应用双重PCR技术快速鉴定结核与非结核分枝杆菌

本研究建立1种双重PCR技术,用于区分鉴定结核与非结核分枝杆菌.在最佳扩增反应条件下.检测引物P1、P2和P3、P4扩增结核分枝杆菌的特异性及敏感性,并对19株结核分枝杆菌和9株非结核分枝杆菌临床分离株进行扩增鉴定.结果表明,引物P1、P2能扩增所试13株结核和非结核分枝杆菌,P3、P4仅扩增结核分枝杆菌复合群菌种,两对引物同时扩增3种非分枝杆菌均为阴性.两对引物双重PCR检测结核分枝杆菌DNA的敏感性分别为100pg/μl和10pg/μl.检测28株临床分离株,结核分枝杆菌可扩增出368bp和225bp 2条带,非结核分枝杆菌仅扩增出一条361bp～383bp带.因此,该双重PCR技术的建立为结核及非结核分枝杆菌的快速鉴定提供了1个可供选择的手段.     

禽结核分枝杆菌在11种培养基上生长特性的研究

本文对禽结核分枝杆菌在１１种培养基上的生长特性进行了观察，结果表明在鸡蛋为基础的培养基中以Ｌｏｗｅｎｓｔａｉｎ－Ｊｅｎｓｅｎ培养基为佳；琼脂培养基适于禽结核分枝杆菌的生长，但易干裂，不利于长期培养和保存；禽结核分枝杆菌在液体培养基中生长迅速，以苏通氏培养基中生长较为理想，但易污染。本文还测定了培养基中不同浓度甘油对禽结核分枝杆菌的生长的影响，发现甘油能刺激禽结核分枝杆菌的生长，培养基中的甘油浓度在４％～１０％时生长最为旺盛，超过１０％时生长受到抑制，不能生长；不含甘油时，禽结核分枝杆菌生长较贫瘠。     

屠宰工作环境中非结核分枝杆菌流行情况

调查屠宰场工作环境中非结核分枝杆菌(NTM)流行情况,为在屠宰场及其他NTM散播环境中工作人员的医疗保健工作提供参考。吉林省白城市内多家牲畜屠宰场内地表污水及宰杀的猪、牛肠系膜淋巴结和颌下淋巴结中分离NTM,用细菌分离培养、菌种鉴别培养、生化鉴定及分子生物学鉴定等方法联合鉴定屠宰场内工作环境中的NTM流行情况。屠宰场工作环境中NTM总分离率为2.73%,其中地表污水中NTM分离率为3.50%,猪、牛肠系膜淋巴结NTM分离率为2.80%,颌下淋巴结NTM分离率为2.00%。所分离的NTM中包括常见的致病力较强的母牛分枝杆菌、胞内分枝杆菌、偶发分枝杆菌等菌型。屠宰场中的工作人员属NTM的易感高危人群,应加强对该类工作人员NTM的保健防治工作,同时也为其他NTM高危易感环境中工作人员的医疗保障提供参考。     

不同营养物对蛹虫草生长影响的研究

目的:以本实验室分离获得的蛹虫草菌株为实验对象,在其液体培养和栽培过程中添加不同的营养物,通过比较组别间形态学和生物转化率的差异,比较不同的营养物对其子实体生长及子代菌种的影响。方法:分别在菌种液体培养和栽培培养的过程中加入不同的营养物,通过比较子实体的表观形态和生物转化率确定可用于蛹虫草菌种培养过程的营养物质。并通过组织分离的方法获得子代菌种,与未添加营养物并进行组织分离的子代菌种相比较,比较子代菌种子实体的表观形态和生物转化率。结果:在液体培养阶段添加鸡脑浸出液、在栽培培养基中加入蛹粉,可获得表观形态和生物转化率均较优的子实体,生物转化率可提高16.3%,且该组合结合组织分离的方法获得的子代菌种表观形态和生物转化率最高。     

Pseudomonas sp.H8的分离和鉴定及其产絮凝剂成分分析

为挖掘产生物絮凝剂的菌株,利用生物絮凝剂对污水、淤泥进行环保处理。本研究经过菌种分离纯化和对高岭土悬浊液沉降效果分析,从低温污水处理生物膜中获得1株高效絮凝菌,命名为H8,该菌株在4℃条件下生长良好,其LB发酵液对高岭土的絮凝效率达到85.79%,针对H8菌株的一系列菌种鉴定,包括菌落形态、菌体形态、生理生化试验、Biolog菌种鉴定系统分析和细菌16SrDNA序列分析比对,与菌种Pseudomonas mandelii亲缘关系最近,确定H8菌株为假单胞菌属。采用乙醇沉淀法对H8菌株发酵液中的絮凝剂进行提取,再经过Sevage法除去絮凝剂中蛋白质,获得絮凝剂产率0.807g·L~(-1),与发酵液相比其絮凝率也提高到98%以上,定性定量分析结果确定H8絮凝剂的化学成分主要为多糖,占51%,还含有2.64%蛋白质、1.3%葡萄糖醛酸和少量氨基糖。     

