应用免疫组织化学法研究γ—干扰素在大鼠室管膜中的定位分布

用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶－DAB－硫酸镍铵呈色法，对正常成年大鼠室管膜上IFN－γ的特征和分布进行了研究，结果表明，IFN－γ免疫反应阳性细胞分布于大鼠侧脑室壁，第三脑室壁，中脑导水管，第四脑室壁的室管膜中，其中侧脑室，第三脑室，第四脑室壁上存在有伸长细胞，发出其突伸向周围灰质，提示IFN－γ可能作为一种新的脑神经肽存在于室管膜中，参与脑－脑脊液回路的调节。γ     

IFN-γ在大鼠脾脏内的定位研究

观察大鼠脾脏内IFN-γ免疫反应产物的特征与分布。应用免疫组织化学链酶菌抗生素蛋白-过氧化物酶法(Streptavidin-perosidase,SP法),结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍胺呈色。IFN-γ反应产物在大鼠脾脏的小梁、白髓、红髓和边缘区均有分布,证明了脾脏内存在IFN-γ,为“免疫-神经-内分泌网络”提供了形态学依据。     

IFN-γ在大鼠海马内的免疫组化定位

应用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈色法研究IFN-γ免疫反应性产物在大鼠海马内的分布.结果表明,IFN-γ免疫反应主要分布于海马CA1、CA2、CA3区,有少量分布于灰被,齿状回.这为海马具有免疫调节功能的观点提供了新的证据.结合文献,推断IFN-γ在海马-下丘脑-垂体-肾上腺的免疫调控中起主要作用.     

IFN-γ在大鼠胸段脊髓内的分布

为进一步探讨免疫 -神经 -内分泌三大系统之间的关系 ,用免疫组织化学 SP法 ,对大鼠胸段脊髓内 IFN-γ样免疫反应产物的分布进行了研究。结果表明 ,IFN-γ样免疫反应产物广泛分布于胸段脊髓各板层。其中背角 、 、 层 ,胸髓中间带外侧核 ,腹角 层内可见到较高密度的阳性胞体和树突。中间带和腹角内的阳性胞体的树突还伸向外侧索和腹索 ,有时可达脊髓边缘     

甲低大鼠垂体前叶内IFN-γ样免疫反应阳性物质的表达

应用免疫组织化学(SP)法结合H2O2-DAB黄色呈色法进行显色。IFN-γ样免疫反应阳性物质位于细胞的胞浆内,其阳性细胞只分布于垂体前叶,而后叶和中间部未见免疫反应阳性物质;对照组均未发现免疫反应阳性细胞。甲状腺素低下可以诱导大鼠垂体前叶内IFN-γ样免疫阳性物质的表达,提示甲状腺素低下会影响垂体前叶的内分泌功能。     

IFN-γ在流产大鼠下丘脑的表达

为了探讨下丘脑对妊娠的调节作用,采用免疫组织化学SP法研究了妊娠中期,正常妊娠大鼠及流产大鼠下丘脑内IFN-γ阳性神经元的形态与分布,同时利用图像分析软件测定了其灰度值。结果显示,正常妊娠大鼠和流产大鼠IFN-γ主要在下丘脑的视前大细胞核、室旁核、视上核、下丘脑前核等部位分布,而流产大鼠的IFN-γ阳性细胞数多于正常妊娠组且表达强于正常妊娠组。表明IFN-γ在下丘脑的表达对妊娠大鼠的神经内分泌调节有重要影响。     

IFN-Y在大鼠海马内的免疫组化定位

应用免疫组织化学SP法结合葡萄糖氧化酶-DAB-硫酸镍铵呈色法研究IFN-Y免疫反应性产物在大鼠海马内的分布。结果表明,IFN-Y免疫反应主要分布于海马CAl、CA2、CA3区,有少量分布于灰被,齿状回。这为海马具有免疫调节功能的观点提供了新的证据。结合文献,推断IFN-Y在海马-下丘脑-垂体-肾上腺的免疫调控中起主要作用。     

