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1.
从人胎肝中提取得总mRNA,然后通过RTase反转录得到cDNA,利用PCR技术克隆到EPO基因(全长为527bP),经过计算机分析已知EPO基因保守区段的限制性内切酶位点,选择BglⅠ和HincⅡ进行酶解,确认所获得DNA片段为EPO基因。 相似文献
2.
从大量繁殖的D73杂交瘤细胞中,提取制备其基因mRNA,并以此为模版,经反转录途径获得基因组cDNA,随后将其插入到λgtll中,构建了马铃薯Y病毒小鼠单克隆抗体cDNA基因文库。通过免疫原位杂交,从该基因文库中筛选出含有抗体轻链基因的阳性克隆,进一步将其插入到pGEM-7Zf(+)质粒中,经酶谱和DNA序列分析确定,完整的轻链基因被获得。该基因含有956个核苷酸碱基[不包括Poly(A)尾巴], 相似文献
3.
用幼鸡成纤维细胞繁殖鸡传染性法氏囊病病毒(TBDV)Ts毒株,病毒颗粒经提纯后提取基因组dsRNA。根据已报道的加拿大OH株序列设计引物,用RT-PCR进行cDNA扩增,获得976bp、774bp和997bp的三个部分重叠的片段,分别克隆于pGEM-Teasy载体,利用SP6,T7 异引物及PCR引物进行序列分析,并连接为一个寒带的大片段,结果表明,所克隆片段为2665bp的IBDVVP、基因的大 相似文献
4.
利用高盐法从鸡血中提取高分子量DNA,以λEMBL3为载体构建了鸡染色体文库,用鸡生长激素受体cDNA基因的部分序列作探针,从文库中筛选得到3个阳性克隆。通过对阳性克隆I插入片段的酶切和Southern杂交分析,表明它含有全长的鸡生长激素受体基因,建立了该基因的限制性酶切图谱。将插入片段亚克隆到pGEM-7Zf(+)质粒上,对含有基因5’端序列的2.5kbEcoRI酶切片段进行了序列分析。 相似文献
5.
核酸探针检测人工感染猪及死胎的猪繁殖与呼吸综合症病毒 总被引:3,自引:0,他引:3
利用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增出猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)美洲株ATCC VR-2332ORF6及部分ORF7586bp的cDNA。将PCR产物连接进线状克隆载体pGEM-Teasy vector后获阳性重组质粒。用EcoRI及SmaI双酶切阳性重组质粒DNA,回收463bp的小片段并以此制备出地高辛标记的核酸探针。应用该探针对4头鼻内人工感染ATCCVR-2332的 相似文献
6.
马铃薯Y病毒普通株系外壳蛋白基因的克隆与原核表达载体的构建 总被引:1,自引:0,他引:1
本研究报道马铃薯Y病毒普通株系外壳蛋白基因cDNA克隆,全序列分析及其原核表达载体构建的结果。从感染PVY的烟草叶片中提取病毒粒体,SDS-酚法提取病毒核酸。以所提核酸为模板,用一对PVPCP基因引物进行RT-PCR,扩增了0.80kb的特异性核苷酸片段。该片段大小五国外报道的PVY CP基因一致,将PDR产物插入到克隆载体pGEM7Zf(+)中转化大肠杆菌DH5α。 相似文献
7.
以基因外重复的回文因子(repetitiveextragenicpalindromic,REP)和肠杆菌基因间重复一致序列(enterobacterialrepetitiveintergenicconsensus,ERIC)的碱基顺序设计出的引物为引物,用PCR(polymerasechainreaction)技术分别扩增了8株快生型大豆根瘤菌(Sinorhizobium)的总DNA,得出了具有菌株特异性的扩增产物电泳图谱,称REP-ERICPCR指纹图谱,将所得图谱进行性状编码后,用计算机数值分类系统进行平均连锁聚类分析,得出这8个菌株的聚类树状图。这一聚类结果与用其它方法聚类结果基本一致,说明REP-ERICPCR是一种鉴别快生型大豆根瘤菌菌株的经济、快速而又可靠的新方法。 相似文献
8.
