感染TMV诱导的番茄叶蛋白和部分酶活性的变化

番茄系统感染ＴＭＶ诱导叶可溶性蛋白发生变化，ＳＤＳ—ＰＡＧＥ分析表明，叶片因感染ＴＭＶ而引起新蛋白的合成。分析番茄叶片的一些糖苷酶和氧化酶总活力和胞外酶活力表明，感病引起几丁酶等糖苷醇和多酚氧化酶等氧化酶活力上升，而且这些酶活性主要位于细胞外。     

系统感染TMV诱导的番茄叶片过氧化物酶

番茄系统感染ＴＭＶ诱导叶片胞外蛋白量增加。叶片过氧化物酶活性升高，分析叶片总活力和叶胞外酶的活力表明，感病番茄过氧化物酶活力主要位于胞外。同工酶分析表明，番茄感染ＴＭＶ后叶片产生了新的过氧化物酶同工酶带，对比叶片胞外蛋白的ＰＡＧＥ图谱表明，一组主要蛋白带具过氧化物酶活力。ＳＤＳ—ＰＡＧＥ的过氧化物酶同工酶复性分析证明，番茄叶片过氧化物酶至少存在两种分子量。     

番茄TMV、叶霉病和根结线虫病苗期多抗性鉴定方法的研究

为加速蕃茄抗病育种工作的进行 ,研究了蕃茄 TMV、叶霉病和根结线虫病苗期多抗性的鉴定方法。结果表明 ,番茄苗期 TMV、叶霉病、根结线虫病的最佳复合鉴定方法是 ,在 2片真叶接种根结线虫 ,采用灌根法 ,接种浓度 5 0 0 0条 /株 ,接种后 5 0 d调查病情 ;3片真叶接种 TMV,采用摩擦法接种 ,接种量 1g病叶加蒸留水 10 m L,接种后第 3d复接一次 ,接种后 2 0 d调查病情 ;4片真叶接种叶霉病 ,采用喷雾法接种 ,接种浓度 10 6个孢子 / m L,接种后 18d调查病情     

TMV侵染番茄引起的细胞结构变化及细胞程序化死亡

为研究植物系统反应过程中出现的细胞程序化死亡(PCD)现象，用烟草花叶病毒(TMV)接种番茄叶片，光镜和电镜观察到茎尖顶端细胞出现：PCD特征：线粒体嵴数目减少直至双层膜破毁、前质体基粒扭曲变形、细胞核畸形、核染色质浓缩并边缘化、细胞质和液泡中出现大量环状片层及酚类物质、多泡体出现、细胞壁膨胀扭曲、叶肉细胞的叶绿体基粒和基质片层结构破坏。试验表明：TMV侵染番茄引起的系统反应过程中有：PCD发生；茎尖细胞发生的PCD现象类似于动物细胞中细胞质的细胞死亡。     

外源ABA和GA对番茄果实成熟发育中糖苷酶活性的影响

为了研究糖苷酶在番茄果实成熟和软化中的作用,以LA2895(GA突变体)果实为试材,研究了ABA和GA处理的番茄果实糖苷酶的变化情况.结果表明,GA对3-甘露糖苷酶具有负调控作用,而对α-L-阿拉伯糖苷、β-半乳糖苷酶和β-D-木糖苷酶起到正调控且放大酶信号的作用;ABA与GA以协同作用调控着β-D-木糖苷酶、β-半乳...     

TMV和CMV病毒外壳蛋白基因双靶向的RNA干涉载体构建

依据RNA干扰机制构建多病毒基因靶向的RNA干涉双元载体系统,为培育抗病毒复合侵染的番茄品种提供遗传转化载体。以烟草病毒病(TMV)、黄瓜花叶病毒(CMV)病毒外壳蛋白基因作为RNA干扰靶标基因,针对病毒株系间外壳蛋白基因同源区域设计靶序列引物,经RT-PCR获得两段靶标基因的DNA靶序列。借助T载体将两段靶序列连接成一条DNA序列。酶切后正向、反向锚定连接到p UCCRNAi中间载体的克隆位点,形成靶序列在载体中的双向重复结构;重复结构酶切后插入含超强启动子的p C2300-35s-OCS表达载体,重组的表达载体质粒电击转化到只含辅助质粒的根癌农杆菌中,完成RNAi双元载体系统的构建。     

