鸡新城疫病毒La Sota株F基因克隆及原核表达

参照NDVLa Sota株核酸序列(AF077761)设计1对引物,利用RT-PCR扩增F基因并得到了长为1 700 bp的片段,将其克隆到pGEM-T easy vector中,经酶切鉴定和测序后克隆进原核表达载体pET-32a,将重组表达质粒转化BL21(DE3),在IPTG诱导下表达约83 kd的融合蛋白,SDS-PAGE电泳和Western blotting检测证实该基因片段获得高效表达且表达产物具有免疫学活性。     

金银花、山银花绿原酸类提取物体外抗NDV作用研究

为研究比较价格差异较大的金银花和山银花的体外抗病毒作用,分别提取金银花和山银花绿原酸类活性成分,利用Vero细胞体外培养系统,通过观察细胞病变效应（CPE）,并用MTT法检测细胞活性来评价和比较金银花和山银花绿原酸类提取物体外抑制新城疫病毒（NDV）对细胞的感染作用。结果表明：在安全浓度范围内,金银花和山银花绿原酸类提取物均具有显著的抗病毒作用,体外对NDV分别具有明显的阻断作用、抑制作用和中和作用,且两者之间的抗病毒效果差异不显著。本试验为价格相对便宜的山银花在一定领域部分代替金银花提供了实验依据。     

磺胺甲噁唑残留检测阻断ELISA试剂盒的研制

在建立磺胺甲噁唑单克隆抗体(SMZmAb)杂交瘤细胞株和阻断ELISA方法的基础上,研制出SMZ残留快速检测试剂盒(SMZ-Kit),并对其性能进行了测定.结果表明,SMZ-Kit的标准曲线呈典型的S型,符合4参数logit曲线拟合,相关系数R2=0.990 1,检测范围为1.0～128.0 μg/L,灵敏度为0.73 μg/L,半数抑制浓度(IC50)为11.5 μg/L,检测限为1.0μg/L;饲料样、牛奶样的平均添加回收率为83.9%,83.3%,平均批内和批间变异系数均<15%;SMZ-Kit与磺胺嘧啶的交叉反应(CR%)为2.88%,与其他磺胺类药物无交叉反应;试剂盒在4℃可保存6个月.     

小麦指纹图谱数据库的建立及SSR分子标记试剂盒的研发

本研究以国际玉米小麦改良中心（CIMMYT）、国际干旱地区农业研究中心（ICARDA）、法国Agropolis研究所和中国农业科学院作物科学研究所提供的数据为基础，建立了包括134个SSR引物、2457个普通小麦基因型的指纹图谱数据库。利用荧光标记法的分析结果，用代表性基因型在某一位点的扩增片段作为银染法的读带依据，开发了SSR分子标记试剂盒，包括46对SSR引物及其PCR反应程序、代表性基因型的DNA样品、592个等位变异的代表性基因型清单及试剂盒使用说明等。该数据库的建立和试剂盒的开发，为利用SSR分子标记技术进行小麦种质遗传多样性研究，实现小麦遗传资源和信息资源全球共享提供了重要工具和技术平台。     

检测传染性支气管炎抗体NP-ELISA方法的建立

【研究目的】建立可在临床上检测鸡传染性支气管炎抗体的检测IBV抗体的间接ELISA方法;【方法】以表达的重组IBV NP 蛋白为包被抗原,将之包被于聚苯乙烯酶标板上,以封闭液进行封闭,然后加待检血清在37℃作用1h,洗涤后加酶标兔抗鸡IgG抗体,在37℃作用1h,加底物显色,终止反应后测定OD值;【结果】抗原包被浓度为1.45mg/ml,待检血清最佳稀释度为1:40,酶标二抗最佳工作浓度为1:1000,确定阳性判定标准为OD450≥0.314。NP-ELISA与AIV H9、H5、H7、IBD、ND、EDS76 的标准阳性血清不发生交叉反应,具有良好的特异性;【结论】NP-ELISA具有特异性强、灵敏度高、重复性好、方便快速的特点,可用于临床IB抗体的检测。     

Development of an Optical Fiber Spectrograph for Detecting Living Liquid

This paper introduces a fiber optical spectrograph which can directly measure the liquid of the living body. Based on the property of fiber optical and capillary, the authors design a special optical fiber probe which can directly insert the living body to sample the liquid and plunge the liquid into the optical path. That is ,the sample liquid can be directly tested without any pre processing. So this operation simplified the detecting process and perform measurement in situ. In order to improve the sentivity of the probe, the optical fibers in the probe are distributed in layers so as to increasing the optical length of the living liquid. On the other hand, the computer control the stepward motor to rotate through the pulses emitting from the parallel port of the computer so as to drive the quart prism rotating. The optical signal is accepted by the photomultipler and sampled by the computer. This spectrograph can display in time the spectrum of the living liquid on the screen. Through analysing the spectrum of the living liquid, many living parameters can be detected.     

