不同获能方法对冻融塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化的影响

为探讨不同获能方法对塔里木马鹿精子体外获能及其蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响,冻融塔里木马鹿精子随机分为4组,用钙离子载体、肝素、咖啡因和 Percool 离心4种方法进行精子获能的诱导,利用金霉素（CTC）染色法评价精子获能状态,采用 SDS-PAGE 分离精子膜蛋白,进行 Western blotting 免疫印迹分析,检测酪氨酸磷酸化蛋白的表达水平.结果显示,冻融精子经4种精子获能方法处理后,肝素诱发的精子获能率显著高于钙离子载体组和 Percool 组（P ＜0．05）.钙离子载体组、肝素组和咖啡因组精子蛋白酪氨酸磷酸化水平高于 Percool 组和对照组.另外,冻融精子随着上游处理及肝素诱导获能的进行,检测到分子量分别为14,25~30,40,47,55 ku 的酪氨酸磷酸化蛋白,这些蛋白的酪氨酸磷酸化水平在获能60~120 min 期间相对较高,而且此时精子获能率及超激活运动精子比例也显著提高（P ＜0．05）.结果提示,肝素可以较好的诱导马鹿精子获能,马鹿精子获能与蛋白酪氨酸磷酸化相关.     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过体外受精试验检验了肝素和羊血清在绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显著（５０％ＶＳ１４．７％Ｐ＜０．０５）;获能液ＳＯＦＭ＋２０％ＳＳ中再加入５、１５、２５ＩＵ／ｍｌ肝素可明显增强获能效果,所得卵裂率（８１．４％,８０．４％,８１．３％）与不加肝素的对照组（４６％）相比,差异显著（Ｐ＜０．０５）。     

肝素和羊血清对绵羊附睾精子体外获能的影响

通过对体外受精试验检验了肝素和羊血清有绵羊附睾精子体外获能中的作用。结果表明,在获能液ＳＯＦＭ＋０．６％牛血清白蛋白（ＢＳＡ）中加入５、１５、２５、５０ＩＵ／ｍｌ肝素不能有效诱导精子获能,所得卵裂率（１６．１％,１１．２％,１４．５％,１５．８％）与不加肝素的对照组（１０．０％）相比,差异不显著;获能液ＳＯＦＭ＋２０％羊血清（ＳＳ）对精子获能效果优于ＳＯＦＭ＋０．６％ＢＳＡ＋肝素,二者卵裂率差异显     

猪精子的体外获能与体外受精

通过5个实验研究了应用咖啡因，肝素和I－A23187促进猪精子体外获能的效果，比较了不同受精次数和不同种类的精液进行猪卵子体外受精的效果，试验表明，用肝素和咖啡因协同作用，猪精子体外获能的效果好，采用2－3次受精法进行体外受精可以提高受精率，使用新鲜精液，新鲜附睾精液或冷冻附睾精液进行体外受精，其效果差异不显著。     

不同培养体系及肝素剂量对Boer山羊精子体外获能的研究

用S ,D ,B 3种培养体系对Boer山羊精子进行体外获能 ,肝素添加剂量设 5个水平 .获能处理前先进行活精子分离 ,然后按试验之需 ,用含有肝素的培养液获能处理 ,获能后用溶血磷脂酰胆碱 (LC)诱导顶体反应 (AR) ,TG染色法测得有顶体反应的活精子作为评价精子获能的指标 .试验结果表明 ,(1)S培养液效果最好 ,4h的顶体反应率达 6 0 .88% ,与D ,B培养液的获能效果相比 ,差异极显著 (P <0 0 1) .(2 )肝素的添加剂量以 15mg·L-1和 2 0mg·L-1的效果最好 ,与其它处理组的效果相比差异显著 (P <0 0 5 ) ,但这 2个水平间的效果差异不显著 (P >0 0 5 ) .     

