二级竞争酶联免疫孕酮临界点判别分析在乳牛早期妊娠诊断上的应用

本文根据二级竞争酶联免疫定量测定的原理建立了用于乳牛早期妊娠诊断的二级竞争酶联免疫孕酮临界点判别分析法．本方法无需仪器比色和数学计算，反应结果清晰可辨、操作简便．根据对５２０头次配种后２１ｄ乳牛进行测试，其总正确率为８３．８％，其中阴性正确率为９０％，阳性正确率为７９％。     

二-11-α-羟基孕甾酮癸二酸酯的合成与鉴定

二－１１－α－羟基孕甾酮癸二酸酯的合成与鉴定二－１１－α－羟基孕甾酮癸二酸酯是建立二级竞争酶联免疫孕酮测定技术的关键性试剂,但迄今未见有关其人工合成的报道。本试验用癸二酸（ＳｅｈａｃｉｃＡｃｉｄ）通过脱水反应将二分子１１－α－羟孕酮（１１－α－ｈｙｄ...     

抗孕酮Fab''-大豆过氧化物酶交联物的制备和鉴定

用硫酸铵沉淀法对兔抗孕酮血清进行粗提后用DEAE Sepharose Fast Flow对IgG进行层析纯化，然后用胃蛋白酶切除Fc片段而制备F(ab’)2，用β-琉基乙醇还原F(ab’)2后得到F（ab’）2，再将Fab’与热稳定性较高的大豆过氧化物酶(SBP)偶联制得抗孕酮Fab’-SBP。将抗孕酮Fab’-SBP用于二级竞争酶联免疫法测定孕酮有以下优点：(1)减少因Fc片段与固相载体非特异性吸附而引起的高背景干扰；(2)由于Fab’和SBP在很温和的条件下偶联，可使偶联产物保持较高的免疫活性和酶活性。     

抗孕酮Fab''的制备和鉴定

利用酶联免疫测定法(ELISA)测定乳中孕酮含量来进行妊娠诊断的的方法有很多,采用二级竞争酶联免疫法可提高反应的灵敏度,但操作可进一步简化。通过制备抗孕酮Fab'可简化该操作。实验采用硫酸铵沉淀法对兔抗孕酮血清进行粗提,再用DEAESepharoseFastFlow对IgG作进一步纯化,回收率为93.24%。用胃蛋白酶将IgG消化成F(ab')2,回收率为73.75%。F(ab')2用10mmol/L巯基乙醇在pH6.0,37℃条件下反应2h而被还原成Fab',回收率为67.84%。最后对IgG、F(ab')2、Fab'进行SDS-聚丙酰胺凝胶电泳其分子量分别接近于150000、92000、46000。     

有机磷杀虫剂毒死蜱的免疫化学分析方法研究

 将免疫抗原AR-BSA免疫兔子,制得了高效价的抗毒死蜱多克隆抗体,采用改良高碘酸钠法将纯化的抗体制备了酶标抗体。利用所得的抗体与酶标抗体,分别建立了有机磷杀虫剂毒死蜱的免疫化学分析方法,间接竞争ELISA法与直接竞争ELISA法的检测限分别为0.0033和0.0042μg·ml-1,它们的检测范围在0.005～2.0μg·ml-1之间,线性关系较好。     

应用ELISA对畜产品瘦肉精残留的快速筛选

应用竞争酶联免疫法(ELISA),能够快速对猪尿、猪肝中的克伦特罗残留进行检测筛选,一般实验只需2～3 h,而且准确性高和重复性强,检测费用相对低廉.     

酶标记大豆甙元的制备和鉴定

本文报道丹贝中生物活性物质大豆甙元同辣根过氧化物酶偶氧及其酶活性、免疫活性和光谱分析鉴定，大豆甙元－－辣根地氧化物酶标记物中两者摩尔比１１：１，标记物工作浓度５０ｍｇ／ｍｌ，３．５ｎｇ／ｍｌ大豆甙元能与氧化酶标记物发生５０％左右竞争。     

