东北黑蜂（Apis mellifera ssp.）亲缘关系的分析

 【目的】从分子水平揭示东北黑蜂与欧洲黑蜂、意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜂、喀尔巴阡蜂、安拉托利亚蜂、高加索蜂以及非洲类型的西方蜜蜂的亲缘关系,为东北黑蜂分类地位的正确认识及其合理保护提供参考。【方法】对来自东北黑蜂国家级自然保护区内9个乡镇的东北黑蜂与上述西方蜜蜂的线粒体DNA（mtDNA）tRNAleu～COⅡ序列进行PCR扩增;同时取部分PCR产物进行DraⅠ酶切分析;并根据酶切类型对相应的PCR产物经纯化、克隆和测序后进行序列分析,并构建Neighbor-Joining(NJ)聚类图。【结果】东北黑蜂mtDNA tRNAleu～COⅡ序列长度为526 bp,P序列缺失,Q序列有5个位点出现碱基转换（4T?C、1A?G）,1个碱基颠换（1A?T）;只有一种DraⅠ酶切类型,其酶切片段长度分别为422、64、47和41 bp,同DNAMAN软件分析的酶切位点一致;其序列特征和酶切类型同西方蜜蜂线粒体C、O分支相似,而与A分支的非洲蜜蜂、M分支的欧洲黑蜂存在较大差异;根据NJ聚类图,东北黑蜂属于线粒体O分支。MtDNA tRNAleu～COⅡ的序列特征和DraⅠ酶切分析表明,东北黑蜂属于线粒体O分支,与同一分支的高加索蜂、安拉托利亚蜂亲缘关系最近,与C分支的意大利蜜蜂、卡尼鄂拉蜂、喀尔巴阡蜂亲缘关系次之,而与M分支的欧洲黑蜂和A分支的非洲蜜蜂亲缘关系较远。【结论】根据NJ聚类图,东北黑蜂处于安拉托利亚蜂和高加索蜂之间,东北黑蜂是否是这两个地理亚种的混合种群,或能否算一个新的地理亚种,还有待进一步的研究。     

西方蜜蜂(Apis mellifera)不同蜂种及其杂交组合采粉力研究

“浙农大 1号”意蜂 (A .m .ligusticaEa)分别与喀尼鄂拉蜂 (A .m .carnica)、卡尔巴阡蜂 (A .m .carpati ca)、高加索蜂 (A .m .caucasica)、乌克兰蜂 (A .m .acervorum)、东北黑蜂 (A .m .spp .)进行正反杂交组配。在山东玉米花期 ,考察这 6个西方蜜蜂蜂种及 10个正反杂交组合的 95个试验蜂群的蜂花粉生产性能 ,分析杂交一代的杂种优势。结果表明 ,K是 6个纯种中蜂花粉产量最高的蜂种 ,Ea位居第二 ,Ea×D是所有纯种和杂交组合中蜂花粉产量最高的蜂种 ,是培育蜂花粉高产组合的蜂种。杂交组合Ea×D和W×Ea的蜂花粉生产性能具有明显的杂种优势 ,其杂种优势率分别达到 49.5 %和 2 1.1%,其他 8个杂交组合表现为杂种劣势     

西方蜜蜂(Apis mellfera L.)主要经济性状的配合力与杂种优势分析

以2× 4不完全双列杂交设计,对蜜蜂6个亲本的4个经济性状(蜂蜜、王浆、花粉和蜂蜡)进行了配合力和杂种优势分析.结果表明(1)4个性状的-般配合力和特殊配合力方差均显著.说明基因加性效应和非加性效应都起作用,但其重要性不同;(2)特殊配合力方差均不显著大于平均方差.因此亲本评价以一般配合力为主.四个性状浙农大1号意蜂的一般配合力都高.是个优质亲本;而东北黑蜂和喀尼阿兰蜂的蜂蜜,卡尔巴阡蜂的蜂蜡,高加索蜂的花粉,乌克兰蜂的王浆一般配合力高.这五个亲本在提高蜜蜂单个经济性状产量时具有重要价值.(3)4个性状中亲平均优势均为正值,高亲平均优势都是负值.但也有一些超高亲组合.因此通过亲本的适当选配可获得强优势组合,以提高4种蜂产品的产量.     