感染番茄斑萎病毒辣椒防御酶活性的变化

为辣椒番茄斑萎病毒病绿色防控及分子育种提供理论依据,以贵州主栽辣椒品种百宜辣椒和遵义朝天椒及易感病品种茄门甜椒作为研究材料,采用ELISA法测定感染番茄斑萎病毒(TSWV)辣椒超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶(PAL)和多酚氧化酶(PPO)活性的变化,明确辣椒对TSWV的抗性与防御酶活性的关系。结果表明:接种TSWV第1天时,3个辣椒品种的PAL、POD、PPO和CAT活性均增高,PAL和CAT的最高峰出现在第7天,POD和PPO出现在第5天;SOD活性呈先升后降趋势,7d后与对照(健康)的基本一致。遵义朝天椒和百宜辣椒PAL、POD、PPO和CAT活性出现2个峰值,茄门甜椒出现1个峰值,遵义朝天椒和百宜辣椒对TSWV的抗性较好,茄门甜椒的抗性稍弱。5种防御酶活性与辣椒抗TSWV密切相关,在辣椒对TSWV抗性生化机制中起重要作用。     

感染番茄斑萎病毒辣椒防御酶活性的变化

为辣椒番茄斑萎病毒病绿色防控及分子育种提供理论依据,以贵州主栽辣椒品种百宜辣椒和遵义朝天椒及易感病品种茄门甜椒作为研究材料,采用ELISA法测定感染番茄斑萎病毒（TSWV）辣椒超氧化物岐化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)、苯丙氨酸解氨酶（PAL)和多酚氧化酶(PPO)活性的变化,明确辣椒对TSWV的抗性与防御酶活性的关系。结果表明：接种TSWV 第1天时,3个辣椒品种的PAL、POD、PPO和CAT活性均增高,PAL和CAT的最高峰出现在第7天,POD和PPO出现在第5天;SOD活性呈先升后降趋势,7 d后与对照的基本一致。遵义朝天椒和百宜辣椒PAL、POD、PPO和CAT活性出现2个峰值,茄门甜椒出现1个峰值,遵义朝天椒和百宜辣椒对TSWV的抗性较好,茄门甜椒的抗性稍弱。5种防御酶活性与辣椒抗TSWV密切相关,在辣椒对TSWV抗性生化机制中起重要作用。     

植物提取液对感染TMV烟叶中自由基含量及TMV增殖的影响

研究了商陆、落葵、毛叶子花和配伍植物(板蓝根等20种植物混合)的水提取液对感染TMV烟叶中自由基含量和TMV增殖的影响,并探讨了其防治TMV的效果。结果表明,不论在接种TMV毒液之前施用,还是接毒后施用上述植物提取液都能使O2·-和.OH含量降低,且对TMV增殖有较好的抑制作用,其中配伍植物提取液对TMV的防治效果优于单一植物提取液,并且预防效果大于治疗效果。     

壳寡糖诱导和TMV侵染烟草防御酶活性的变化

为了明确壳寡糖诱导烟草对TMV的抗病作用机理,以普通烟为供试材料,用壳寡糖(Chito-oligosaccharide)喷雾处理烟草叶片后再接种烟草花叶病毒(TMV),系统研究了壳寡糖处理对烟草防御酶活性变化的影响。结果表明,壳寡糖喷雾处理普通烟草24 h后再接种TMV,烟草叶片中过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)和多酚氧化酶(PPO)活性较对照都有明显增加,最高活性高峰分别为空白对照的162.3%,118.4%,265.4%,162.3%,其中CAT和SOD峰值提前。壳寡糖处理后,随着酶活性增强,对TMV的系统诱导抗病性得到表达,其二者具有一定的相关性。     

水杨酸诱导烟草抗TMV作用的研究

SA喷雾处理烟草叶片可诱导烟草获得对TMV的抗性.用不同浓度的SA溶液处理心叶烟(Nicotiana glutinosa)以测定其抑制病斑的最佳浓度,并测定烟草品种K326(N.tabacum)体内防御酶系变化.结果表明:8 mmol/L SA病斑抑制效果最好,抑制率达到57.14%,SA在心叶烟上的防效在诱导处理后7d达到最佳.同时,SA处理可导致烟草品种K326叶片的PAL、POD、SOD活性不同程度提高,表明SA可诱导烟草对TMV的抗性,提高烟草的免疫能力.     