响应面法优化双孢蘑菇菌株W38液体菌种培养的研究

利用Design-Expert软件,在前期单因素试验的基础上,采用Plackett-Burman设计和中心组合设计对双孢蘑菇新菌株W38液体菌种培养基及培养条件进行优化。根据响应面分析法建立模型并确定其最佳的培养基和培养条件为:小米粉49.90g·L~(-1),黄豆粉13.60g·L~(-1),KH_2PO_4 2.00g·L~(-1),MgSO_4·7H_2O 1.067 5g·L~(-1),初始pH 6.5,发酵时间7d,发酵温度24℃,摇瓶转速180r·min~(-1)。在此条件下,双孢蘑菇菌株W38液体菌种的菌丝体每100mL生物量可达2.35g,与初始培养条件下的菌丝体生物量相比提高了3.05倍,平均菌丝生长速度加快了14.7%。     

通气培养鸡腿蘑液体菌种及栽培试验研究

采用通气培养方式在三角瓶中培养鸡腿蘑液体菌种,从5个鸡腿蘑菌株中筛选出一株适合液体培养的菌株R J。液体培养基为:棉籽壳2.5%,玉米粉2.5%,麸皮2.5%,葡萄糖2%,蛋白胨0.2%,酵母浸出汁0.2%,KH2PO40.1%,MgSO40.05%,维生素B10.01%,豆油0.5%。培养条件为:温度25℃,气泵通气量60L/m in。培养5 d菌丝量达最高。将R J液体菌种接到3种不同的栽培料上,观察其发菌及出菇情况,结果表明,液体菌种的生长速度明显高于固体菌种。     

一株鸡源发酵乳杆菌益生菌的分离鉴定

筛选优质鸡源益生菌菌种,为畜禽微生态制剂的研发提供优质的菌株来源,为开发禽用微生态制剂提供安全高效菌种资源和理论支撑。试验以健康鸡肠道为分离材料,使用MRS培养基(乳酸菌细菌培养基)进行分离培养,并对分离菌株进行形态特征、生理生化鉴定及分子生物学鉴定。试验研究发现在鸡盲肠中分离获得一株细菌,鉴定为发酵乳杆菌,编号为J4。分离获得的菌株具有耐热、耐酸、耐胆盐等特点,同时对动物机体安全无毒,可作为鸡源发酵乳杆菌益生菌的优良候选株。     

巨菌草根内生固氮菌Klebsiella variicola的分离、鉴定及培养条件的优化

采用Ashby和Nfb无氮培养基从巨菌草成熟期根部分离得到1株具有高效固氮性能的内生固氮菌GN02,其在分离的菌落中所占比例最高,且酶活性较高.经16S rDNA序列鉴定,该菌株与克雷伯氏菌属各菌株同源性关系可达99%,结合其形态、生理生化特征,初步鉴定为变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola).在含氮源的KP培养基中菌株GN02的生长情况明显优于无氮源的Ashby培养基.菌株GN02在KP培养基中的最优培养条件为:温度37.1℃,pH 5.6,蔗糖25.6 g·L~(-1),在此条件下其D_(600 nm)能达到1.48,比优化前提高了22.31%.响应面优化所得到的培养条件重复性好,准确、可靠.     

高度耐受草甘膦菌株JDG-1的分离及其培养条件初探

通过摇瓶富集培养法从长期喷施草甘膦的土壤中分离出一种草甘膦抗性菌株,命名为JDG-1。该菌株在M9基础盐培养基上最高可以耐受500 mmol/L的草甘膦浓度。通过菌株基因组16S rDNA序列及菌落形态学分析,鉴定JDG-1菌株为欧文氏菌属(Erwinia)细菌(GenBank:MH777390)。JDG-1菌株在含100、200 mmol/L草甘膦筛选压的LB和M9液体培养基中长势良好。通过pH值梯度和温度梯度培养试验发现,在pH值为7.0和温度为31℃的条件下菌株JDG-1生长最好。抗生素抗药性试验发现JDG-1菌株具有一定水平的氨苄青霉素、链霉素和庆大霉素抗性能力。菌株JDG-1具有较高的草甘膦抗性和嗜药性,可作为草甘膦污染环境的生物修复菌种。     