NDV北京强毒株F48E9经SPF鸡胚增殖,超速离心纯化,异硫氰酸胍法提取病毒NA后,用RT-PCR扩增,得到其融合糖白基因。将扩增产物与pGEM^R-T载体相连接转化,经过AmpIPTG-Xgal(AIX)平板筛选,HindⅢ酶切及PCR鉴定,初步获得了含F基因的阳性克隆。用渐近法对克隆片段进行全序列分析,证明得到了作长1744个核苷酸的NDV F蛋白基因。 相似文献
9.
慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的脯氨酸脱氢酶基因(putA)的分子克隆 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已报道的脯氨酸脱氢酶基因(putA)序列,通过PCR方法,从慢生型大豆根瘤菌菌株GX201的总DNA中扩增到—PCR产物。序列分析表明,该PCR产物的长度为418bp,与已报道的putA基因具有93.5%的同源性。以广谱寄主范围质粒pLAFR3为载体,在大肠杆菌DH5α中构建了GX201的基因文库,并以该PCR产物为探针,从基因文库中筛选到一重组质粒pGXN300。 相似文献
10.
根据已发表的IBDV基因组序列设计并合成一对特异扩增IBDV VP2cDNA的引物,以纯化的IBDV-D78弱毒疫苗株基因组为模板,利用RT-PCR技术扩增出约1.5kb产物。将PCR产物克隆到pUC19的Smal位点,经酶切图谱分析等方法鉴定出重组VP2cDNA质粒(pVP2)。将VP2基因正向插入FPV启动子LP23P2下游,连同痘苗病毒启动子P11启动的LacZ报告基因盒插入FPV转移载体中 相似文献
11.
用根据国外已报道的甜菜坏死黄脉病毒(BNYVV)的RNA2的序列合成的两个引物,通过对BNYVV新疆分离物的RNA逆转录获得了BNYVV的外壳蛋白基因的cDNA,经PCR扩增后用T4聚合酶补平两端,克隆到pGEM-7Zf(+)质粒的SmaI位点,转化大肠杆菌DH5α,经筛选得到正向插入的重组质粒pGEB3。用PCR扩增和酶切均得到590bp的DNA片段。用ABI370A型DNA全自动序列仪测出该c 相似文献
12.
肉鸡IFN-alpha基因的克隆、序列分析以及在大肠杆菌中的表达 总被引:22,自引:0,他引:22
干扰素(IFN)是一种具有广谱抗病毒、抗肿瘤以及免疫调节等活性的细胞因子。本研究通过PCR从AA肉鸡基因组DNA中克隆了IFN-α(ChIFN-α)基因,测序分析,并将该基因与表达载体pQE30相连,构建重组表达质粒pQE30/ChIFN-α,以IPTG诱导在M15中进行表达。测序结果表明ChIFN-α的开放阅读框(ORF)是由486个核苷酸编码的,成熟蛋白为162个氨基酸,有4个糖基化位点,推测 相似文献
13.
甘薯羽状斑驳病毒外壳蛋白基因在大肠杆菌中的表达及特异抗血清的制备 总被引:12,自引:0,他引:12
根据已报道的甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)外壳蛋白(CP)基因的核苷酸序列合成引物,利用RT-PCR的方法获得CP基因后,再将其克隆到原核表达载体pET30a(+)中。SDS-PAGE分析表明,经IPTG诱导,CP基因在大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中获得了高效表达。以含表达产物的凝胶为抗原,免疫家兔,制备了SPFMV外壳蛋白的特异性抗血清。Westernblotting和点免疫(Dotbo 相似文献
14.
