哺乳动物精子载体转基因技术新研究

精子载体法是以精子作为外源基因的载体，在受精过程中将外源基因导入动物胚胎，从而使外源基因进入子代的基因组中。相对于显微注射法、反转录病毒感染法、胚胎干细胞法等方法而言，它的主要优点是利用精子的自然属性克服了人为机械操作给胚胎造成的损伤，提高了转基因效率，而且操作简便、成本低廉。因而成为转基因动物研究的热点技术。现就精子结合外源基因的机制进行简要介绍，并对发展起来的精子细胞输精管内注射法、曲细精管徽注射法和睾丸直接注射法等精子载体转基因新途径进行综述。     

精子载体转基因法研究进展

精子载体转基因法是以动物精子为载体，并通过显微注射等途径而完成转基因的一种方法。本文就近年来该领域的研究现状、存在的问题等进行了综述，并对其前景做一展望。     

精子载体转基因技术研究进展

精子因在受精过程中的独特作用,而被公认为是转移外源DNA的理想载体,且操作简便,成本低廉,危险隐患相对较低,近十几年来的研究结果表明精子载体介导法可以得到转基因阳性动物.本文对精子载体转基因方法、精子载体转基因的机理、影响精子与外源DNA结合的因素以及外源DNA在宿主动物中的存在形式等方面进行了论述,并对精子作为载体的研究方向和前景给予了预测.     

精子载体转基因技术的最新研究进展

用动物精子作为外源DNA载体已成为转基因的主要方法之一,并在多种动物上获得成功.最近,人们对外源DNA与精子结合的分子机理进行深入研究发现外源DNA可与精子膜上30～35 kDa蛋白质特异结合,结合强度受精子膜上MHCII因子的调节.精清中的IF-1因子能抑制精子结合外源DNA,从而维持物种的遗传稳定性.精子结合外源DNA的量是恒定的,部分DNA能进入精子核内,CD4蛋白具有转运外源DNA进入精子核内的功能.进入核内的外源DNA牢固结合在精子核骨架上,然后整合到染色体的特异位点.但是,精子与外源DNA结合后能激活精子内的核酸酶,进而使外源DNA分子降解,可能是导致这种转基因方法稳定性差的主要原因.     

精子载体转基因的研究进展

精子载体法培养转基因动物是目前操作最简便，成本低廉且危险隐患相对较低的一种转基因方法。近10年来的研究结果表明，精子载体法可得到转基因阳性动物，并且引起了更多科研人员的关注。     

精子作为外源基因载体的转基因方法研究进展

以精子为载体的转基因动物制作方法巳引起众多研究者的关注与青睐。近年来此法的研究巳取得较大进展，并在多种动物上获得成功。随着对精子载体法的深入研究，外源DNA与精子结合的方法也不断改进。作者就精子与外源DNA体内、体外的结合方法作一综述。     

精子载体转基因技术的最新研究进展

用动物精子作为外源ＤＮＡ载体已成为转基因的主要方法之一，并在多种动物上获得成功，最近，人们对外源ＤＮＡ与精子结合的分子机理进行深入研究发现：外源ＤＮＡ可与精子膜上３０～３５ｋＤａ蛋白质特异结合，结合强度受精子膜上ＭＨＣＩＩ因子的调节。精清中的ＩＦ－１因子能抑制精子结合外源ＤＮＡ，从而维持物咱的遗传稳定性。精子结合外源ＤＮＡ的量是恒定的，部分ＤＮＡ能进入精子核内，ＣＤ４蛋白具有转运外源ＤＮＡ进入精子     

精子载体法在转基因动物中的应用与前景

作为动物雄性生殖细胞的精子可与卵子受精而形成受精卵。利用精子的这一特点,以其作为载体将外源基因导入动物体内而制作转基因动物。精子载体法以其简便、有效而引起人们的关注。本文对精子载体法的可行性、研究现状、机理及存在的问题等作一综述。     

精子载体法制作转基因动物的可行性

精子载体法转基因由于具有简便易行、对卵原核无损伤等特点，而成为最具诱惑力的转基因方法之一。近年来，已经通过该方法获得了多种转基因动物，从而对精子载体法制作转基因动物的可行性提供了证据。笔者对精子载体法的可行性、机制、提高转基因效率等方面作了简要综述。     

精子载体法制作转基因动物的可行性

精子载体法转基因由于具有简便易行、对卵原核无损伤等特点,而成为最具诱惑力的转基因方法之一近年来,已经通过该方法获得了多种转基因动物,从而对精子载体法制作转基因动物的可行性提供了证据.笔者对精子载体法的可行性、机制、提高转基因效率等方面作了简要综述.     