猪流行性腹泻胶体金抗体检测技术的建立及其应用

摘 要：目的：建立一种高效、经济、简便适用于基层防疫检疫人员使用的猪流行性腹泻(PED)疾病的检测方法。方法：参考已知的胶体金免疫层析法(GICA)工作原理基础之上,将葡萄球菌蛋白A(SPA)进胶体金标记作为指示介质,将基因工程表达PEDV M蛋白抗原和自制的抗SPA多抗血清包被硝酸纤维素膜(NCM) 分别作为检测线和质控线,由此制成一种检测PEDV血清抗体的快速诊断试纸。其特异性、敏感性试验与ELISA进行比较。结果：该GICA与参考检测方法ELISA具有相近的灵敏度,在二者检测的75份临床样本中有65份共同检测为阳性结果,7份共同检测为阴性结果,其符合率达96％。结论：该GICA检测技术的建立为检测PEDV抗体提供了一种快速简便的方法。     

克伦特罗残留GC-MS检测方法的建立及对自制试纸条性能的确证

建立了猪尿液中盐酸克伦特罗（CL）残留的GC-MS检测方法,并对自主研制的CL残留快速检测免疫金标试纸条（CL-Strip）进行了比较分析。结果表明,GC-MS的检测限为0.5ng/ml,CL-Strip的检测限为1.0ng/ml;CL-Strip与GC-MS两者的加标测定实验结果完全一致;用CL-Strip检测出的100份阴性尿样和18份阳性尿样,与GC-MS检测结果完全一致。说明CL-Strip与GC-MS同样灵敏、准确、稳定,由于CL-Strip具有简便、直观、快速、敏感、特异、准确等优点,建议在CL残留快速检测中推广应用。     

MTT法检测大鼠外周血淋巴细胞增殖反应探讨与应用

为了更精准简捷地评价机体的细胞免疫状态,采用MTT比色分析法检测大鼠外周血淋巴细胞的增殖能力,并对试验的最适条件进行了探讨,然后将该法应用到Transwell共培养体系中以评价H9N2 AIV感染内皮细胞后对跨内皮淋巴细胞增殖能力的影响。结果表明：在96孔细胞培养板中接种密度为1.25×10⁶个/mL的淋巴细胞于含10% FBS的RPMI 1640培养基中培养的最适时间为48 h。感染病毒后,跨内皮淋巴细胞的增殖明显受抑制;内皮完整状态下,淋巴细胞和病毒共孵育后,活病毒的量降低,而当内皮不存在或被病毒感染后,这一现象消失。结果证明作为机体细胞免疫功能评价指标之一的淋巴细胞增殖能力可采用改良后的MTT法检测。     

棉花黄萎病菌毒素ELISA检测方法的建立及其应用

以纯化的棉花黄萎病菌毒素(PLPC)免疫新西兰白兔制备了PLPC特异性抗血清,建立了可特异性检测棉花黄萎病菌毒素的A蛋白双抗体夹心ELISA方法。应用建立的ELISA方法测定了病菌培养滤液、人工接种幼苗和大田病株不同组织中的毒素,结果表明:不同产毒能力菌株(VD 8和VD-5)在25℃下振荡培养3d后就能在培养滤液中检测到毒素,这比生物测定要早2～3d。将VD-8菌株的孢子以灌根方式接种泗棉3号幼苗5d后,就能从接种幼苗的茎杆和叶柄中检测到毒素,这比幼苗自然发病显症要早3～5d。在测定的30份大田病株茎杆、叶柄、叶脉样品中,阳性样品率为100%。这些结果表明建立的ELISA方法可用于菌株产毒能力的测定和大田棉花黄萎病的早期诊断。     

纳米磁珠联合PCR检测甘蔗杆状病毒方法的建立和初步应用

本研究通过对DNA提取裂解液的成分和用量以及裂解时间等因素进行系统优化,建立了一种高通量的磁珠法提取甘蔗总DNA,再进行PCR检测甘蔗杆状病毒(SCBV)的方法。采用核酸自动提取仪,应用纳米磁珠提取甘蔗总DNA,经PCR检测甘蔗杆状病毒,并与以试剂盒提取DNA为模板的PCR检测结果进行比较。结果显示,经优化的裂解液成分为EDTA·Na20.08 mol/L、NaCl 0.8 mol/L、SDS 2%和Tris-HCl0.10 mol/L,裂解时间为20 min,可用于纳米磁珠提取甘蔗总DNA进行SCBV检测。所建立的方法通量高、成本低、耗时短,可用于SCBV的批量检测。     

PCR技术在水产养殖动物病原微生物检测中的应用

随着我国水产养殖集约化程度不断提高,虾类、贝类和鱼类养殖业受到病原微生物的严重影响.因此,如何快速准确预测和诊断水产动物疾病,成为当前水产养殖业十分重要而突出的问题.近年来,随着PCR技术的介入,带动了水产养殖动物病原微生物的检测技术快速发展.文章介绍了PCR及其衍生技术(RT-PCR,Real-time PCR,免疫PcR,套式引物PCR,多重PCR)的原理、特点及在水产养殖动物病原微生物检测中的应用,并对水产养殖动物病原微生物诊断技术的发展方向做出了展望.     