蜂毒溶血肽(melittin)基因的克隆及序列分析 总被引:4,自引:0,他引:4
本项研究已克隆在λgt11载体上的编码蜂毒溶血肽26个氨基酸的基因经酶切后,亚克隆到大肠杆菌E.coli的质粒pUC 18的EcoRI和PsI位点上,构建成重组质粒pUM18,然后转化感受态的大肠杆菌JM101之中。经对转化子中重组pUM18上蜂窝溶血肽基因的PCR扩增检测和序列分析,表明克隆成功。 相似文献
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狂犬病病毒3aG株核蛋白基因cDNA的克隆及序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
从狂犬病病毒感染的BHK细胞裂解上清液中快速提取病毒RNA,用反转录-聚合式反应(RT-PCR)方法得到编码核蛋白完整结构基因的cDNA,进一步将此基因克隆入pUC18中,进行核苷酸序列分析,并与国外PV、CVS、SADB19株以及国内5aG株的N基因序列进行了同源性比较,证明所克隆N基因正确。 相似文献
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花生条纹病毒外壳蛋白基因cDNA的合成、克隆及全序列测定 总被引:3,自引:0,他引:3
自田间采集的花生病叶中提取花生条纺病毒(PStV)总RNA,人工合成引物P1、P2,通过RT-PCR扩增合成PStV-cp的cDNA,并将其克隆到pGEM-T载体上。经限制酶谱分析后进行全序列测定,结果表明:该布1084个核苷酸组成,包含了PStV-cp cDNA完整的861bp编码序列(编码287个氮基酸)以及3'端223bp非编码序列,与文献报道的4个PStV-cp基因具有较高的保守性。 相似文献
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cDNA文库和PCR技术相结合的方法克隆目的基因 总被引:9,自引:0,他引:9
建立了一个以PCR为基础,结合cDNA文库构建来克隆基因的方法。即通过寻找基因的保过区段,设计合成一对特异性引物。以双链cNA-pBluescriptⅡSK载体连接物为模板,利用载体上的标准测序引物和基因的特异引物,PCR扩增出包含cDNA两末端部分的基因。运用该方法我们克隆了稻瘟病菌的3-磷酸甘油醛脱氢酶基因。与其它克隆方法相比,该方法不但稳定而且有快速与简便的优点。 相似文献
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我国花生矮化病毒(PSV)株系的血清学和壳蛋白基因序列分析 总被引:3,自引:0,他引:3
琼脂双扩散血清试验表明,参试的我国花生矮化病毒6个分离物和株系之间血清学关系十分亲近,而与美国PSV-E和PSV-W株系存在明显的差异。完成对花生致病力不同的PSV-Mi和PSV-S两个株系壳蛋白基因的RT-PCR扩增,克隆和序列分析。 相似文献
19.
性连锁矮小鸡(dwdw)生长激素受体(cGHR)基因突变的精确定位 总被引:4,自引:0,他引:4
本研究根据已知正常鸡的GHR第10个外显子和3’UTR区的DNA序列,设计一对引物,分别对正常农大褐鸡和矮小型农大褐鸡进行了PCR扩增。结果正常鸡扩增片段为2026bp,矮小鸡为255bp。将矮小鸡PCR产物克隆在pGEM-T载体上进行测序,精确定位了农大褐矮小鸡GHR基因缺失突变位点。 相似文献
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水稻农垦58与农垦58s的RAPD和ISSR分析 总被引:22,自引:1,他引:21
以光敏核不育水稻农垦58s及其原始株农垦58核DNA为模板,进行了RAPD和ISSR多态性分析,结果表明:在可扩增的154个RAPD引物和78个ISSR引物中,8个RAPD引物和7个ISSR引物的扩增产物表现出DNA多态性,RAPD-PCR产物的多态性标记分别出现在农垦58s,农垦58或二者同时出现,而ISSR-PCR扩增产物的多态性标记只出现在农垦58或农垦58s中。获得多态性RAPD标记及IS 相似文献