冷冻保存对公猪精子功能的影响

试验旨在探究公猪精液冷冻保存对其精子功能的影响。取长白猪的鲜精和优质冻精,用精子分析仪检测精子的运动能力,台盼蓝染色检测精子活率,体外受精（IVF）试验检测卵裂率与囊胚率,采用不同功能检测试剂盒检测冻精和鲜精的顶体完整率、线粒体膜通道孔（MPTP）活性、线粒体膜电位（MMP）、线粒体活性、线粒体氧化应激活性氧（ROS）以及精子DNA完整性,实时荧光定量PCR检测弱精子症相关蛋白基因SMCP、TEKT3、DNAH1、TCTE3的表达。结果表明,与猪鲜精相比,猪冻精的活率及活力均显著降低（P<0.05）,冻精的顶体完整率也明显下降（P<0.05）;冻精的卵裂率和囊胚率显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体功能分析结果显示,冻精的MPTP相对荧光单位值（RFU）、线粒体膜电位荧光比率以及线粒体活性光密度（OD）值均显著低于鲜精（P<0.05）;精子线粒体ROS检测发现,冻精的RFU值显著高于鲜精（P<0.05）;精子DNA完整性检测结果显示,冻精拖尾率显著高于鲜精（P<0.05）;而弱精子症相关蛋白基因的表达与鲜精相比,差异不显著（P>0.05）。综上所述,冷冻导致猪精子活率、活力、线粒体功能、DNA完整性下降,最终使得冷冻精液精子的受精能力降低。     

影响猪精子介导基因转移效果的因素研究

为优化猪精子载体法技术参数,利用荧光定量PCR、荧光显微镜检测和精液常规检测方法,分析不同DNA转染剂、不同孵育温度和不同形态DNA对猪精子转染外源DNA的影响。结果表明,PEI和TransFast转染剂能极显著提高猪精子转染效果,且PEI优于TransFast,而NanoFect转染剂包裹DNA不能转染精子。随着转染温度的升高,精子的活力和活率均明显下降,而转染率和内化外源DNA量基本保持稳定,而吸附外源DNA量呈下降趋势。环状DNA和线性化DNA在与精子共孵育后,两者的精子活力、活率、转染率和内化外源DNA量差异均不显著,精子吸附线性化DNA量极显著高于环状DNA量。综合分析表明,外源DNA形态对猪精子转染效果无显著影响;PEI和TransFast能够显著提高猪精子转染效果;共孵育温度以17℃为最佳,本结果为开展精子载体法制备转基因猪研究提供了基础试验依据。     

慢病毒载体的构建及其应用于转基因动物的研究进展

为提高慢病毒载体构建水平,提高转基因整体效率,作者综述了慢病毒载体结构及围绕改善生物安全性、提高目标基因装载量、扩大宿主范围而进行的慢病毒载体改造研究发展历程,指出新型慢病毒载体去除了病毒所有辅助基因,引入了外源调控序列,替换了包膜蛋白,大大提高了慢病毒载体的安全性、基因转移效率和表达效率,使宿主细胞类型更广范,而下游表达载体转染方法的研究又为转基因方法的集成与优化奠定了基础。慢病毒载体制备与多种转基因技术的优化集成,将有助于发展简便、高效、经济的转基因新技术,提高转基因技术的整体水平。     