不同抗性番茄品种感染番茄花叶病毒（TMV）后若干生化反应

在接种ＴＭＶ两周后测定了５个抗性不同的番茄品种的ＰＡＬ、ＰＯ和ＰＰＯ活性，以及过氧化物酶同工酶酶谱的变化。结果表明，抗病感病各品种接种ＴＭＶ后ＰＯ、ＰＰＯ酶活性均比相应健株高，且ＰＯ活性的病／健值与抗性成负相关，而ＰＰＯ活性的病／健值与抗性成正相关；ＰＡＬ活性变化与抗性无相关性；抗、感品种病株守氧化物酶同工酶都比相应健株酶带多，且抗性品种比健株多出２条酶带，而感病品种只多出１条酶带。     

苯并噻二唑诱导番茄对番茄黄化曲叶病毒病的抗性

以番茄感病品种1479和2300为材料,研究了苯并噻二唑(BTH)诱导番茄对番茄黄化曲叶病毒病的抗性,并测定BTH处理和番茄黄化曲叶病毒(TYLCV)接种对番茄叶片几种防御酶活性的影响。结果表明,0.1～2.0mmol/L BTH能有效诱导番茄产生对番茄黄化曲叶病的抗性,其中0.5 mmol/L BTH处理效果明显,诱导效率可达42.7%。喷施BTH或接种TYLCV均可提高番茄叶片超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)和苯丙氨酸解氨酶(PAL)的活性,但诱导并接种处理的植株叶片上述酶活性比只诱导不接种处理高。说明BTH处理可以诱导番茄增强防御酶活性,降低病情指数,增强对番茄黄化曲叶病的抗性。     

TMV溶液诱导蚕豆根尖微核的研究

应用蚕豆根尖微核试验初步研究了一定浓度的烟草花叶病毒(Tobacco Mosaic Virus,TMV)溶液对环境污染的效应.结果表明,TMV溶液浓度与各处理蚕豆根尖微核率的相关性较强(r=0.982),且差异极显著(P=0.003＜0.01),即蚕豆根尖微核率随着TMV溶液浓度的升高而增加;同一浓度的TMV溶液处理蚕豆根尖不同时间后其微核率在各组间没有显著差异(P＞0.01),且蚕豆根尖微核率与处理时间相关性不强(r=0.312).研究表明蚕豆根尖细胞微核技术可应用于烟草花叶病毒遗传毒性监测.     

双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析

通过对转ＴＭＶ和ＣＭＶ双价外壳蛋白基因番茄Ｔ１代群体和Ｔ２代株系进行ＰＣＲ及ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ鉴定，并分别进行温室及田间抗病毒试验，结果表明，Ｔ１代工程番茄植株中确有ＣＭＶ—ＴＭＶ双价外壳蛋白基因的遗传和分离，其遗传行为符合显性单基因的孟德尔遗传。Ｔ２代部分株系ＣＭＶ—ＴＭＶ双价ＣＰ基因已获得稳定遗传，共获得了３个遗传稳定的番茄株系。     

不同烟草品种感染TMV病程过程中CAT、PAL活力变化研究

对两个具有SAR特性和一个感病烟草资源进行接种TMV和SA处理,在不同时间测定CAT、PAL活力值,分析不同类型烟草资源病程过程中上述两个酶活力值的动态变化.结果表明:具有SAR特性的抗性品种资源对TMV和SA表现出较高的敏感性,PAL活力值在处理后明显地高于感病资源, CAT活力值在处理后低于感病资源;其中CAT活力值的变化早于PAL酶活力值的变化.两个具有SAR特性的烟草资源在总体趋势上相一致,但存在一定的差异性.这与克隆出的相应抗性基因片段序列结果相一致.     

水杨酸对感染TMV烟草叶片PAL活性的影响

用水杨酸(SA)和普通烟草花叶病毒(TMV)诱导且接种抗病烟草品种CV85和感病烟草品种G80,研究其对烟草叶片苯丙氨酸解氨酶(PAL)活性的影响。结果表明,抗、感病烟草品种对照接种处理的PAL活性均较对照增加;抗病烟草品种CV85诱导和诱导接种处理的PAL活性也较对照增加,且较对照接种增加得更为明显,8d时可达活性高峰;而感病烟草品种G80诱导接种后,其PAL活性先增加后降低,而对照接种后PAL活性升高,17d时达到活性高峰;诱导接种并没有增加感病烟草品种的PAL活性,而增加了抗病烟草品种的PAL活性。可见,外源应用SA控制烟草花叶病毒病在抗病品种上表现更好。