维生素E和谷氨酰胺对兔精液获能的影响及获能相关基因的表达

为了探讨不同质量浓度维生素E和谷氨酰胺(glutamine,Gln)对精子获能的影响,以及与获能有关的关键基因在获能后相对表达量的差异,在获能液中加入不同质量浓度的维生素E(0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg/m L)或Gln(0、5、10、15、20 mg/m L),并分别将其与精子悬液一同培养,以孕酮诱导顶体反应,通过涂片染色镜检得到顶体发生率;采用实时荧光定量PCR得到获能相关基因蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和ACP6(acid phosphatase 6,lysophosphatidic)在获能后的表达。结果表明,添加质量浓度为1.0 mg/m L的维生素E对精子顶体发生率的影响显著高于其他组别(P0.05);添加质量浓度为15 mg/m L的Gln,精子顶体发生率显著高于其他组别(P0.05);与空白对照组相比,维生素E最佳质量浓度处理组(1.0 mg/m L)的PRKACB和ACP6基因的相对表达量显著性降低(P0.05);Gln最佳质量浓度处理组(15 mg/m L)处理后,基因PRKACB、ACP6在获能后的相对表达量高于空白对照组,但差异不显著(P0.05)。可见,获能液中添加维生素E和Gln对兔精子获能具有一定影响。     

猪精子获能期间蛋白质磷酸化时间依赖性的上调

通过获能猪精子酪氨酸磷酸化蛋白分离和表达,来确定精子获能的最佳状态.将猪精子悬浮于改良的Tris缓冲液(mTBM)获能培养基中,在体积分数为5% CO2孵箱37 ℃培养,以考马斯亮蓝染液染色的方法来评价精子获能状态, 经过SDS-PAGE分离后,进行Western免疫印迹分析,检测获能猪精子间酪氨酸磷酸化蛋白的分布.有27,47 ku的2种蛋白发生酪氨酸磷酸化,其中27 ku的蛋白酪氨酸磷酸化水平自精子体外培养后呈递增趋势,而 47 ku的蛋白酪氨酸磷酸化水平在精子培养1.5 h时最高,后呈递减趋势,1.5 h时获能状态最佳.     

校正的BO液培养法对牛精子体外获能的影响

本试验校正了利用肝素和咖啡因使牛精子体外获能的传统的BO液配方及培养方法;利用去透明带仓鼠卵的穿透试验和顶体的台盼兰——姬姆萨双重染色技术检查了该方法对获能的影响,发现校正的BO液培养法缩短了预培养时间,增强了获能效果。     

不同因素对牛卵母细胞胞质内精子注射效果的影响

采用胞质内精子注射法（ICSI）构建牛显微受精胚胎,探讨卵母细胞成熟培养时间、精子状态及精子操作液中聚乙烯吡咯烷酮（PVP）浓度对牛卵母细胞胞质内显微受精（ICSI）卵体外发育的影响。结果显示：成熟培养20 h、24 h和28 h的卵母细胞用于ICSI时,ICSI卵的形态完整率分别为94.6%（175/185）、97.2%（173/178）和96.4%（189/196）（P〉0.05）;成熟培养24 h和28 h的卵母细胞,其ICSI卵的卵裂率（73.4%和70.9%）和囊胚发育率（31.8%和29.6%）显著高于成熟培养20 h的卵母细胞（61.1%和20.6%）（P〈0.05）。对成熟培养24 h的卵母细胞注射获能精子时,ICSI卵的卵裂率和囊胚发育率（72.7%和31.4%）高于未获能精子组（69.4%和29.3%）和不运动精子组（71.5%和30.4%）,但无统计学差异（P〉0.05）。采用含5%,10%和15%PVP的精子操作液处理获能精子后对成熟培养24 h的卵母细胞进行ICSI操作,PVP浓度为5%和10%时,ICSI卵的卵裂率（73.2%和66.9%）和囊胚发育率（32.7%和29.7%）差异不显著（P〉0.05）,但二者均显著高于15%PVP浓度组的卵裂率和囊胚发育率（51.0%和16.3%）（P〈0.01）。结论认为,选用获能精子,并使用含5%PVP的精子操作液进行处理,对成熟培养24 h的牛卵母细胞进行ICSI操作,有利于ICSI卵的体外发育。     