哺乳动物精子线粒体研究进展

哺乳动物精子线粒体是维持精子活力的关键细胞器,对精子超激活运动、获能、顶体反应及受精等过程起到重要的调节作用。哺乳动物精子线粒体特有的形态特征与特异性酶异构体使其具有独特动力学和调节特性。精子线粒体中发生的氧化磷酸化过程是维持精子运动的重要途径,该过程产生的活性氧对精子功能的维持具有重要作用,但过量可能导致精子损伤,加速精子凋亡。哺乳动物精子质膜磷脂酰丝氨酸外翻和相关半胱氨酸蛋白酶激活级联反应引起细胞凋亡。区别于体细胞线粒体,精子线粒体钙信号可能并未参与精子固有的凋亡途径,作为衡量线粒体功能的敏感指标,其对线粒体膜电位和耗氧量的检测研究至关重要。哺乳动物精子线粒体具有自身的遗传系统,线粒体基因拷贝数可能作为无创衡量精子质量和受精能力的标记。作者重点阐述了哺乳动物精子线粒体的结构、线粒体鞘的形成及其生物功能,包括发生在线粒体中的氧化磷酸化过程、活性氧对精子的利与弊、线粒体参与钙稳态与细胞凋亡过程;介绍了线粒体膜电位和耗氧量的检测,简述了线粒体基因组的研究进展,为进一步探讨线粒体所涉及的精子功能机制奠定基础。     

动物精液品质评定方法的研究进展

人工授精和体外受精技术的广泛应用,使精液保存技术得到了快速发展。精子的质量和功能状态直接影响其受精能力。文章综合阐述了近几年动物精液品质评定的方法:精子质膜完整性检测、线粒体活性的测定、受精能力的检测和精液中酶活性的测定。     

狐精液精子密度简易检测法的初步研究

为寻求一种在生产中既简便、快捷又相对准确的检测狐精液精子密度的方法,对来自不同个体蓝狐和银黑狐的多份精液,根据不同的稀释倍数,分别测得了其相应的精子密度、吸光度和视野精子数,从而得出了精子密度与吸光度和视野精子数之间的相关关系。结果表明,精子密度与吸光度之间的回归关系为指数回归,回归关系显著,相关系数高;精子密度与视野精子数之间的回归关系为直线回归,回归关系显著,相关性良好     

奶牛性控与常规冻精DNA损伤的彗星检测

本文为确定性控冻精与常规冻精的DNA损伤程度,利用彗星实验法分别将奶牛的性控冻精和常规冻精凝胶混合液在裂解液中作用后,使用普通载玻片双层铺胶,电泳,吖啶橙染色后在荧光显微镜下检测、拍照,经CASP软件图像分析后用SPSS 11.5进行数据统计,初步建立了奶牛精子DNA损伤的5级彗星图谱。统计结果显示,性控冻精的DNA损伤系数为116,显著高于常规冻精的损伤系数（28）（P〈0.01）;彗星率为63.06%,显著高于常规冻精的彗星率（31.13%）（P〈0.01）。可以得出,性控冻精DNA损伤显著高于常规冻精。     

精子介导法制备转基因鸡的研究

以LacZ基因为报告基因，构建载体质粒p-OV-β-Gal，转移到鸡早期胚胎内，对外源基因的整合及表达情况进行检测分析，为制备转基因鸡探索新的方法。采用脂质体介导法、精子介导法以及电激法相结合的方法将载体质粒p-OV-β-Gal转移到鸡早期胚胎内，进行转基因鸡研究，结果发现其外源基因整合阳性率为13.2%（7/53），表达阳性率为20.7%（11/53）。说明该方法可作为制备转基因鸡的有效方法。     

精子介导外源DNA转移的研究进展

精子因在受精过程中的独特作用,而被认为是转移外源ＤＮＡ的理想载体。本文对精子作载体进行转基因动物制作的方法、外源ＤＮＡ与精子作用的分子机制、导入动物个体或胚胎的外源ＤＮＡ的存在形式、影响精子与外源ＤＮＡ结合的因素进行了论述,并对精子作为载体的研究方向和发展前景给予了预测。     

附睾功能及其对精子成熟的影响

哺乳动物的附睾为精子的成熟提供了特殊的微环境，是精子成熟、保护、运输和贮存的部位，在生殖过程中起着重要作用。附睾上皮细胞的合成、分泌、转运等功能使精子发生了一系列结构、生化和功能的改变．从而使精子获得受精和运动能力。作者对附睾的形态结构、功能和对精子成熟影响研究现状等作简要综述。