适于AFLP分析的大麻干叶DNA快速提取方法研究

基因组DNA提取是分子生物学实验研究的一项基础技术,而高质量DNA是AFLP试验成功的关键.本研究在传统CTAB法的基础上进行4种处理来提取大麻干叶片基因组DNA,以β-巯基乙醇,PVP-40和抗坏血酸不同组合及浓度为因素进行了试验.试验结果表明:在4种处理中,采用在提取液添加2%β-巯基乙醇(V/V)和3%PVP-40(M/V)提取的DNA质量最高,无褐化,紫外分光光度计测定其OD260/OD280为1.8～2.0,经酶切消化,AFLP-PCR扩增的带型清晰稳定,重复性好,说明这种改进DNA提取方法适于大麻AFLP分析.     

大麻基因组DNA提取方法的比较与优化

以大麻的幼嫩叶片和风干叶片为材料,分别采用优化的SDS法、CTAB法、高盐低pH法和碱裂解法这4种不同方法提取基因组DNA,并比较提取质量和效率.结果表明,采用4种提取方法,大麻干样叶和鲜样叶均可获得清晰DNA目的条带,鲜样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：SDS法＞CTAB法＞高盐低pH法＞碱裂解法,干样叶基因组DNA纯度和得率的顺序为：高盐低pH法＞SDS法＞CTAB法＞碱裂解法,优化的SDS法适用于大麻鲜样叶基因组DNA提取,而大麻干样叶基因组DNA的提取选用优化的高盐低pH法最适宜.     

剑麻核酸的高效提取及应用

针对剑麻组织中多糖、多酚和次生物质含量高的特点,对其总RNA和基因组DNA提取进行研究。比较了改良SDS法、改良CTAB法提取总RNA和SDS法、CTAB法提取基因组DNA的效果,结果表明：改良CTAB法提取总RNA效果较佳,所得RNA OD260／OD280高于1．8,OD260／OD230大于2．0,而CTAB法提取基因组DNA纯度和完整性较好。基于RNA和DNA水平,分别对剑麻的苯丙氨酸解氨酶基因（PAL）RT—PCR和RAPD反应体系进行优化,均得到理想条带。此方法提取剑麻的核酸可运用于后续分子生物学研究,为其它材料核酸的分离提供参考依据。     

柚基因组DNA提取方法的研究

以下河蜜柚的幼嫩叶片为材料,采用CTAB法、SDS法和SDS-CTAB法3种不同的DNA提取方法提取其基因组DNA,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。分析结果表明,无论从得率还是DNA质量上看, SDS-CTAB法明显优于其它两种方法。     

茶树基因组DNA提取纯化技术研究

本研究以福鼎大白茶，云南在叶种为材料，设计了六种茶树基因组DNA提取纯化方案，以纯品DNA的OD260／OD280比值1．8为标准，参考基因组DNA的制率及分子量大小，确定了茶树基因组DNA最佳提取纯化方法，实验表明，不溶性聚乙烯吡咯烷酮和饱和酚对提高茶树基因组DNA纯化质量是十分有益的。     

一种适于PCR扩增的荞麦DNA大量提取及纯化方法

为满足对大批量材料进行分子标记检测的需要,以荞麦叶片为材料,针对荞麦叶片中黄酮含量高,提取荞麦基因组DNA时采用改良的CTAB方法,该方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳和检测,获得的DNA条带较亮、无RNA、无拖尾现象;经分光光度计检测获得数据证明酚类、蛋白质较少。利用ISSR引物对提取的荞麦基因组DNA进行PCR检测,能获得清晰稳定的条带,说明该方法提取的荞麦基因组DNA能满足PCR反应的需要。     

小麦幼叶DNA微量快速提取方法的改进

为满足对大批量材料进行分子标记检测的需要,以小麦幼叶为材料,探索了在液氮和无液氮条件下提取DNA方法的改进.结果表明,改进提取法Ⅰ(用液氮)中,水浴中加KCl抽提一次便可得到质量较好的DNA,且液氮用量是常规提取法的1/40～1/30;改进提取法Ⅱ(无液氮)中,水浴后加KCl比水浴前加KCl及不加KCl的RNA含量和杂质含量低,OD260/OD280比值大,DNA浓度和纯度有所提高.两种改进方法提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳检测都能得到质量较高的DNA图谱,又经SCAR-PCR扩增均能得到2条片段大小相同的条带.     

