葡萄霜霉病拮抗细菌的筛选、鉴定及发酵条件优化

【目的】分离获得对葡萄霜霉病菌(Plasmopara viticola)具有明显拮抗效果的菌株,优化其产生抑菌活性物质的发酵条件,为葡萄霜霉病菌的生物防治提供潜在的资源菌。【方法】从染病葡萄植株健康叶片中分离内生菌,采用离体叶片防效试验筛选拮抗菌。根据菌株的形态与生理生化特征、16S r DNA序列分析对其进行鉴定,并采用单因素试验优化培养基组分及发酵条件。【结果】从健康叶片中共分离得到56株内生细菌,其中编号为CS5的菌株对葡萄霜霉病菌的拮抗效果最佳,7 d后对葡萄离体叶片霜霉病防治效果达96.23%,初步鉴定该菌株属于芽孢杆菌属。其最佳发酵碳源为可溶性淀粉,氮源为酵母膏,初始p H值为6.0。【结论】经鉴定,拮抗菌株为Bacillus amyloliquefaciens。在优化的发酵条件下,该菌株对葡萄霜霉病具有更好的拮抗作用。     

芍药灰霉病拮抗细菌的筛选及生防机制研究

以芍药灰霉病发病典型叶片为试材,采用组织分离法进行病原菌的分离,平板对峙法筛选拮抗芍药灰霉病原菌的内生细菌,结合形态学特征和分子生物学手段进行病原真菌和拮抗细菌菌株的鉴定;采用离体叶片法测定拮抗细菌菌株对芍药灰霉病的防治效果,明确引起洛阳地区芍药灰霉病的病原菌种类,并获得防治芍药灰霉病的内生细菌菌株,以期为芍药灰霉病的防治提供参考依据。结果表明：引起洛阳地区芍药灰霉病的病原菌种类为灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea),筛选获得3株对灰葡萄孢菌具有显著拮抗作用的内生细菌菌株SY5、SY15和SY30,其中菌株SY5抑菌效果明显,抑菌率为84.44%。芍药离体叶片防治结果发现,3个菌株均对芍药灰霉病具有良好的防治效果,菌株SY5的防治效果可达67.66%。菌株SY5、SY15和SY30均被鉴定为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。初步探讨3个菌株的生防机制,结果表明3个菌株均可合成脂肽类物质,且对灰霉病菌菌丝有较强的致畸作用,其中菌株SY5脂肽类物质对灰葡萄孢菌的抑制率最高,为88.89%。     

果树真菌病害拮抗细菌的筛选、鉴定及拮抗机制初探

【目的】分离获得对果树真菌病害[苹果轮纹病(Botryospuaeria dothidea)、苹果斑点落叶病(Alternaria alternaria)、葡萄炭疽病(Colletotrichum gloeosporioides)、葡萄白腐病(Coniella diplodiella)和葡萄霜霉病(Plasmopara viticola)]具有明显拮抗作用的菌株,初步研究其作用机制,为果树真菌病害的生物防治提供潜在的材料菌株。【方法】从不同植物上分离内生菌,采用平板对峙法、菌落生长速率法及叶盘法等试验筛选拮抗菌;根据菌株的形态、生理生化特征、16S rDNA序列分析、gyrA基因序列分析等对其进行鉴定;通过测定拮抗菌发酵液对温度、pH值的敏感度分析拮抗物质的稳定性;通过测定拮抗菌发酵液对菌丝的影响,初步分析其拮抗机制。【结果】从不同植物根、茎、叶中共分离得到58株细菌,其中编号为YTB1407的细菌菌株对上述5种植物病原真菌有较好的拮抗作用,经鉴定该菌株为解淀粉芽孢杆菌,且该菌株发酵液的拮抗活性在温度为20~100℃、pH为2.0~10.0,比较稳定。经该菌株发酵液处理后的病原菌菌丝畸形。【结论】该拮抗菌株为Bacillus amyloliquefaciens;温度和pH值对该菌株拮抗物质活性影响不大;该拮抗菌株可以通过影响病原菌菌丝正常生长发挥其拮抗作用。     