黑木耳菌丝深层培养的工艺及其应用

以Au.793菌株为材料,研究了8种营养物质对菌丝生长的影响,并通过正交试验得到深层培养黑木耳菌丝的适宜培养基配方:葡萄糖0.5%,麸皮4%,黄豆粉0.2%。同时确定了深层培养黑木耳液体菌种的工艺条件:温度28℃,培养基pH值6～6.5,罐压0.6kg/cm~2,通气量0.25～0.5v/v/m,搅拌速度500rpm,接种量10～15%,种龄48小时。用液体菌种进行代料栽培,结果表明:液体菌种比传统的固体菌种迟缓期短,污染率低,生长快,可提前10～12天出耳。     

平菇菌丝液体培养基的优化

[目的]研究平菇菌丝液体培养基的最佳配方。[方法]以平菇为试材,以菌丝干重为检测指标,筛选液体发酵培养基的最佳碳源和氮源,通过单因素试验和正交试验,研究供试菌株液体发酵的最佳培养基配方。[结果]供试菌株液体发酵的最佳培养基配方:马铃薯淀粉4%、酵母粉0.100%、硫酸镁0.15%、磷酸氢二钾0.2%。[结论]供试菌株在优化培养基配方条件下,菌丝干重有显著提高,为平菇液体菌种的培养和规模化栽培提供了理论依据。     

一株耐碱性芘降解菌的筛选及特性研究

以长庆油田油井口附近的土壤为材料,芘为唯一碳源和能源的BH培养基中分离到一株高效芘降解菌株b2,经形态学观察和16SrDNA测定,将其鉴定为分枝杆菌属(Mycobacteriumsp.)。研究发现,在培养温度为37℃、转速为175r/min,培养起始pH 10,接种量为2.0%时菌体生长较快。最佳培养条件下,在芘质量浓度为250mg/L的BH培养基中,经菌株b2降解4d后质量浓度下降76%。说明培养条件对菌株的生长和芘降解速度有明显的影响。     

平菇菌株诱变处理及应用初探

为了探讨平菇菌株诱变处理与应用。在平菇培养中,以马铃薯葡萄糖琼脂培养基为基本培养基,设栽培袋培养料A、B、C和D 4个配方,利用紫外线(照射时间分别为为0.51、0和15 min)对平菇菌丝体进行诱变处理,筛选高产优良菌株。利用紫外线对平菇菌丝体进行诱变处理筛选出了高产优良菌株,其菌丝生长表现为生长速度快、菌丝洁白、健壮等特点。与对照(固体棉籽皮培养基)相比,该处理原种和栽培种的菌丝体可提前10~15 d长好,液体菌种比固体菌种可提前10~15 d长满菌袋,提前20~30 d出菇。不同的培养基配方,其产量存在差异,以配方A(以棉籽皮87%,麸皮或米糠10%为主要成分)产量最高,生物学效率达98.7。利用液体培养生产菌种,采用培养基配方A栽培平菇,具有栽培周期短、简化栽培程序,降低成本,提高平菇的品质、产量高和成品率高等优点。     

元蘑液体菌种的优化培养

[目的]筛选元蘑液体菌种培养基配方,优化液体菌种培养工艺。[方法]通过设置不同的液体培养基配方、不同的接种条件(包括不同菌龄、不同接种量)和不同的培养条件(包括不同转速、不同培养时间),以菌丝体生物量、菌丝球密度及菌丝球形态为指标进行元蘑液体菌种的筛选。[结果]液体培养元蘑菌种的最佳培养基配方为:200 g马铃薯、150 g稻草粉、10 g玉米粉、20 g葡萄糖、3 g蛋白胨、2 g酵母膏、维生素B_11片;最佳接种菌龄为5 d;最佳接种量为9%;最佳培养转速为160 r/min;最佳培养时间为7 d。[结论]元蘑液体菌种经过优化培养,菌丝体生物量、菌丝球密度及菌丝球形态都有很大提高。     

