影响芥蓝×甘蓝RAPD标记稳定性的外部条件优化研究

通过对影响RAPD标记稳定性的引物浓度梯度、退火温度梯度、dNTP浓度梯度、Taq酶浓度梯度等外部条件的优化研究,确定了RAPD反应适宜的引物浓度为0.1~0.2pmol/μL,退火温度为48~52℃,dNTP浓度为0.3~0.15mmol/L及Taq酶浓度为0.3U/μL,提高了该反应体系中RAPD的稳定性。     

梨树RAPD分析条件的优化

以黄花梨为试材，建立了梨树RAPD分析的优化反应条件，即25μL反应体系中含有Tris-HCl(pH9.0)10 mmol／L，KCl 50 mmol／L，MgCl2 2.0 mmol／L，dNTP 200 μmol／L，模板DNA 10 ng，引物400 μmol／L，Taq DNA聚合酶1.5 U．适宜的扩增程序为94℃120 s，1个循环；94℃60 s、37℃75 s、72℃120 s，45个循环；72℃10 min，1个循环．     

当归RAPD反应条件的优化

以当归DNA为模板,对影响当归RAPD扩增的重要参数进行了优化试验,以期建立当归RAPD反应的最适体系。通过正交法及单因素试验对RAPD反应条件进行优化,7个试验因子的最适条件为:模板DNA 0.5 ng/μL,引物0.8μmol/L,dNTPs 0.25 mmol/L,MgCl22.5 mmol/L,Taq酶0.8 U,退火温度36~37℃,循环次数40。     

利用RAPD技术对蜜桃种质资源的分析

利用RAPD技术，采用从200个10碱基随机引物筛选的22个引物对14个蜜桃品种的基因组DNA进行扩增，通过扩增180个位点的谱带的聚类，分析供试蜜桃的系统发育，将供试的蜜桃品种分为3组；并运用特殊谱带，建立了蜜桃的分子检索表，提出了特殊保存的蜜桃种质有秋蜜，太原水蜜，深州红蜜和温州水蜜。     

基因组DNA的提取及RAPD条件优化

提取了木奈基因组 DNA,并以其为模板对影响 RAPD扩增的重要参数进行优化试验 ,以期建立木奈 RAPD反应的优化体系 .结果表明 ,PCR扩增体系最佳条件是 :2 0 μL体积中 ,2 0 0 μmol·L- 1 d NTP、2 .5 mmol· L- 1 Mg Cl2 、0 .2 μmol· L- 1随机引物、2 5 .0 ng·μL- 1 DNA模板、1 -2 U Tag酶     

何首乌RAPD分析的最佳PCR条件筛选

以广西、广东、湖南、贵州、四川、湖北、江苏、安徽、山东、河南等10省共31个地理种源为材料，对其PCR各种反应条件实验进行了研究。结果表明：PCR反应时，总反应液20μL中基因组DNA浓度为20ng，引物浓度为10μmol／L，dNTP浓度为200μmol／L，镁离子的浓度选择1．5mmol／L，退火温度为38℃下出现可辨认的鲜明的谱带。本研究为RAPD分析应用于何首乌遗传多样性研究和优良种源选择打下了良好的基础。     

枝角类RAPD条件优化和遗传多样性分析

以蒙古裸腹(MoinamongolicaDaday)和多刺裸腹(M.macrocopaStraus)为材料,对枝角类RAPD扩增条件进行了摸索和优化,结果表明,枝角类PCR扩增反应的最佳体系为:在25μL体积中,模板DNA25ng/μL,dNTPs0.1mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物0.1μmol/L,Mg2+1.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.5μL。按照优化的RAPD条件进行实验,重现性良好。2种裸腹在盐胁迫条件下的种群遗传多样性分析表明,同种裸腹不同生存盐度之间的种群遗传相似度较高,分别为0.9134和0.9038;而多刺裸腹和蒙古裸腹两个种间的遗传相似度相对较低,约为0.5～0.6。     

枝角类RAPD条件优化和遗传多样性分析

以蒙古裸腹(MoinamongolicaDaday)和多刺裸腹(M.macrocopaStraus)为材料,对枝角类RAPD扩增条件进行了摸索和优化,结果表明,枝角类PCR扩增反应的最佳体系为:在25μL体积中,模板DNA25ng/μL,dNTPs0.1mmol/L,TaqDNA聚合酶1U,引物0.1μmol/L,Mg2+1.5mmol/L,10×PCR缓冲液2.5μL。按照优化的RAPD条件进行实验,重现性良好。2种裸腹在盐胁迫条件下的种群遗传多样性分析表明,同种裸腹不同生存盐度之间的种群遗传相似度较高,分别为0.9134和0.9038;而多刺裸腹和蒙古裸腹两个种间的遗传相似度相对较低,约为0.5～0.6。     

葡萄基因组DNA的提取及RAPD条件优化

采用改良CTAB法提取葡萄属22种植物的基因组DNA,对其完整性进行了测定,通过单因素五水平试验,筛选模板、Mg2+、Taq酶、dNTPs和随机引物的浓度及其用量,建立了葡萄RAPD技术最优体系,即25 μL体积中模板DNA为40 ng·μL-1,MgCl２ 2.0 mmol·L-1,dNTP 0.8 mmol·L-1,Taq DNA 聚合酶1 U·μL-1,引物 0.8 μmol·L-1,建立了葡萄基因组DNA的RAPD 反应扩增程序,即94℃预变性4 min, 94℃循环变性 45 s,37℃退火 55 s,72℃ 延伸 80 s,40个循环,最后72℃ 延伸10 min。     