原花青素和茶多酚对兔精子获能的影响

为探究原花青素和茶多酚对新西兰大白兔精子获能效果及其获能相关基因在获能前后表达差异的影响,在获能液中加入不同浓度(分别为0、0.5、1.0、1.5、2.0 mg·mL~(-1))的原花青素或茶多酚,与精液悬浮培养,以孕酮诱导顶体反应,并采用实时荧光定量PCR技术检测获能相关基因——蛋白激酶A催化亚单位β(PRKACB)和酸性磷酸酶6 (ACP6)在获能前后的表达差异。结果表明:兔精子获能液中原花青素的最适添加量为1.0 mg·mL~(-1),在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则原花青素最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.41和3.12,显著高于对照组;茶多酚的最适添加量为1.0 mg·mL~(-1),在此浓度下精子顶体反应率显著高于其他处理组,以对照组获能后相关基因ACP6和PRKACB的表达量为1,则茶多酚最佳处理组ACP6和PRKACB的相对表达量分别为1.81和1.88,显著高于对照组。综合而言,兔精子获能液中原花青素或茶多酚的适宜添加量均为1.0 mg·mL~(-1)时,在此浓度下,精子顶体反应率较高, ACP和PKA活性增强。     

陆川猪与外来猪精液质量及精子黏附蛋白基因家族 mRNA表达的比较

精子黏附蛋白基因家族是公猪精液中精浆蛋白的最主要成分,对精子的活力、获能和与卵子的结合都会起到调控作用。为了研究不同猪种之间繁殖力的差异,试验以陆川猪、长白猪和杜洛克猪为研究对象,以常规方法检测新鲜精液的精子活力、活率及畸形率,并应用半定量RT-PCR技术检测精子黏附蛋白基因家族mRNA的表达,最后采用单因素方差分析法分析数据之间差异的显著性。结果表明,陆川猪的精子活力及活率与长白猪、杜洛克猪差异不显著（P>0.05）,但是精子畸形率极显著低于2种外来猪种（P<0.01）;陆川猪精子黏附蛋白基因家族中仅 AQN1基因 mRNA表达水平显著低于杜洛克猪（P<0.05）,其余与长白猪、杜洛克猪之间无显著差异（P>0.05）;长白猪精液中精子黏附蛋白基因家族的 AQN3、AWN和PSP-II基因 mRNA表达水平显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）高于杜洛克猪。总之,不同猪种精子黏附蛋白基因家族 mRNA表达水平存在明显差异,但与精子活力、活率及畸形率等精液质量指标的高低没有规律性的关联。     

牛精子不同获能方法对体外受精效果的影响

为了提高牛体外受精率,探讨牛冷冻精液不同获能方法对体外受精效果的影响,对牛冷冻解冻精液进行了两次离心获能法与一次离心加上游法获能对体外受精效果影响试验.结果表明,两次离心组受精率卵裂率(75.6-±4.5)％与一次离心加上游法组受精卵裂率(76.4±1.9)％无显著差异(P＞0.05);二次离心组囊胚率(35.7±4.1)％与一次离心加上游法组(36.3±2.7)％差异不显著(P＞0.05).而两次离心组却可以大大节省了体外获能时间.     

FCS和BSA对小鼠早期胚胎体外培养的影响

本实验是在CZB和Whitten’s Medium 2种培养液中添加胎牛血清(FCS)和牛血清白蛋白(BSA),比较它们对小白鼠早期胚胎体外发育的影响。结果如下:在培养注射HCG后37～39h的小鼠胚胎时,添加FCS的CZB培养液中通过发育阻断期的胚胎和发育到囊胚的胚胎均明显高于添加BSA的CZB培养液(80.9%、64.3%和41.7%、29.6%),差异显著(P0.05);当用上述液培养注射HCG后44h的小鼠胚胎时,不管是进口培养皿还是国产培养皿,胚胎发育率的差异均不显著(P0.05);在用CZB和Whitten’s培养液分别添加FCS和BSA后,培养注射HCG后44h2-细胞小鼠胚胎时,不论添加FCS还是BSA,在CZB培养液中胚胎发育率均高于Whitten’s培养液(P0.05),但添加FCS和BSA之间的差异不显著(P0.05)。     

奶山羊精子体外获能与体外受精

供体用FSH+LH超排,卵母细胞从注LH后约30h回收。将获能精子与10枚卵母细胞在受精液(mDM+输卵管上皮细胞)和培养液(mDM+30％供体羊血清)中连续培养(38℃)24h后,有6枚卵受精,抛出第二极体。将6枚受精卵移植到3只受体中,有1只妊娠,产出1只试管母山羊。初步表明,本试验的奶山羊精子体外获能与体外受精程序是简便而有效的。     

