鸡球虫病流行病学、防治药物与疫苗研究进展

家禽养殖业是畜牧业的基础性产业,我国家禽年出栏量达 146 亿羽,约占全球养殖量的 22%,而鸡球虫病是一种严重危害养禽业健康发展的寄生性原虫病,每年给养鸡业造成巨大的经济损失。该病由一种或多种艾美耳球虫寄生于鸡肠道粘膜上皮细胞引起,可导致大量肠上皮细胞受损、出血甚至死亡。近 70 年来,国内外学者一直致力于鸡球虫病防治药物和疫苗的研制,传统的抗球虫药物有聚醚类离子载体抗生素和化学合成类药物,传统的鸡球虫病疫苗有强毒活卵囊疫苗和弱毒活卵囊疫苗。近年来,新药与新型疫苗研发技术平台不断发展,为新型抗球虫药物（天然产物药物）和新型疫苗（亚单位疫苗、DNA 疫苗和活载体疫苗等）的研制提供新的手段和思路。结合鸡球虫病流行病学、防治药物等方面的研究概况,重点阐述抗球虫药物与鸡球虫病疫苗研发等方面的研究进展,以期为鸡球虫病的综合防控提供理论依据。     

鸡球虫疫苗及其佐剂研究进展

    鸡球虫病是养禽业中最重要的疾病之一,每年造成数十亿美元的重大经济损失.当前,药物防治是控制鸡球虫病的主要手段,但是随着耐药虫株的普遍产生及绿色食品概念的形成,人们期望用更好的手段取代之.鸡球虫疫苗和相关佐剂已经成为当前研究的热点.本文就鸡球虫病免疫防治的最新进展,从转基因疫苗、核酸与亚单位疫苗、常规疫苗、免疫佐剂4方面研究展开论述.     

GC02鸡球虫病疫苗免疫对鸡红细胞免疫功能的影响

为了研究GC02鸡球虫病疫苗免疫雏鸡对鸡红细胞免疫功能的影响,将100只1日龄肉杂鸡随机分成试验组和对照组,每组50只;试验组鸡分别于7、14日龄口服免疫8000个GC02鸡球虫病疫苗孢子化卵囊,对照组为不免疫疫苗;并分别在第21、28、35、42日龄进行试验组、对照组红细胞C3bR酵母花环(E-C3bRR)和红细胞IC酵母花环(E-ICR)率的测定.结果表明,在第7、14日龄用GC02鸡球虫病疫苗免疫雏鸡后,分别在第21、28、35、42日龄所测的试验组鸡的E-C3bRR和E-ICR率与对照组相比均无显著性差异(P＞0.05).说明GC02鸡球虫病疫苗免疫雏鸡后,对雏鸡的红细胞免疫功能影响不明显,处于正常水平.     

鸡球虫病的诊治

鸡球虫病是一种肠道寄生性原虫病，主要由艾美属的多种球虫引起，对鸡的为害十分严重。     

GC02鸡球虫病疫苗免疫对鸡红白细胞数的影响

通过GC02鸡球虫病疫苗免疫雏鸡,研究其对鸡红白细胞数的影响。选择100只1日龄肉杂鸡随机分成两组,每组50只。Ⅰ组为对照组,Ⅱ组为试验组,饲喂同种日粮。Ⅱ组分别在7日龄、14日龄给每只鸡免疫8000个GC02鸡球虫病疫苗孢子化卵囊。Ⅰ组和Ⅱ组分别在21、28、35和42日龄采血,进行红、白细胞计数。结果表明在21日龄,Ⅱ组红、白细胞数与Ⅰ组相比差异均显著（P〈0．05）,28、35和42日龄Ⅱ组与Ⅰ组相比差异均不显著（P〉0．05）。从试验组与对照组的红、白细胞数百分比[（E／C）％]来看,免疫后试验组红细胞数先减少,21日龄最低（为对照组的93．89％）,随后慢慢升高,超过对照组,最大值出现在35日龄（为对照组的100．36％）,42日龄又下降;试验组白细胞数均高于对照组,21日龄最高（为对照组的106．64％）,随后慢慢降低,最低值出现在35日龄（为对照组的100．85％）,42日龄稍稍上升。说明GC02鸡球虫病疫苗免疫雏鸡后,对鸡的红白细胞数影响不大。     

环境因素与鸡球虫病

鸡球虫病是危害养鸡业的重要疾病之一.目前,对该病的防治主要有药物防治法和疫苗控制法.在鸡球虫病的发生和流行上,温度和湿度具有重要影响,甚至关系到疫苗免疫的成败.     

鸡球虫病综合免疫防治技术

球虫最早发现于1677年,1879年将其正式命名为球形虫体,直到1939年才开始应用磺胺类药物进行治疗.一直以来,鸡球虫病的综合性免疫防治都是国内外兽医界研究的敏感话题.我们在多年的临床实践中通过对养殖户多方面跟踪调查,对鸡球虫病的流行及防治失败原因进行了详细的分析,对鸡的球虫病也进行了发病治疗试验,这里结合临床实际谈谈鸡球虫病综合免疫防治技术.     