不同方法对甜菜不同组织中总DNA的提取效果

以甜菜的幼嫩叶片、幼嫩花序、萌动种子及糖分积累期块根为提取材料,分别采用高盐低p H法、改良十二烷基硫酸钠(SDS)法、改良十六烷基三乙基溴化铵(CTAB)法及碱裂解法4种不同方法进行总DNA提取,对比不同提取方法及提取部位对提取效果的影响。结果表明,CTAB法适宜于叶片的DNA提取;SDS法适于对花的提取,而且对根和种子的提取效果也优于其它3种方法 ;碱裂解法具有简便快速的优点,但得率低,杂质去除不彻底,有可能影响后续试验,适用于对产量与质量要求不高时的快速提取;高盐低p H法提取的DNA浓度及得率均较低,且产物纯度不高,不建议作为首选方法。甜菜4种组织中,叶片最适合作为提取材料,花次之;根和种子的提取难度较大,建议提取时增加纯化与浓缩步骤。     

利用涡旋混合器对棉花基因组DNA提取方法的优化及SSR技术应用

为获得80个陆海杂交高代自交系材料的幼嫩叶片的高纯度、高完整性的DNA,应用涡旋混合器对传统的棉花基因组DNA的提取过程进行改进。结果显示:获得的棉花基因组DNA具有高完整性、高纯度的特性,SSR分子标记结果明显。利用涡旋混合器能有效提高棉花基因组DNA完整性及纯度,为后续开展棉花分子育种奠定了基础。     

改良高盐高pH法提取大豆DNA

大豆除了含有大量的脂类和蛋白质外,还含有糖类和酚类物质,为解决难于从大豆中提取高质量DNA和传统提取方法耗时长的问题,本研究以中豆41与天隆一号的幼嫩叶片(V3)和成熟种子作为材料,对高盐低pH法进行改良,提高其裂解液pH值,同时结合冷冻裂解法缩短裂解时间,使用不同pH值醋酸钠纯化DNA,并与经典CTAB法进行比较,评价其提取DNA的效果及其应用范围。结果表明,高盐高pH法对成熟种子的DNA提取效率较高,且蛋白与RNA污染少。CTAB法提取的DNA虽然完整性较高,但是耗时较长,蛋白与RNA污染较多。另外,高盐高pH法提取的DNA PCR扩增条带清晰,与常规CTAB法提取DNA扩增效果一致,但其DNA质量不能满足高通量测序要求。综上,改良的高盐高pH法是一种快速有效的大豆DNA提取方法,可满足常规分子试验的要求。     

橡胶树叶片染色体制片方法的优化

采用压片法、酶解去壁低渗法和悬液法等方法,对橡胶树热研7-33-97古铜期嫩叶染色体制片及其过程中预处理药剂、预处理时间、前低渗温度、酶解时间等因子进行了探讨.结果表明:悬液法更适合橡胶树叶片染色体制片.最佳预处理药剂为0.1%的秋水仙素和0.002mol/L 8-羟基喹啉混合液,预处理时间为2 h.酶解温度37℃,时间为5～7 h.     

转移巴西橡胶树HbCBF1基因提高烟草抗寒能力的研究

通过农杆菌介导的叶盘转化法将巴西橡胶树HbCBF1基因导入到烟草中增强表达。GUS染色和PCR鉴定结果表明,外源DNA片段已成功导入并整合到烟草基因组中。选取3个烟草转基因株系用于进一步鉴定分析,分析表明,转化植株游离脯氨酸含量与对照相比,分别上升了4.2倍、3.1倍和2.5倍,叶绿素A和叶绿素B含量也明显提高。电导率法测定转化烟草的相对存活率分别为19.8%、17.5%、16.3%,高于对照植株的7.7%。以上结果表明,橡胶树HbCBF1基因能够增强非低温驯化植物烟草的抗寒能力,其机理可能是通过促进细胞内容物的积累从而提高细胞的低温防御能力。     

橡胶树叶片转化酶提取方法的比较

比较液氮研磨样品与蛋白抽提液研磨样品对6种提取橡胶树叶片转化酶方法的效果。结果表明：液氮研磨法对转化酶活性影响很大，特别是中性/碱性转化酶和细胞壁结合的酸性转化酶已基本失活，而可溶性酸性转化酶活性丧失也比较严重。利用蛋白抽提液研磨样品，用Hepes-NaOH法提取的可溶性转化酶的酶活性最高，达472.44 μmol（glucose）/[g（FW）·h]； 虽然磷酸-柠檬酸法获得的粗酶液的蛋白含量较低， 但其酶活性高达441.61 μmol（glucose）/[g（FW）·h]； Tris-HCl法提取的细胞壁结合酸性转化酶的酶活性最高， 达35.83 μmol（glucose）/[g（FW）·h]。从转化酶的比活力看，磷酸-柠檬酸法最佳，所提取的可溶性转化酶比活力约为Hepes-NaOH法的4倍。本研究结果为进一步完善橡胶树叶片转化酶的提取方法提供重要的指导意义。     

橡胶树AtCAB1同源基因的克隆及其在稳定与衰老期叶片中的差异分析

以一编码蛋白与拟南芥的CAB1高度相似的EST序列作为探针,通过同源搜索从橡胶树的转录组数据中电子克隆到一条长1 415 bp的cDNA,该序列包含一798 bp的ORF及47 bp的5′UTR和570 bp的3′UTR,命名为HbCAB1;在此基础上,采用PCR技术成功扩增了包括该ORF在内的915 bp的cDNA序列。序列分析表明,该基因预测编码265个氨基酸,理论分子量为28.15 ku,等电点为5.25;蛋白含有1个保守的捕光叶绿素a/b结合蛋白结构域,3个跨膜螺旋和1个C端螺旋,1个三聚化基序,     