新型免疫抑制剂酶酚酸酯在风湿性疾病治疗中的应用

酶酚酸酯(mycophenolate mofetil,MMF),商品名骁悉,是一种选择性抑制T、B淋巴细胞增生的新型免疫抑制剂。MMF为一种前体药物,在体内被迅速水解成酶酚酸,后者可逆性、非竞争地抑制次黄嘌呤核苷一磷酸脱氢酶,抑制了鸟嘌呤核苷的从头合成途径(经典途径),     

莱克多巴胺免疫抗原与多克隆抗体的制备

采用碳化二亚胺-N-羟基琥珀酰亚胺(EDC-NHS)法将莱克多巴胺(RAC)与活化的牛血清白蛋白(BSA)偶联,合成了免疫抗原(RAC-BSA),经聚丙烯酰胺凝胶电泳法和紫外吸收法鉴定偶联成功.用合成的免疫抗原免疫家兔获得了高效价的多克隆抗体,采用所得抗体和辣根过氧化酶标抗原建立莱克多巴胺直接竞争酶联免疫吸附分析法(ELISA),标准曲线呈典型S型,具有良好的线性关系.     

诺氟沙星间接竞争酶联免疫检测方法的建立

以人工合成的诺氟沙星-卵血清白蛋白(NFLX-OVA)为检测抗原,NFLX标准品为竞争半抗原,两者与一定量的NFLX抗血清反应.结果表明,理想的包被抗原质量浓度为0.5 μg/mL, NFLX抗血清稀释倍数为1 :32 000,酶标二抗稀释倍数为1 :3 000,最小检测量为34.5 ng/mL.得到回归方程(y=-18.418x+94.986,r2=0.984 3)和标准曲线,从而建立了快速定量测定NFLX含量的间接竞争酶联免疫(ci-ELISA)检测方法.     

间接酶联免疫吸附法测定大鲵凝集素

[目的]建立基于大鲵凝集素多克隆抗体酶联免疫定量分析的方法。[方法]以大鲵凝集素为抗原,免疫新西兰白兔获得多克隆抗体,建立间接非竞争酶联免疫检测方法,并对该方法的精密度及准确度进行了测试。[结果]获得的抗血清效价为1∶16 000,多克隆抗体血清的最佳稀释度为1∶3 000,辣根过氧化物酶(HRP)标记的羊抗兔二抗最佳稀释度为1∶30 000,抗原浓度在31.25~1 000.00 ng/m L范围内呈良好的线性关系,相关系数R~20.99,板内及板间变异系数范围分别为2.50%~9.88%和2.69%~11.59%,回收率为91.5%~109.5%。分布结果显示,大鲵凝集素在躯干部肌肉组织中的含量较高。[结论]成功建立了大鲵凝集素间接非竞争酶联免疫检测方法,该方法灵敏度高,重复性好,可用于实际检测大鲵肌肉组织中的凝集素含量。     

玉米和花生中黄曲霉素B_1酶联免疫快速分析方法

将黄曲霉素Ｂ１衍生成胺氧乙酸肟,然后分别同牛血清白蛋白和辣根过氧化物酶进行化学交联而制得结合物。前者用来免疫新西兰大白兔,后者用作免疫反应的示踪物。将所得抗体和示踪物在免疫反应中进行浓度优化,开发出了ＡＦＢ１酶联免疫分析直接竞争抑制法。用所建立的方法能够准确、快速地检测玉米和花生中黄曲霉素Ｂ１的含量。ＡＦＢ１在磷酸盐－吐温缓冲液中的最低检测限为０．４ｐｇ／ｍＬ;在玉米和花生中的最低检测限均为４０ｎｇ／ｋｇ。     

酶联免疫分析法及其在食品农药残留检测中的应用

介绍酶联免疫分析法(ELISA)的原理,酶联免疫分析法在食品农药残留检测中应用的技术要点和存在问题,并对酶联免疫分析法在食品农药残留检测中的应用前景作了展望。     

农药残留的酶联免疫分析检测技术研究

酶联免疫分析检测具有高灵敏度,强特异性、操作起来方便快速,隶属于免疫分析方法。在对农药残留的检测中,酶联免疫分析检测具有非常明显的优势,通过对大量的样本进行比对试验,发现它的检测速度最快,检测的准确度也最高。所以,本文对酶联免疫分析检测农药残留技术的基本原理和关键性的技术以及酶联免疫分析在农药残留测定中的应用进行阐述。     

