业生产。     

葡萄籽中多酚类物质的提取和纯化工艺

为了考察从葡萄籽中提取、纯化多酚类物质的最佳工艺和条件,利用正交试验法筛选从葡萄耔中提取多酚的最佳工艺,用大孔吸附树脂对提取物进行纯化,选择最适树脂和最佳纯化条件.最佳提取条件:12倍体积60%乙醇超声提取4次,40 min/次,提取率达95%以上;最佳纯化条件:从7种大孔吸附树脂中选出纯化效果最佳的D101树脂,最大吸附量为175 mg/g树脂,用60%乙醇洗脱,解析率达95%,纯度达96%以上.该方法简单易行,周期短,成本低,所得多酚物质纯度高,总得率达80%以上,对工业生产具有重要意义.     

聚酰胺树脂层析纯化甘草黄酮的研究

比较不同条件下聚酰胺树脂对甘草黄酮的静态吸附和动态吸附的效果,确定甘草黄酮分离纯化的最佳条件.结果表明,聚酰胺树脂层析纯化甘草黄酮的最佳条件是:上样液浓度为3.51 mg/mL,pH 10.0,用70％乙醇以1.00 mL/min流速洗脱.对从1 g甘草中提取得到的甘草黄酮采用层析柱层析,发现回收率和纯度都较高.在最佳条件下,经两次层析可使甘草黄酮纯度达到49.75％.     

一种适用于太湖底泥基因组DNA的提取方法

采用6种方法对太湖底泥基因组DNA进行提取,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计测定和PCR扩增效果等反映DNA纯度和质量的指标,综合分析不同提取方法的优劣.结果显示,在提取过程中使用溶菌酶优于使用蛋白酶,冻融和TENP前处理过程耗时且效果不佳,二次沉淀在提高DNA纯度中起关键作用.结果表明,溶菌酶-SDS-二次沉淀法是一种适用于太湖底泥基因组DNA的提取方法,提取的DNA质量好、纯度高,更胜于包括土壤DNA快速抽提试剂盒在内的其他5种方法,可直接用于对DNA质量要求较高的后续试验中.     

上海牡丹根际土壤DNA提取方法研究

采用玻璃珠-溶菌酶法、蛋白酶K-SDS-热处理法、PVPP-溶菌酶-SDS法等3种土壤DNA提取方法,分别提取上海地区牡丹根际土壤DNA。玻璃珠-溶菌酶法、蛋白酶K-SDS-热处理法提取的DNA,含有大量的杂质,抑制PCR扩增反应,但分别用DNA溶液过柱纯化后不同倍数稀释和凝胶电泳回收纯化,都能扩增出相应的目的条带。PVPP-溶菌酶-SDS法提取的DNA杂质较少,直接用于PCR扩增反应,可以扩增出与预期一致的条带。PVPP-溶菌酶-SDS法不需要纯化,时间较短,可以有效地扩增出预期条带,适合上海地区牡丹根际土壤DNA的提取。     

枇杷叶中熊果酸的提取及纯化研究

[目的]研究枇杷叶中熊果酸的提取及纯化方法。[方法]以新鲜采摘的枇杷叶为试材,采用乙醇水溶液对其熊果酸物质进行提取,并采用大孔吸附树脂和乙醇重结晶技术对熊果酸进行纯化。在纯化中,比较X-5树脂与D101大孔吸附树脂处理对熊果酸纯化效果,研究乙醇重结晶技术对熊果酸的纯化效果。[结果]粗提的熊果酸,经过X-5树脂和D101纯化后含量分别提高了28.60%和30.21%,D101树脂的纯化效率优于X-5树脂。在重结晶纯化中,随着重结晶次数的增加,样品中的熊果酸纯度越来越高,在经过5次结晶后,熊果酸的纯度达到了95.30%,比经过D101大孔树脂纯化的样品提高了约2.6倍。[结论]该研究为熊果酸的提取纯化提供了高效绿色的途径。     

分离纯化金银花绿原酸工艺研究

[目的]研究从金银花中提取、纯化绿原酸的工艺。[方法]通过单因素试验和正交试验,筛选最佳提取条件和纯化条件。[结果]最佳提取工艺条件为：提取温度60℃,提取溶剂为60%乙醇（V/V）,pH值为4,提取时间为1.5h,料液比为1∶25。在此条件下,提取的绿原酸得率为4.52%。最佳纯化工艺条件为：洗脱液浓度20%,洗脱液体积为5BV,洗脱液pH值为8,洗脱液流速为5ml/min。在此条件下,纯化的绿原酸产品纯度为58.3%。[结论]该试验得到了绿原酸最佳提取条件和纯化条件,为绿原酸的工业化生产提供了理论试验依据。