巴西橡胶树橡胶粒子研究进展

橡胶粒子是橡胶树乳管细胞质中进行橡胶生物合成的一种特殊细胞器,其内部的主要成分橡胶烃分子,是天然橡胶的直接来源.橡胶生物合成是在橡胶粒子膜上进行的,橡胶转移酶和橡胶延长因子等是参与橡胶生物合成的重要橡胶粒子膜蛋白.它们决定着橡胶粒子的橡胶生物合成速率,并影响橡胶树胶乳产量和橡胶质量.橡胶粒子膜上存在与橡胶生物合成相关的茉莉酸和乙烯信号响应蛋白,茉莉酸、乙烯可能是通过橡胶粒子膜上的茉莉酸、乙烯信号响应蛋白对橡胶生物合成产生调控作用.从橡胶粒子的基本结构、起源和发育、橡胶粒子膜蛋白的组成和功能3个方面对橡胶粒子细胞组织学和分子生物学的研究进展进行综述.可为橡胶树产胶生理学的深入研究提供参考.     

粤西地区橡胶树炭疽病流行因素分析

对橡胶树炭疽病发生和流行的调查、观察结果表明，病菌越冬场所广泛，其寄主带菌率高（40％－100％）。一年中只要抽嫩叶病菌都可以侵染为害，在橡胶树抽第一蓬叶时遇上雨天高湿环境病害就可注行。分析粤西地区20a资料发现，嫩叶期间的雨日和＞90％RH的天数、嫩叶期长短、嫩叶期寒潮（11－15℃）的天数及最低温度在11℃以下的天数与寅害流行密切相关。嫩叶期间的雨日和＞90％RH的天是病害流行的主导因素，低温阴雨天气是加速病害发展的重要条件。     

针刺采胶与未沤熟有机肥对橡胶树死皮病发生的影响

通过调查发现,针刺采胶结合电石刺激和施用未沤熟的有机肥会提高橡胶树死皮病的发生。针刺采胶结合电石刺激的橡胶树死皮停割率为45.7 %-63.0 %,而胶刀割胶结合乙烯利刺激的4个林段橡胶树死皮停割率为6.4 %-27.8 %。施用未沤熟的有机肥,死皮停割率达到33.6 %,而施用沤熟有机肥的死皮停割率为6.7 %-21.5 %。     

恢复生长与电导法结合分析橡胶树抗寒性研究

研究低温胁迫下,橡胶树(Hevea brasiliensis Muell.Arg.)不同组织的抗寒性情况以及品种间的差异,为进一步研究橡胶树的冷敏感性或耐受机制奠定基础.以橡胶树'云研77-4'和'热研8-79'无性系幼苗为材料,进行不同低温类型的室内低温胁迫处理,对橡胶树不同叶片和茎杆组织进行电导率测定,并结合恢复生...     

巴西橡胶树叶片蛋白样品的制备及质谱初步分析

采用TCA-丙酮沉淀法并稍做改进提取巴西橡胶树叶片总蛋白,蛋白溶解后,用试剂盒对蛋白上清液进行纯化和浓度测定。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和双向凝胶电泳(2-DE)的结果均表明,所制得的蛋白样品质量较高,并且纯化过的蛋白样品2-DE(双向电泳)图谱效果更好(7 cm,考染)。根据预实验结果,选用17 cm IPG预制干胶条对纯化的蛋白样品进行2-DE实验,采用快速银染法进行染色,随机挖取银染胶上6个蛋白点进行MALDI-TOF MS分析和数据库检索,鉴定了3个蛋白,它们是：1-氨基环丙烷-1羧酸合酶2,核酮糖-1,5-二磷酸羧化酶/加氧酶大亚基和F11O4.2。本实验为进一步对巴西橡胶树叶片中具有重要生物学功能蛋白的筛选和鉴定打下了方法学基础。     

巴西橡胶树割胶树皮伤口的组织学和组织化学的变化

用光学显微镜技术和组织化学方法研究了巴西橡胶树（Hevea brasiliensis Muell．Arg．）割胶树皮伤口的变化，并测定了乳管中重要的防卫蛋白质几丁质酶在树皮伤口的积累和消失。结果表明，割胶诱导割口树皮组织产生伤害反应使割口得到保护。割口树皮依次出现3种防卫机制：（1）乳管预先形成的物理和化学防卫物质（橡胶粒子和包括几丁质酶在内的防卫蛋白质）在树皮伤口表面和乳管伤口末端的积累；（2）伤口周围的组织形成的化学防卫物质单宁、木质素和木栓质等；（3）在较长时间停止割胶（如冬季停割）时形成防卫结构创伤周皮。前两种防卫机制的作用是暂时的，只有最后创伤周形成时，树皮伤口才能得到充分有效的保护。