5-羟色胺在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究5-羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)在不同动情周期SD大鼠子宫中的分布情况和变化规律,探讨5-HT在雌性生殖系统中的作用。【方法】采用阴道涂片法鉴定动情周期,选取均为正常动情周期的20只雌性SD大鼠,将其分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠,取子宫制作石蜡切片,经免疫组织化学超敏SP法染色后,观察5-HT在不同动情周期大鼠子宫中的分布及变化规律。【结果】5-HT免疫阳性产物在子宫各层中均有不同程度的分布,其中主要存在于子宫内膜上皮细胞、子宫腺上皮细胞、血管内皮细胞、基质细胞以及子宫内膜固有层中的胚性结缔组织细胞中。子宫内膜固有层以椭圆形状和圆形的5-HT阳性细胞为主。此外,还有一些呈细丝状、串珠状的5-HT阳性神经纤维分布于子宫内膜固有层。环行肌层多为细丝状和串珠状且粗细不等的5-HT阳性神经纤维。纵行肌层5-HT阳性产物呈点状、细丝状、椭圆形状和串珠状分布。子宫内膜和肌层5-HT阳性产物在动情期和动情间期均呈强阳性表达,而在动情前期和动情后期均呈弱阳性表达。【结论】5-HT在不同生理时期大鼠子宫中的表达分布存在一定规律性,可能与其生理调节功能有关。     

麻鸭γ-干扰素基因的克隆与序列分析

应用RT-PCR技术,直接从成年麻鸭脾淋巴细胞提取的总RNA中扩增出麻鸭γ-干扰素基因(duIFN-γ),并克隆、测序。测序结果表明,麻鸭IFN-γ全序列大小为515 bp,包含一个完整阅读框(495 bp),编码164个氨基酸残基,推导的氨基酸有3个潜在的N-糖基化位点,有5个与二硫键形成有关的半胱氨酸。麻鸭IFN-γ基因序列与AF087134、AF100929、AJ012254的序列完全一致,而与北京鸭(AY166850)核苷酸同源性为99.6%,有2个碱基差异,为非同义突变,氨基酸同源性为98.8%。麻鸭IFN-γ基因与鸡、火鸡和鹌鹑IFN-γ基因核苷酸序列同源性分别为77.2%、78.0%、78.8%,氨基酸序列同源性均67.1%,而与人、狒狒、猪、牛、绵羊、犬、猫IFN-γ核苷酸序列同源性为39.7%～42.1%,氨基酸序列同源性在28.0%～31.7%之间。     

青鱼γ-干扰素基因的克隆与表达分析

【目的】开展青鱼γ-干扰素(IFN-γ)基因的克隆、结构特征与表达谱分析研究。【方法】采用cDNA末端快速扩增技术获得了青鱼(Mylopharyngodon piceus)IFN-γ基因cDNA的5′和3′末端序列,然后根据其末端序列设计特异性引物,扩增得到青鱼IFN-γ基因cDNA全长序列,对其序列和编码氨基酸序列进行生物信息学、同源性比较及系统进化树分析,同时对其在青鱼各组织中的表达进行分析。通过构建真核表达载体,将其转染青鱼鳍条组织细胞进行表达分析。【结果】青鱼IFN-γcDNA全长为895bp,其开放阅读框大小为549bp,编码182个氨基酸。氨基酸序列比对分析结果显示,青鱼IFN-γ与人、鸡、鼠IFN-γ的序列相似性仅为1.5%~7.7%,与其他鱼类IFN-γ序列相似性较高,为16.3%~92.9%。青鱼IFN-γ分子N末端包含1个信号肽序列、C末端有IFN-γ特征序列([I/V]-QX-[K/Q]-A-X2-E-[L/F]-X2-[I/V])以及核定位基序(RRRR)。青鱼IFN-γ蛋白二级结构与高等脊椎动物IFN-γ类似,包含7个α螺旋结构。经Poly I:C诱导后发现,IFN-γ在青鱼头肾、肾、脾、皮肤和鳃组织中表达显著上调,最高的为头肾,其次为脾、皮肤、鳃和肾,而在心脏和脑组织中无显著变化。青鱼γ-干扰素真核表达质粒在青鱼鳍条组织细胞中成功表达IFN-γ。【结论】成功克隆了青鱼IFN-γ基因cDNA,经Poly I:C诱导后,该基因在头肾中上调倍数最为显著,青鱼γ-干扰素在体外获得表达。     