辽藁本内生细菌ZHAB63鉴定与拮抗菌筛选

采用组织块法,从健康辽藁本中共分离出64株内生细菌,经初筛和复筛,菌株ZHAB63对11种常见中药材病原菌拮抗率均在50.00%以上(P0.01),根据菌株形态特性、16SrDNA基因序列测定以及系统发育树初步鉴定发现,菌株ZHAB63为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens);采用L9(34)正交设计试验优化该菌株发酵培养基及发酵条件,确定液体发酵最适培养基为:蔗糖15.0 g·L-1,酵母粉20.0 g·L-1,蛋白胨20.0 g·L-1,硫酸镁5.0 g·L-1;最佳发酵条件:温度30℃,pH 6.5,转速180 r·min-1,培养时间48 h。研究表明,辽藁本中内生细菌资源丰富,以其研制新配方生物农药有待深入开发。     

发酵蔗渣产黄腐酸菌种的筛选及应用

为提高蔗渣发酵产黄腐酸的能力,从生物腐植酸样品中分离培养菌种,对分离获得的菌种进行较高温下降解纤维素能力的测定,初步筛选出生长良好和降解纤维素能力较强的菌株,鉴别其形态、并接种于蔗渣物料发酵试验进一步筛选,最后将优化筛选的菌株进行16sDNA鉴定,同时应用于工厂生产性装袋的中试发酵。结果表明腐植酸分离样品中芽孢杆菌占绝对优势,其中芽孢杆菌E菌株具有较高的转化蔗渣产黄腐酸的能力。该菌株经16sDNA鉴定为枯草芽孢杆菌。采用枯草芽孢菌株进行发酵蔗渣中试,获得黄腐酸含量为17.2%,较工厂对照组黄腐酸含量(14.3%)提高了20%。     

TCBS培养基筛选的虾池细菌分析

通过TCBS培养基分离筛选对虾养殖水体中的细菌,采用16S rDNA分子生物学方法和Biolog微生物自动分析系统进行鉴定分析。结果显示:以TCBS培养基分离筛选的60株菌中,采用16S rDNA分子生物学方法鉴定,只有SWG-27、SWG-28、SWG-29为弧菌属,占总鉴定细菌的5%,其他细菌大部分为芽孢杆菌属(Bacillus sp.)和大洋芽孢杆菌属(Oceanobacillus sp.),分别占总鉴定细菌的36.7%和43.3%;自60株细菌中随机挑选15株作Biolog微生物自动分析系统鉴定,弧菌属细菌也只占很小比例;60株细菌接种于6种不同品牌的TCBS培养基上均可很好地生长。结果表明,TCBS培养基能够培养养殖水体中的弧菌,但其他细菌也能在其上良好生长,利用TCBS培养基检测养殖水体弧菌数量的结果值得商榷。     

一株纤维素降解菌的鉴定

[目的]鉴定已筛选出的纤维素降解菌,选育性能优良的产纤维素酶菌株。[方法]在固体培养基中培养产纤维素酶菌株K7-2,观察其群体形态、个体形态,并从生理生化特性、分子生物学方面对其进行鉴定。[结果]K7-2菌落为白色,表面光滑、干燥致密,呈绒布状,边缘整齐,在培养基中呈辐射状生长,揭开培养皿可闻到土腥味。K7-2菌体为丝状,革兰氏染色阳性,插片培养可见分生孢子丝和分生孢子。在菌株K7-2群体形态、个体形态和生理生化特性鉴定的基础上,通过16sDNA测序鉴定,确定K7-2为梅久兰链霉菌(Streptomycesmediolani)。[结论]该研究为选育高产纤维素酶菌株提供了理论依据。     

胰酪胨大豆培养基和改良马丁培养基药品无菌检查效果的比对研究

目的：比较药品无菌检查用的胰酪胨大豆培养基(TSB)和改良马丁培养基(MM)对细菌和真菌的检测灵敏度和促生长能力。方法：选用3株细菌和3株霉菌试验菌株,分别采用中国药典无菌检查法规定的培养基适用性检查中半定量检测方法和以平板菌落计数法为基础计算试验菌株生长率的定量方法, 分别测试培养基对试验菌株的促生长能力和检测灵敏度。结果：6株试验菌株在不同生产厂家的受试TSB和MM培养基中,其生长管数和生长率的比较,经统计学分析,差异均无显著性(P＞0.05),灵敏度可达到＜0.1CFU/mL;不同生产厂家间两受试培养基对6株试验菌株的促生长能力和检测灵敏度差异也无显著性(P＞0.05)。结论： 在一定的接种和培养条件下,TSB培养基可替代MM培养基用于药品无菌检查中的需氧菌和真菌检测。