基于免疫分析的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法研究

为建立基于竞争酶联免疫分析(ELISA)的杏仁蛋白饮料中杏仁蛋白质定量方法,使用2-D电泳结合MALDI-TOF/MS鉴定了杏仁的高丰度蛋白,分离纯化了杏仁40 ku prunin蛋白α链,并以此作为抗原制备了抗杏仁蛋白单克隆抗体,使用该抗体建立了检测杏仁蛋白质的竞争酶联免疫分析方法。该方法以杏仁可溶全蛋白作为标准品,IC50为19.6μg/m L,线性范围为5.0~100μg/m L(R2=0.990)。该方法特异性良好,和其他可食种子蛋白质无交叉反应。检测植物蛋白饮料样品的检出限为0.6 mg/m L,相对标准偏差10%。使用巴氏杀菌、超高温瞬时灭菌和高压灭菌的蛋白质平均回收率分别为96%、92%和81%。     

海洋无脊椎动物漆酶型酚氧化酶研究概况

漆酶型酚氧化酶（PO）是一些海洋无脊椎动物非特异性免疫系统的重要组成因子。不同海洋无脊椎动物中的漆酶型PO在进化地位、结构特征、酶学特性和免疫应答特性等方面差异明显,表明不同漆酶型PO在免疫和生理功能上可能存在差异。从发现方法、同工酶组成、分子大小、进化地位、结构特征、酶学特性和免疫应答特性等几方面对海洋无脊椎动物漆酶型PO进行了综述,以期为海洋无脊椎动物非特异性免疫研究积累资料。     

驼源莠去津多克隆抗体的制备及间接竞争酶联免疫吸附分析方法的建立

为构建莠去津的快速监测技术,本试验通过美洲驼免疫,成功建立了基于美洲驼多克隆抗体的莠去津的酶联免疫检测方法,通过棋盘法确定了最佳包被抗原和抗血清稀释倍数,对影响反应的关键因素进行了优化,并进行了交叉反应性试验和添加回收试验。结果表明：通过优化反应体系,确定最优NaCl浓度为0.2 mol/L,最优甲醇浓度为5%,最佳缓冲液pH值为7.4,在最优条件下,间接竞争酶联免疫分析法的IC50为12.13 ng/mL;同时利用其他3种三氮苯类除草剂及常见环境代谢物进行了多克隆抗体的特异性试验,其对特丁津、西玛津和对去异丙基莠去津的交叉反应率较高,其他化合物交叉反应率较低;取河流水进行了实际样品的添加回收试验,试验结果与LC-MS比对,添加回收率在90.1%～114.2%之间,说明驼源多克隆抗体的莠去津间接竞争酶联免疫吸附分析方法可用于检测环境实际样品。     

农药残留的酶联免疫分析检测技术研究

酶联免疫分析检测技术具有灵敏度高,特异性强以及操作简单等优势,因此,在对农药残留进行检测的过程中,酶联免疫分析检测技术的应用十分广泛。本文将对酶联免疫分析检测技术在农药残留检测中应用的具体内容进行深入的分析探究。     

猪尿液中盐酸克伦特罗(瘦肉精)检测方法比较试验

利用快速检测试纸条法、竞争酶标免疫法(ELISA)和气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)分别对84份猪尿液样品进行盐酸克伦特罗检测。结果显示ELISA方法与气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为100.0%,快速检测试纸条法与固相萃取-气相色谱-质谱分析方法(GC-MS)符合率为90.5%。     

条锈病菌侵染小麦不同时期过氧化物酶同工酶的变化

对抗条锈性不同的小麦品种和毒力不同的条锈菌小种互相作用过程中过氧化物酶(POD)同工酶的变化进行了研究。结果表明:条锈菌在入侵期(接菌48h)感病品种酶带一致,免疫品种酶带发生明显的变化,慢锈品种在Rf值0.60处增加1条酶带。酶活免疫品种高于感病品种(p<0.05);在发病期(接种20天)感病品种酶带发生了较大的变化,但免疫品种酶带稳定,慢锈品种在Rf值0.85处增加2条酶带。免疫品种酶活性比感病品种显著增强(p<0.01)。