IFN—γ在大鼠胸段脊髓内的分布

为进一步探讨免疫－神经－内分泌三大系统之间的关系，用免疫组织化学SP法，对大鼠胸段脊髓内IFN－γ样免疫反应产物的分布进行了研究，结果表明，IFN－γ样免疫反应产物广泛分布于胸段脊髓各板层，其中背角Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ层，胸髓中间带外侧核，腹角Ⅺ层内可见珐较高密度的阳性胞体和树突，中间带和腹角内的阳性胞体的树突还伸负外侧索和腹索，有时可达脊髓边缘。     

鸵鸟小肠中IFN-γ的随龄性表达

为探讨γ-干扰素(IFN-γ)与鸵鸟小肠发育及小肠黏膜免疫的关系,运用免疫组织化学SP法分别对3日龄、3周龄和11月龄鸵鸟小肠中IFN-γ的表达进行研究。结果表明,IFN-γ免疫阳性细胞主要分布于肠上皮间淋巴细胞,在绒毛和肠腺的上皮细胞及杯状细胞内也有阳性产物表达,黏膜固有层的IFN-γ阳性细胞集群分布或沿血管周围密集排布,肌层和肌间存在大量梭形的阳性细胞和串珠状的阳性纤维;IFN-γ阳性产物的相对表达量随着年龄的增长而增加,3日龄和3周龄表达差异不显著(P0.05),11月龄与3周龄鸵鸟表达差异显著(P0.05);不同肠段IFN-γ阳性产物的相对表达量均表现为自十二指肠至空肠的递减趋势,其中3日龄、3周龄鸵鸟各段小肠中差异不显著(P0.05),11月龄鸵鸟空肠中IFN-γ阳性产物的相对表达量较十二指肠显著降低(P0.05),回肠与空肠相比亦显著降低(P0.05)。表明IFN-γ通过多种途径参与鸵鸟小肠的发育和黏膜免疫。     

神经肽Y在动情周期大鼠子宫中的分布

【目的】研究神经肽Y(Neuropeptide Y,NPY)免疫反应阳性物质在大鼠动情周期子宫中的分布情况及其变化规律。【方法】采用阴道涂片法鉴定发情周期,选取情期正常的20只雌性大鼠,均分为动情前期、动情期、动情后期和动情间期4组,处死各组大鼠,取子宫制作石蜡切片,经免疫组织化学SP法染色后,观察NPY在大鼠动情周期子宫中的分布及变化规律。【结果】在内膜层,大多数NPY免疫阳性产物位于细胞中,小部分位于点状和细丝状纤维中。在肌层,NPY免疫阳性产物主要位于NPY纤维中。NPY免疫阳性产物相对表达量的t检验结果表明,子宫内膜NPY在动情期和动情间期的表达较动情前期显著减少(P0.05),较动情后期极显著减少(P0.01);子宫肌层NPY在动情后期的表达较动情期显著回升(P0.05),在动情间期的表达较动情后期极显著减少(P0.01)。【结论】NPY在不同生理时期大鼠子宫中的表达分布存在一定规律性,可能与其生理调节功能有关。     

抑制素α亚基在大鼠下丘脑与垂体的免疫组织化学定位

 用链酶亲和素-生物素过氧化物酶复合物（SABC）免疫组织化学方法，使用抑制素α亚基单克隆抗体对注射抑制素α片段及抑制素粗提物后的去卵巢大鼠的下丘脑和垂体进行了免疫组织化学定位。结果表明，在下丘脑与垂体存在抑制素α亚基单克隆抗体的特异性阳性反应位点，并存在剂量与时间上的依赖关系，说明抑制素α亚基可以通过血脑屏障到达下丘脑和垂体，为探讨抑制素α亚基在血脑屏障的转运机制提供了形态学上的依据。     