RAPD法鉴定紫花苜蓿品种的条件优化

以阿尔冈金等6个地方主栽的紫花苜蓿品种为材料,对随机扩增多态性DNA标记(random amplified polymorphic DNA,RAPD)法鉴定不同紫花苜蓿品种的试验条件进行了优化。结果表明,使用改良的CTAB法提取紫花苜蓿基因组DNA蛋白较少,质量较高;PCR扩增反应体系中使用1 U/μL的TaqDNA聚合酶、10 ng/μL的DNA模板和300μmol/L的dNTP,扩增的条带较多,且较清晰,适宜于后续RAPD法鉴定;从100条10个碱基的随机引物中筛选出S37与S140两条引物,适用于6个不同苜蓿品种的鉴定。     

棕包梨的RAPD分析

通过建立梨RAPD反应的优化体系对棕包梨和其他梨品种进行聚类分析,探讨了它们之间的亲缘关系.结果表明:西洋梨(Pyrus communis L.)与东方梨[(砂梨(P.pyrifdia Burn)和白梨(P.bretschneideri Rehd)]品种之间亲缘关系较远;而砂梨与白梨品种之间亲缘关系较近;棕包梨与砂梨、日本梨品种之间的亲缘关系较远;而棕包梨与蜜雪梨间的亲缘关系很近,而蜜雪梨为我国台湾横山梨和日本水晶梨的杂交品种.表明我国台湾的横山梨和福建的棕包梨可能是同一品种类型.     

梨品种ISSR-PCR反应体系的优化与应用

以海子梨渊Haizili冤品种的DNA 为材料袁对影响ISSR-PCR 扩增的重要因子进行单因素的优化设计袁建 立了最佳体系: 25 滋L 反应体系中含2.5 滋L 10伊buffer尧0.75 U Taq DNA 聚合酶尧0.2 mmol/L dNTPs尧2.5 mmol/L MgCl2尧0.25 滋mol/L 引物尧10~60 ng 模板DNA遥将最佳体系应用于黔西南的22 个梨品种袁证实了该体系的重复性好袁 很稳定遥     

苦楝RAPD反应体系的优化

以苦楝叶片提取的基因组DNA为材料,通过单因素多水平梯度试验,筛选DNA模板,Mg^2＋,Taq DNA聚合酶,dNTPs和随机引物的浓度及用量,建立苦楝RAPD技术分析体系.结果表明：当基因组DNA浓度为60 ng/μL,镁离子浓度为3.0 mmol/L,dNTP浓度为0.25 mmol/L,引物浓度为0.30μmol/L,Taq DNA聚合酶用量为1 U/20μL,反应体系总体积20μL时,出现可辨认的清晰谱带.其扩增程序为：94℃预变性2 m in;然后38个循环（94℃变性30 s,37℃退火1 min,72℃延伸80 s）;最后72℃延伸8 min,4℃保存.     

不同来源苦瓜遗传亲缘关系RAPD分析

利用12个随机引物对24份苦瓜材料进行RAPD分析,共扩增出的79条谱带,有56条为多态性带,比例为70.89%;聚类分析结果,在遗传距离为0.343时,供试的24份苦瓜材料可聚成三大类群.     

小麦基因组DNA的分离及RAPD反应体系的研究

对普通小麦不同部位提取基因组DNA的方法进行分析比较,发现用黄化苗基因组DNA叶片提取的基因组DNA的质量和浓度均较好,可用于RAPD分析.并对小麦基因组DNA的RAPD反应优化过程中一些重要参数进行了探索、优化试验,建立了随机扩增多态性DNA分析应用反应体系.     

Study on Optimization of RAPD Conditions for Soil Microbe of Black Soil

Soil microbial diversities can be presented by microbial DNA composition. Extracting microbial DNA or RNA effectively from soil samples was the first step, combining PCR amplification to analyse the soil microbial diversity. The soil microbial species and…     

苜蓿基因组总DNA提取及RAPD反应条件优化

采用CTAB改良法,从苜蓿成熟叶片中提取到高质量、高纯度的DNA.对RAPD反应程序的重要参数进行摸索和优化试验,建立的适合苜蓿RAPD分析应用的体系组成为:反应液总体积25μL,模板DNA浓度135 ng·μL-1,10×缓冲液浓度2.5 mmol·L-1,10碱基引物浓度15pmol,TaqDNA聚合酶1U,dNTP浓度1.5 mmol·L-1,Mg2 浓度2.5 mmol·L-1.     

东北刺人参RAPD反应体系的优化

以东北刺人参试管苗叶片为材料,建立东北刺人参RAPD反应优化体系.结果表明:20.0μL反应体系含250.0μmol/L dNTP,2.0μmol/L MgCl2,1×Buffer,0.3μmol/L引物,10.0 ng DNA模板,1.5 U Taq DNA聚合酶,9.8μL ddH2O;扩增反应程序为:94℃预变性5min,94℃变性45 s,36℃退火1 min,72℃延伸1.5 min,40个循环,最后72℃延伸7 min时获得的RAPD指纹图谱带型清晰、重复性好.     

七彩鲑RAPD反应体系的构建及优化

以七彩鲑尾鳍为试验材料,对影响七彩鲑随机扩增多态性DNA(RAPD)扩增体系的重要参数进行了优化,建立了七彩鲑RAPD的最适反应体系.七彩鲑RAPD的最佳反应体系为:反应体系25μL,模板DNA的质量浓度4 ng/μL,Mg2+浓度2.0 mmol/L,dNTP浓度0.5mmol/L,引物浓度0.5μmol/L,Taq...