2株抗枯萎病尖镰孢菌内生细菌菌株的分离及鉴定

华南地区因尖镰孢菌引起的枯萎病发生较为严重,特别是近年来发现的香蕉枯萎病,对香蕉产业来说更是毁灭性的病害。分离、筛选有拮抗活性的内生细菌是防治枯萎病的有效措施之一。从海南红树林健康叶片中分离到102株非致病性内生细菌菌株,通过室内抗菌活性的测定,得到了2株对枯萎病尖镰孢菌具有明显抑制作用的拮抗菌株。通过对它进行形态、生理生化特性及16SrDNA序列等方面的研究,确定其中1株为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis,命名为BS-009;另一株确定为新发表种Bacillus Mojavensis的一个相似种,命名为BM-027。     

果树内生拮抗细菌的筛选鉴定及其生防作用研究

通过组织分离法,在不同健康果树的木质部中分离到235株内生细菌。通过平板对峙法对所得菌株进行了初筛和复筛,得到6株拮抗作用较强的菌株。用过滤和高温灭菌得到的菌株发酵液进行抑菌谱试验,最终获得拮抗作用较强的内生细菌X8。对X8菌株在植物体内定殖、分类鉴定和防治作用的深入研究。结果表明：X8菌株可以在杏、辣椒等植物中定殖。X8菌株发酵液对辣椒疫霉病菌（Phytophthora capsici）抑制作用最强,达80.3%,对3种链格孢菌（Alternaria）病原菌的抑制作用达到75%以上,对番茄灰霉病和辣椒疫病的防效达到75.4%和79.3%,显著高于50%腐霉利和25%甲霜灵的防效。经16S rDNA序列分析,X8菌株与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis的16S rDNA序列的同源性达99%。综合形态特征、生理生化特性,最终将X8鉴定为B. subtilis,在GenBank中序列登录号为HQ647257。     

防治番茄青枯病内生细菌的分离与筛选

从番茄健株根内分离获得内生细菌 ,对其进行平板拮抗番茄青枯菌试验 ,得到 18株拮抗菌。温室控病试验表明 ,0 1 144和 0 1 182号菌株的控病效果分别为 48.6 %和 42 .8%,经鉴定两者均属芽孢杆菌属 (Bacillsspp)。     

辣椒种子拮抗青枯病菌内生细菌的分离、鉴定

为了探究抗青枯病辣椒品种种子中拮抗青枯病菌内生细菌的种群组成及其在青枯病防治中可能发挥的生态学功能,从抗青枯病辣椒品种种子中分离、筛选出拮抗青枯病菌的内生细菌,对其进行抑菌广谱性分析,测定其对青枯病的生防效果。结果表明,从抗青枯病辣椒品种种子中分离出14株内生细菌,通过平板对峙,筛选出6株拮抗青枯病菌的内生细菌,初步鉴定它们分别为假单胞菌(Pseudomonas)、苍白杆菌(Ochrobactrum)和微杆菌(Microbacterium)。对6株内生细菌进行抑菌广谱性研究,所有内生细菌均至少对1种病原真菌有拮抗作用;将6株内生细菌的菌悬液分别对辣椒种子进行浸种处理后育苗,辣椒苗抗青枯病能力显著提升。辣椒种子中拮抗青枯病菌的内生细菌具有多样性,用其菌悬液处理辣椒种子后,植株对青枯病具有较好的抗病能力,为开展辣椒青枯病微生物防治提供了理论依据及菌种资源。     

污水中西葫芦灰霉病拮抗细菌的分离与应用

从污水中分离得到89株细菌,筛选出对西葫芦灰霉病菌(Botrytis cinerea)有拮抗作用的生防菌株50株,占分离菌株的56.2%,其中拮抗菌株6株,占分离菌株的6.7%.同时测试了拮抗菌株及其无菌培养滤液对西葫芦灰霉病菌菌落生长的作用.结果表明:拮抗菌株对西葫芦灰霉病菌菌落生长有很强的抑制作用,抑制率在67.04%～78.51%之间,其中XTB-37的抑菌带高达12.33 mm;拮抗菌株的无菌培养滤液对灰霉菌生长的抑制率在44.94%～67.42%之间,与抑菌带的大小成正比.     