γ-干扰素对弓形虫MIC3的基因免疫效果研究

将编码弓形虫微线蛋白3(MIC3)的真核表达质粒pcMIC3和编码γ-干扰素(IFN-γ)的真核表达质粒pcIFN-γ各100μg混合肌肉注射,间隔2周、3次免疫Balb/c小鼠,同时设相同剂量的pcMIC3、pcDNA和PBS免疫对照组。分别以酶联免疫吸附试验(ELISA)、四氮甲唑蓝(MTT)比色法和乳酸脱氢酶释放法(LDH)检测试验小鼠血清的特异性抗体、脾淋巴细胞的增殖应答和细胞毒性T细胞(CTL)活性,并观察腹腔接种弓形虫RH株速殖子后质粒的免疫保护效果。结果表明:与其它试验组相比,pcMIC3 pcIFN-γ组试验小鼠在免疫8周后的ELISA抗体水平、脾淋巴细胞的增殖应答和CTL活性显著或极显著提高,免疫小鼠45 d时的生存率为100%,能有效抵抗小剂量弓形虫强毒株的攻击。     

猪干扰素-γ基因的表达、纯化及活性分析

依照猪IFN-γ基因序列设计引物,将该基因克隆至原核表达载体pET-30a,构建pET-30a-pIFN-γ重组表达载体,转化入寄主菌BL21(DE3),经PCR、双酶切、测序鉴定正确后,用IPTG进行诱导表达,可溶性的表达产物分别经镍柱和Sephadex-G100纯化;包涵体经DOC洗涤、SKL变性溶解、透析复性进行纯化,然后进行SDS-PAGE、Western-blot分析,并用细胞病变抑制法进行重组猪IFN-γ活性测定.结果表明:试验得到了高纯度的重组pIFN-γ,且纯化的重组猪IFN-γ蛋白具有较高的干扰病毒复制的活性,对PRV的活性为2.0×103U.mg-1,而对标准O型口蹄疫病毒的活性为2.56×105U.mg-1.     

梅花鹿γ-干扰素在牛型结核病中的应用研究进展

梅花鹿γ-干扰素是细胞因子超家族中干扰素家族的特殊重要成员之一,具有广泛的生物学功能。其功能的多样性是通过诱导细胞表达多种蛋白质实现的。对梅花鹿γ-干扰素的诱导与产生、结核病特异性基因、梅花鹿γ-干扰素用于牛型结核病的检测原理及γ-干扰素优劣的研究进展进行综述。     

兔出血症病毒在小鼠体内分布及免疫试验

应用纯化兔出血症病毒(RHDV)接种小鼠3d后剖杀,分离组织,通过电镜观察、血凝试验(HA)、RT-PCR,进行体内分布检测;同时将小鼠接种3次后10 d,分离脾淋巴细胞进行IFN-γ、IL-2、IL-4、WST检测.电镜观察未见到病毒粒子;HA检测结果为肝脏的HA价最高,肺脏最低;RT-PCR未检测到目的基因;WST检测结果表明,免疫组刺激指数高于对照组;免疫组的IFN-γ和IL-2检测指数高对照组;IL-4检测结果低于对照组.RHDV接种小鼠分离的肝脏具有血凝性,能产生良好的细胞免疫反应.     

Leptin长型受体在大鼠听觉核团中的免疫组化定位

采用免疫组织化学SP法,对leptin长型受体(LR-b)在大鼠听觉核团中分布进行了定位研究.结果表明,在大鼠的耳蜗神经核、上橄榄核、外侧丘系核、下丘、内侧膝状体和听皮质中均有LR阳性神经元的分布.推测,leptin作用于听觉传导通路相关核团中的神经元,可能与维持大鼠正常的听觉功能有关.     

Leptin长型受体在大鼠听觉核团中的免疫组化定位

采用免疫组织化学SP法,对leptin长型受体(LR-b)在大鼠听觉核团中分布进行了定位研究.结果表明,在大鼠的耳蜗神经核、上橄榄核、外侧丘系核、下丘、内侧膝状体和听皮质中均有LR阳性神经元的分布.推测,leptin作用于听觉传导通路相关核团中的神经元,可能与维持大鼠正常的听觉功能有关.