小麦天然钙调素抗体制备及酶标免疫组化定位

以小麦不修饰的天然钙调素(CaM)制备抗体.免疫学特性分析表明,小麦CaM抗体不能与牛脑CaM发生交叉反应,而可与多种植物CaM发生良好的交叉反应,即所得抗体对多种植物CaM是专一的.酶标免疫组化法在烟草愈伤组织细胞定位表明,细胞质CaM含量较高;在细胞核中,特别是核仁中亦含有CaM.     

牛奶中抗生素残留检测方法的研究进展

介绍了牛奶中抗生素残留检测方法的研究进展,并论述了其检测原理。     

用平板式超滤机浓缩鸡新城疫病毒及法氏囊病毒试验效果观察

采用ＵＦ１型工业平板式超滤机对鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）及法氏囊病毒（ＩＢＤＶ）进行了初步的浓缩试验。该设备浓缩工艺简单、效率高,浓缩液ＨＡ效价与未浓缩液比较按浓缩比率相应上升。用浓缩液与未浓缩液制成灭活疫苗免疫鸡,均可获得１００％抵抗ＮＤ及ＩＢＤ的保护力,以浓缩苗免疫的ＮＤＨＩ抗体及ＩＢＤ中和抗体滴度明显高于未浓缩苗。试验表明,浓缩苗安全有效,并优于未浓缩苗。     

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测方法建立及初步应用研究

为建立一种特异、敏感的PEDV的检测方法。根据GenBank中公布的猪流行性腹泻病毒CV777株的M基因序列,设计了一对特异性引物,扩增长度为680 bp的片段。将PCR产物进行测序,与CV777株、SH5株M基因的同源性分别为99.2%和97.6%。试验表明：该方法具有较好的特异性和敏感性,并能检测到PEDV的RNA浓度下限为100 pg/μL。从福建省的3个地区共采集58份哺乳仔猪腹泻样品,并应用此方法进行检测,其阳性检出率为87.9%。     

Development and Application of a Ultrasound Image Management System

Aimed to enhance data processing ability and to server perfect information management of B-scan this system is emerged.Integration of with a standard PC and a B-scan with a video capture card,this system researched and developed a B-scan diagnostic and management system including image capture,image processing and data management function.The system implement image processing and analysis functions consisting of image enhancement,geometrical parameters calculation and so on.Otherwise it provides convenient diagnostic report creation function,powerful archive management and printing function,namely it realizes a efficient and cute PACS system.By incomparable advantage of standard PC,this system improves and upgrades the performance of traditional B-scan, improves the doctors' work efficiency greatly.     

基于甜樱桃“最初一公里”小型移动预冷机的研制及应用

采后预冷是果蔬冷链的第一个重要环节,是保证保鲜流通过程中果蔬品质的首要措施。研制的预冷机基于我国甜樱桃采后市场和电商运作的现有状况,可为实现产地直发最初一公里提供保障。预冷机各组件系统呈现一体化、可移动方式,可在不同使用者间实现共享,提高了预冷机利用效率。预冷机优化结构设计及高性能材料的使用,使设备运行总体效率提高,预冷更加快速、省工、省电、省力,投资成本也大幅降低。此预冷机在甜樱桃产地的推广应用,可达快速、无伤预冷的效果,延长货架期,进一步提高果品的耐贮性,并扩大流通距离、扩展销售市场。     

红掌已知品种库的建立与应用

通过建立红掌已知品种数据库,了解国内市场上红掌品种的现状,为新品种选育提供指导,同时探讨已知品种数据库在新品种DUS测试中的应用。历时4年共收集了87个红掌品种,构建了红掌已知品种数据库。计算39个DUS测试性状的变异系数和遗传多样性指数,对数量性状进行相关性分析,比较了直接筛选和聚类分析方法在筛选近似品种上的应用。结果表明,红掌质量性状（假质量性状）的变异系数为14.00%~89.29%,平均变异系数为43.67%,平均遗传多样性指数为0.93;数量性状的变异系数为17.63%~32.34%,平均变异系数为26.59%,平均遗传多样性指数为1.02,表明红掌品种间多样性不够丰富,遗传基础较狭窄。相关性分析表明,所有数量性状间均显著正相关。根据调查问卷提供的性状直接从已知品种库筛选或以聚类方法均可有效地筛选或验证近似品种的有效性。可见红掌已知品种的遗传多样性指数偏低,不利于品种的进一步改良,已知品种库的建立可为DUS近似品种的筛选提供支撑。