芝麻立枯病拮抗菌的筛选方案优化

通过对峙培养法,利用PDA、KBM和MYG等3种培养基分别测定399株内生细菌对立枯丝核菌的拮抗作用.结果表明:在3种培养基上均表现出一定拮抗作用的菌株95株,拮抗率为23％.温室条件下测定399株内生细菌对芝麻立枯病的生防效果,共筛选到25株茵可有效降低芝麻立枯病发病率和严重度.优化后的筛选方案为:首先利用3种培养基对内生细菌的拮抗性进行体外初筛,选择3种培养基上均有拮抗性的菌株为目标菌株(95株),再将初筛的拮抗性菌株进行体内复筛,选择可有效降低芝麻立枯病发病率和严重度的生防菌株(22株).     

木霉拮抗菌的筛选与鉴定

采用涂布平板法从植物和土壤中共分离得到301株细菌,其中从羊蹄甲、芦荟和香蕉皮等植物中分离到内生细菌86株,从土壤中分离到细菌215株。以食用菌栽培中的主要污染菌木霉,包括哈茨木霉（Trichoderma harzianum）、长枝木霉（Trichoderma longibrachiatum）等4种共8株木霉菌株以及蘑菇（Agaricus bisporus）、香菇（Lentinul aedodes）等14种不同食用菌为实验菌,通过平板对峙培养法筛选出对木霉有拮抗作用而对食用菌拮抗性弱甚至无拮抗作用的细菌75株。采用传统分类法以及16S rDNA序列分析对其中作用效果最好的5株细菌进行了鉴定,结果显示,5株细菌均为枯草芽孢杆菌Bacilluss subtilis。在实验中还发现,从羊蹄甲、芦荟和香蕉皮等植物中更容易分离到木霉拮抗菌。     

小白菜内生假单胞菌XBC-PS的生防作用

从小白菜植株内分离得到假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株XBC-PS,通过浸种或喷雾接种在小白菜、大白菜和菜薹植株内定殖。培养基平板培养测定,XBC-PS对7种病原菌有较强的拮抗作用。盆栽防病试验结果表明,XBC-PS对小白菜炭疽病和霜霉病的防治效果分别为76.7%和72.9%。     

不同地区黄瓜霜霉病菌毒力的差异

为选择黄瓜抗性品种,对来自全国8个省市18个黄瓜霜霉病菌株的孢子囊长度和宽度进行研究,以期明确定黄瓜霜霉病在各地区间的差异。结果表明:18个黄瓜霜霉病菌株的孢子囊存在差异,来自同一城市的菌株间差异不显著,并从供试的10个黄瓜品种中筛选出7个对不同致病菌株反应型各异,抗病感病界限明显的品种,可初步作为黄瓜霜霉病菌生理小种分化的鉴别寄主,利用所筛选出的鉴别寄主将18个菌株分为12个致病性类型。     

不同栽培方式对设施黄瓜主要病害及品质的影响

采用小麦、燕麦与黄瓜伴生,毛葱、白菜、芹菜与黄瓜套作,研究了不同栽培方式对黄瓜病害和品质的影响。结果表明:不同栽培方式均显著降低了霜霉病和角斑病的发病率和病情指数,其中芹菜-黄瓜和白菜-黄瓜处理效果最佳,霜霉病发病率分别降低42.8%和46.4%;小麦-黄瓜,燕麦-黄瓜和毛葱-黄瓜处理白粉病的发病率分别降低了66.3%、65.2%和83.2%。毛葱-黄瓜处理显著提高了黄瓜果实维生素C和可溶性蛋白的含量,但也提高了硝酸盐的含量;白菜-黄瓜处理显著降低了果实硝酸盐的含量,芹菜-黄瓜处理显著降低了维生素C的含量。小麦-黄瓜、燕麦-黄瓜、毛葱-黄瓜和芹菜-黄瓜均显著降低了可溶性固形物的含量。     

秋茬青梗小白菜品种（系）比较试验

以上海青、华冠2个品种为对照,对6个青梗小白菜新品种（系）进行比较,选出产量、品质、抗病性等综合性状优良的新品种（系）。试验结果表明,T5×T6和白叶C×四月慢22—5是综合性状优良的青梗小白菜新品种（系）,适合苏州及周边地区秋茬栽培,但T5×T6需注意防治霜霉病。     