鸡球虫病及其防治措施

对鸡球虫病的流行特点、临床症状、病理学变化、诊断、药物防治等方面进行了综述。     

球虫病疫苗在土杂鸡养殖中的应用效果试验

为探究有效的鸡球虫病防治方法,在黟县碧阳镇某养殖场进行不同方法防治球虫病的效果比较试验。结果表明:使用球虫疫苗进行鸡球虫病防治的效果优于使用化学药剂,配合合理的日常饲养管理将取得更好效果。     

奶牛乳房炎重要候选疫苗蛋白的抗原表位分析及三联重组表位疫苗的氨基酸序列设计

为设计奶牛乳房炎三联重组表位多肽疫苗,选取奶牛乳房炎3种主要感染菌的候选疫苗蛋白:金黄色葡萄球菌的Ebps与ClfA,大肠埃希菌的OmpA与OmpC,链球菌的SIP与PGK,通过ABCpred和BepiPred方案,预测获得每种蛋白各有2个优势B细胞表位;利用神经网络与量化矩阵法预测蛋白的CTL表位。结果显示,SIP蛋白无CTL表位,其余蛋白均存在1个CTL细胞表位;采用MHC-Ⅱ类分子结合肽在线程序预测蛋白的Th表位,结果发现每种蛋白各有1个Th细胞表位。使用DNASTAR软件分析6个蛋白的二级结构,结果发现,预测获得的B/T细胞表位大多处于蛋白易于产生表位的暴露表面、无规则卷曲与转角等位置。再通过Protean程序重组拼接获得的B/T细胞抗原表位,最终设计获得抗原性较好的三联表位疫苗氨基酸序列。为新型奶牛乳房炎三联表位疫苗的研制奠定基础。     

Research and development of a novel subunit vaccine for the currently circulating pseudorabies virus variant in China

Pseudorabies (PR) is a devastating viral disease which leads to fatal encephalitis and respiratory disorders in pigs. Commercial gE-deleted live pseudorabies virus (PRV) vaccine has been widely used to control this disease in China. However, the new-emerging variants of PRV compromises the protection provided by current vaccines and lead to the outbreak of PR in vaccinated pig herds. Several killed and live vaccine candidates based on current PRV variants have been reported to be effective to control the disease. A subunit vaccine based on gB protein, one major PRV glycoprotein which elicits strong humoral and cellular immune responses, however, was never evaluated for protection against the current circulating PRV variants. In this study, full-length PRV gB protein was successfully expressed in baculovirus/insect cells in the soluble format and was tested on 3-week-old piglets as a subunit vaccine. Compared with unvaccinated pigs, the gB-vaccinated pigs developed specific antibody-mediated responses and were protected from the virulent PRV HN1201 challenge. All vaccinated pigs survived without showing any PRV-specific respiratory and neurological signs, but all unvaccinated pigs died within 7 days after HN1201 challenge. Hence, this novel gB-based vaccine could be applied as an effective subunit vaccine to control PRV variant in China.     

感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后免疫保护效应及其机理研究

 雏鸡 1日龄人工感染鸡贫血病毒 (CAV) ,于 8日龄接种 L asota疫苗 ,免疫后 2 8d进行新城疫强毒 (v NDV)攻击 ,以同龄未感染 CAV和用 L asota疫苗免疫并经 v NDV攻毒雏鸡为对照 ,检测其免疫保护效应 ,胸腺和脾脏 T细胞数量及 T细胞增殖反应 ,法氏囊和脾脏 Ig G+、Ig M+、Ig A+抗体生成细胞数量 ,血清免疫球蛋白 Ig G、Ig M、Ig A含量 ,血凝抑制抗体 (HI)滴度等。结果表明 ,CAV人工感染并用新城疫 (ND)疫苗免疫雏鸡经 v NDV攻击后的免疫保护率为 6 0 % ,对照组雏鸡 v NDV攻击后免疫保护率为 10 0 % ,胸腺和脾脏 T细胞数量和 T细胞增殖反应、法氏囊和脾脏Ig G+ 、Ig M+ 、Ig A+ 抗体生成细胞数量、血清 Ig G、Ig M、Ig A含量及 HI抗体滴度 ,均较对照组雏鸡显著降低。说明感染鸡贫血病毒雏鸡接种新城疫疫苗后的免疫保护效应及免疫功能明显降低。     

2种植物多糖对PRRSV灭活苗免疫猪抗体及T淋巴细胞亚群的影响

将24头35日龄断奶仔猪随机分为6组,2种多糖(山药多糖和黄芪多糖)分别以高、低2个剂量(山药多糖剂量17.10、8.55mg/kg,黄芪多糖剂量为11.50、5.75mg/kg)和猪PRRSV灭活苗同时注射,于免疫后不同时间点采血,监测PRRSV抗体水平和外周血中T淋巴细胞亚群的变化.结果表明,2种多糖均能增强免疫猪的体液免疫,其中以高剂量的黄芪多糖效果较好;2种多糖均能促进猪CD3+细胞的增殖,其中以山药多糖效果较好,提示2种多糖对PRRSV灭活苗免疫效果均有较好的增强作用.     

口蹄疫3D蛋白N端T细胞表位重组蛋白的表达、纯化及鉴定

为获得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)3D蛋白N端T细胞表位的重组表达蛋白,根据FMDV3D蛋白前115位氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET-28a中,构建原核表达质粒pET28a-115,并将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞。经IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-bolt鉴定,结果显示,在16kD处有一条明显的蛋白表达条带。对表达产物进行可溶性分析,结果表达蛋白50%为可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后获得了较高浓度和纯度的目的蛋白。研究结果表明,含FMDV 3D蛋白前115位氨基酸的重组蛋白在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,并具有较好的抗原活性,为开发口蹄疫诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础。