培养液中血清或其替代物对牛体外受精卵体外发育的影响

探讨在牛体外受精卵体外培养液中添加血清替代品对体外受精卵发育的影响,确定血清在SOF培养液中合适的添加浓度及添加时期,以筛选优良的牛体外受精卵体外培养液.在SOF液中分别添加10%血清(NBS)、8 mg/ml牛血清白蛋白(BSA)和1 mg/ml聚乙烯醇(PVA)进行牛体外受精卵的全程培养,添加NBS组的卵裂率(66.3%)显著高于添加BSA组(51.0%)(P＜0.05),极显著高于添加PVA组(47.6%)(P＜0.01);添加NBS组的囊胚发育率(30.9%)显著高于添加PVA组(20.7%)(P＜0.05),极显著高于添加BSA组(13.6%)(P＜0.01).在培养液中添加不同浓度(10%、5%)的NBS及无血清培养液全程培养时,3组之间卵裂率(65.6%、60.0%、58.0%)差异不显著(P＞0.05);10%NBS组囊胚发育率(30.0%)极显著高于5%NBS组(17.6%)和无血清组(6.0%)(P＜0.01).5%NBS组的囊胚发育率极显著地高于无血清组(P＜0.01).在受精卵培养的最初48 h用5%NBS,之后用10%NBS培养液时,卵裂率(58.6%)和囊胚发育率(29.3%)与SOF+10%NBS全程培养组(66.3%、30.9%)差异都不显著(P＞0.05).试验结果表明,SOF培养液中添加PVA、BSA替代血清时卵裂率和囊胚发育率都明显下降,可能SOF培养液中添加血清比添加PVA或BSA更有利于牛体外受精卵的体外发育.体外培养时在SOF培养液中添加一定浓度的血清以及改变血清的添加方式,可提高牛体外受精卵体外发育效果.     

特定电磁波照射对家兔体外受精的影响

家兔精液用特定电磁波（ＴＤＰ）照射３ｍｉｎ，精子体外获能采用ｍ—ＨＩＳ（１５ｍｉｎ）＋ｍ－ＤＭ（２－４ｈ）．家兔卵母细胞经ＴＤＰ照射５ｍｉｎ并体外培养１０－１２ｈ．家兔的卵泡卵母细胞经体外受精和体外培养的结果表明，经ＴＤＰ照射的精液与未经ＴＤＰ照射的卵母细胞的体外受精，原核形成率达６４．７％，对照织为４４．４％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５６．８％和５０％（Ｐ＞０．０５），经ＴＤＰ照射的卵母细胞与未经ＴＤＰ照射的精液的体外受精，原核形成率达６３．７％，对照组为４６．７％，两者差异显著（Ｐ＜０．０５），２－细胞以上的受精卵发育率分别为５８．９％和４７．２％（Ｐ＞０．０５）、用ＴＤＰ照射精液或卵母细胞能显著提高其体外受精率．     

家兔精子体外获能与体外受精试验

本试验目的在于建立一种简便而有效的系统,能使家兔射出的精子完成体外获能,并获得体外受精、早期卵裂和正常产仔。精子体外获能采用三种方法:A.HIS(15min)+DM(1～2h);B.HIS(15min)+DM(11～12h);C.m-HIS(15min)+m-DM(2～4h)。经上述方法处理的精子与512枚输卵管卵母细胞进行体外受精和体外培养的结果表明,A组的受精和早期卵裂发育延迟;B组的受精卵大都停留在原核期;C组的受精和早期卵裂发育正常。将C组60枚2-4细胞移植至9只受体兔,5只妊娠,其中2只产4只试管仔兔,另外3只获得12个胎儿。     

猪精液预处理稀释液与冷冻基础液的配伍效应

采用6种预处理稀释液对猪精液进行预处理,然后用3种冷冻基础液冷冻保存,研究精液预处理稀释液和冷冻基础液对精子冷冻保存效果的影响,以及其间的配伍效应。结果表明,不同的预处理稀释液对解冻后精子活力的影响差异显著(P<0.05),而3种冷冻基础液对冻后精子活力的影响差异不显著(P>0.05)。不同的预处理稀释液与冷冻基础液之间存在明显的配伍效应,并且用含甘油的稀释液对平衡不同时间的精液冷冻时,其配伍效应又有所不同。猪精液中去除精清可显著提高精子冻后活力和顶体完整率(P<0.05),有利于提高精液品质。