生防菌H1和H2对黄瓜霜霉病的防效测定

采用田间试验方法测定生防菌H1、H2对黄瓜霜霉病的防效。结果表明:生防菌H1、H2对黄瓜霜霉病的防效分别为35.28%、35.75%,说明生防菌H1、H2不只对黄瓜白粉病效果明显,对黄瓜霜霉病也表现出抑制作用,具有一定的杀菌广谱性。     

几种药剂防治娃娃菜霜霉病药效试验

选用爱诺易得施可湿性粉剂、赛福可湿性粉剂、科佳悬浮剂、安洗水乳剂、广枯灵水剂、拔毒丁乳油对娃娃菜霜霉病进行了田间药效试验。试验结果表明,每次药后50％爱诺易得施可湿性粉剂750倍液和58％赛福可湿性粉剂500倍液的防效均达到80％以上,建议使用这2种药剂交替防治娃娃菜霜霉病。     

几种药剂防治娃娃菜霜霉病药效试验

选用爱诺易得施可湿性粉剂、赛福可湿性粉剂、科佳悬浮剂、安洗水乳剂、广枯灵水剂、拔毒丁乳油对娃娃菜霜霉病进行了田间药效试验.试验结果表明,每次药后50%爱诺易得施可湿性粉剂750倍液和58%赛福可湿性粉剂500倍液的防效均达到80%以上,建议使用这2种药剂交替防治娃娃菜霜霉病.     

轮作与连作对高原夏季甜脆豆病虫害发生及产量的影响

针对甘肃省皋兰县夏季甜脆豆生产上常用的8种轮作与连作方式,研究其对高原夏季甜脆豆病虫害及产量的影响。结果表明:甜脆豆从苗期到采收期,根腐病、斑潜蝇、蓟马均有发生,且逐渐增加,霜霉病在开花结荚期发生,到采收期发病加重。甜脆豆与胡麻和小麦轮作,根腐病发病较轻,重迎茬甜脆豆根腐病较重,但轮作对改善霜霉病的发生效果不明显。甜脆豆与胡麻或小麦轮作,斑潜蝇和蓟马发生量最少,与菠菜、娃娃菜、青花菜轮作发生量居中,连续3a种植甜脆豆,斑潜蝇和蓟马发生量最多。甜脆豆与胡麻或小麦轮作产量最高,与菠菜、娃娃菜轮作产量次之,重迎茬甜脆豆产量最低。相关性分析表明,根腐病和斑潜蝇呈极显著正相关,根腐病和蓟马呈显著正相关,根腐病和产量呈极显著负相关,斑潜蝇、蓟马和产量呈显著负相关,霜霉病和产量呈负相关不显著。     

几种中草药提取物防治莴苣霜霉病研究

通过对8种中草药提取物及其混合物对莴苣霜霉病的抑制作用研究,以期筛选和研究对防治莴苣霜霉病有效的中药制剂。研究结果表明,8种中草药提取物及其混合物对莴苣霜霉病孢子的萌发及田间霜霉病发病抑制作用高于对照,差异达显著水平。无论是对霜霉病孢子萌发的抑制,还是田间霜霉病发病的抑制,中药混合物效果优于单个中药。对莴苣霜霉病孢子萌发抑制效果最好的是穿心莲∶厚朴∶牛蒡=2∶1∶1混合物;对苗期莴苣霜霉病保护效果和治疗效果最好的分别是穿心莲∶厚朴∶牛蒡=2∶1∶1和1∶1∶2处理。     

蛋白农药对温室黄瓜霜霉病的药效研究

以黄瓜品种"津研4号"为试材,研究康壮素、激活蛋白以及与安泰生配施对黄瓜霜霉病的防效。结果表明:3%激活蛋白微颗粒剂0.5g/L+70%安泰生可湿性粉剂1.0g/L对黄瓜霜霉病的防效可达83.71%,而且产量增幅达42.94%,说明植物蛋白农药和化学农药配施可以有效防治黄瓜生产中的霜霉病,而且成本低于单独施用化学农药安泰生,不仅降低成本,而且降低农药残留,有利于无公害蔬菜的生产。