萝卜愈伤细胞凋亡的初步研究

[目的]探明萝卜无菌苗组织培养过程中愈伤组织细胞凋亡的形态变化。[方法]以萝卜种子为材料,通过组织培养获得无菌苗和诱导出愈伤组织,利用离子胁迫诱导愈伤组织的细胞凋亡,并对其样品进行组织制片,染色后用光学显微镜观察与电镜超薄切片观察萝卜愈伤组织凋亡形态变化。[结果]在萝卜的细胞凋亡过程中存在和动物细胞凋亡类似的染色质浓缩、颗粒化和边缘化以及后期发生降解形成凋亡小体等现象。钠离子和钙离子对萝卜愈伤组织细胞凋亡的影响程度不同,钠离子影响不大,而钙离子对细胞凋亡影响较明显,且随着离子浓度的增加,凋亡所需时间越短。[结论]细胞凋亡的过程往往伴随染色质DNA的特异性断裂,形成寡聚核苷酸片段,电泳后形成DNA梯形带。     

人参原生质体的分离培养

以人参愈伤组织细胞悬浮系为材料,研究了人参原生质体的分离纯化方法及影响因素.结果表明:以人参愈伤组织细胞悬浮系为材料,在加入1%纤维素酶和0.5%果胶酶、甘露醇浓度0.7 mol/L的酶解液中酶解8 h分离得到的人参原生质体产量最高;采用人参与胡萝卜共培养培养基,进行看护培养成功地培养出愈伤组织.     

烟草细胞凋亡过程中核酸酶活性研究

以烟草为材料 ,以 2 -甲基萘醌为诱导物 ,研究了植物细胞凋亡过程中核酸酶活性 ,结果表明 :2 -甲基萘醌诱导的烟草原生质体使鸡血红细胞发生了典型的凋亡现象 ,加入Zn2 +、EDTA、EGTA、AC -DEVD -CHO的样品无“DNAladder”出现 ;加入Ca2 +、Mg2 +后 ,“DNAladder”重新形成。 2 -甲基萘醌诱导的胞浆提取物和细胞核与只加细胞色素C诱导的胞浆提取物在电泳图上出现相同的蛋白条带 ,分子量约 36KD。从而表明 :烟草细胞凋亡过程中有特异核酸酶被激活 ,该核酸酶活性依赖于Ca2 +、Mg2 +,被Zn2 +、AC -DEVD -CHO抑制 ,该酶活性与caspase凋亡通路有关     

疣粒野生稻原生质体再生小植株

 以我国特有的疣粒野生稻成熟胚和幼穗作外植体诱导愈伤组织 ,挑选致密颗粒状愈伤组织建立胚性细胞悬浮系并分离原生质体 ,将原生质体固体包埋后添加液体培养基进行培养。在培养过程中调节培养体系渗透压诱导产生胚状体 ,成功得到疣粒野生稻的原生质体再生植株 ,对提高原生质体再生频率的途径进行了探讨。     

适宜原生质体分离的美味猕猴桃愈伤组织的筛选

由美味猕猴桃东山峰 79- 0 9品种诱导产生的 4种类型愈伤组织 ,其分离原生质体的效果不同 :A型愈伤组织分离的原生质体数量多 ,但活力较低 ;B型愈伤组织分离的原生质体不仅数量较多 ,而且活力也高 ;C型愈伤组织分离的原生质体数量少 ,但活力高 ;D型愈伤组织分离的原生质体数量较多 ,但活力低     

不同浓度激素对胡萝卜愈伤组织诱导的影响

研究了不同浓度激素组合对胡萝卜愈伤组织诱导的影响.结果表明:低浓度使用单一激素时,胡萝卜愈伤组织诱导率随着激素浓度的升高而升高;当2,4-D浓度超过2.5 mg/L时,随着浓度的升高,对胡萝卜愈伤组织诱导影响不明显;当6-BA浓度超过0.5 mg/L时,胡萝卜愈伤组织诱导率随着浓度的升高而降低.当2,4-D与6-BA搭配使用时,愈伤组织诱导率明显上升,当2,4-D浓度为1.5～2.0 mg/L、6-BA浓度为0.5～0.8 mg/L时,愈伤组织生长极快,诱导率最高.     

包心菜无菌苗子叶及叶片原生质体高频分裂和高频植株再生

以包心菜子叶和叶片原生质体为材料。经不同液体培养基(Bp1,Bp2,B1)浅层培养,再生细胞高频分裂并形成愈伤组织。愈伤组织经扩增后转移到分化培养基上诱导植株分化,从这两种原生质体中获得了再生植株。在原生质体培养过程中,原生质体及细胞团的褐化程度与培养基中的有机成分的多少有关。原生质体的分化频率与培养基中植物激素种类关系甚大。在植株分化时,谷氨酰胺和腺嘌呤对植株分化有很大促进作用。另外,原生质体的来源及原生质体培养基对原生质体植株分化能力均有不同的影响。     

不同诱导剂诱导黄瓜愈伤组织凋亡的研究

以黄瓜愈伤组织为材料,比较二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)、VK3和CaCl2相同浓度诱导细胞凋亡的差别。将愈伤组织悬浮培养并分离单细胞后进行活性检测和荧光检测,并对其DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明,3种诱导剂都能诱导黄瓜愈伤组织凋亡,诱导能力VK3>DMSO>CaCl2。     

胡萝卜悬浮细胞原生质体的培养及植株再生的研究

采用继代培养4～5 d 后的胡萝卜悬浮细胞,经酶解获得大量原生质体,并在不同的培养基上经培养,细胞进行分裂,形成愈伤组织,获得了完整的再生植株。探讨了影响原生质体培养及植株再生的多种因素,实验表明:①原生质体的培养密度在5×10~4/mL～5×10~5/mL 范围内均可,以2.5×10~5/mL 为佳。②对于细胞的分裂、细胞团的生长以及愈伤组织的形成,以改良的 B_5培养基最好,N_5培养基其次,MS 较差。③适当降低原生质体培养基中的甘露醇浓度,有利于细胞的分裂和生长。④在本实验所涉及的培养方法中,以液体浅层培养为优。⑤诱导愈伤组织分化,以 1mg/L KT 为佳。⑥不同培养基对愈伤组织的生长速度和分化频率产生一定影响,以 MS 培养基提高分化频率效果较好。     

草木樨愈伤组织的诱导及其原生质体的制备

为建立草木樨的细胞融合原生质体杂交体系,以白花草木樨嫩叶为材料,以MS为基本培养基,在2,4-D和6-BA不同激素水平下研究愈伤组织诱导率,并在不同的酶液组分和酶解时间下对愈伤组织进行酶解制取原生质体。结果表明:随着激素2,4-D和6-BA浓度的增大,愈伤组织的诱导率呈先增大后减少的趋势变化,当激素2,4-D和6-BA浓度分别为1.5、0.3 mg/L时,诱导率最高,可达90%。草木樨愈伤组织在2.0%纤维素酶、0.3%果胶酶、1.0%离析酶中酶解15 h为最佳,此时有活力的原生质体产量最高,可达1 890×104个/g。