西方蜜蜂(Apis mellefera L.)主要经济性状的配合力与杂种优势分析

以2×4不完全双列杂交设计，对蜜蜂6个亲本的4个经济性状（蜂蜜、王浆、花粉和蜂蜡）进行了配合力和杂种优势分析。结果表明：（1）4个性状的一般配合力和特殊配合力方差均显著，说明基因加性效应和非加性效应都起作用，但其重要性不同；（2）特殊配合力方差均不显著大于平均方差，因此亲本评价以一般配合力为主。四个性状浙农大1号意蜂的一般配合力都高，是个优质亲本；而东北黑蜂和喀尼阿兰蜂的蜂蜜，卡尔巴阡蜂的蜂蜡，高加索蜂的花粉，乌克兰蜂的王浆一般配合力高，这五个亲本在提高蜜蜂单个经济性状产量时具有重要价值。（3）4个性状中亲平均优势均为正值，高亲平均优势都是负值，但也有一些超高亲组合，因此通过亲本的适当选配可获得强优势组合，以提高4种蜂产品的产量。     

蜜蜂初级工程原种组配实验

 利用蜜蜂工程育种的理论、方法，将目前我国普遍饲养的西方蜜蜂：意大利蜂（Apis mellifera ligustica Spin.）、卡尼鄂拉蜂（Apis mellifera Carnica pollmann）、喀尔巴阡蜂（Apis mellifera Carpathian）等自然原种，进行了调查、整理；配制出“金星”和“金环”两个初级工程原种；解决了蜂种衰退和无目的自由混杂状态，使之繁殖力和生产能力均超过目前饲养的自然原种，并可以和当今国内推广的“卡·喀（阡）×意”三交种相比，均无显著差异。     

东方蜜蜂与西方蜜蜂酯酶同工酶的比较研究

酯酶（esterase）是一组多态性很高的同工酶，常用于昆虫种属鉴定和遗传变异研究。本试验采用薄层聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳（IEF-PAGE）技术，分析了浙农大Ⅰ号意蜂（A.m. lingustica）、东北黑蜂（A.m.ssp）和卡尼鄂拉蜂（A.m.carnica）等西方蜜蜂与中华蜜蜂（A.cerana cermama）酯酶同工酶及蜜蜂不同发育阶段酯酶同工酶的变化，以便为酯酶同工酶在蜜蜂遗传变异、种属鉴定及品种选育研究中的应用，提供基础资料。 　　1　材料与方法 　　1.1　材　料　浙农大Ⅰ号意蜂和中华蜜蜂来自浙江大学实验蜂场，东北黑蜂和卡尼鄂拉蜂来自吉林省蜜蜂研究所种蜂场。 　　1.2　方　法　每种蜂各取外勤蜂、内勤蜂和幼蜂20只，剪取头部，以1∶2（W/V）加入提取液, 在1.5 mL Eppendrof 管中，用玻棒研磨（冰浴中），离心（4 ℃，12 000 r/min,10 min）,取上清用于电泳。参照Nunamaher等的方法，用IEF-PAGE技术在LKB多相电泳系统中检测酯酶同工酶，酶活性染色液为0.1 mol/L pH6.5的磷酸缓冲液，含33.33%α-乙酸萘酯，33.33%β-乙酸萘酯，66.67%坚牢兰RR。……     

三个蜂种百花蜜的主要成分比较分析

【目的】比较分析新疆黑蜂、中华蜜蜂、喀尔巴阡蜂所酿造的百花蜜的主要成分及含量的差异。【方法】根据《中华人民共和国药典》中所记载的方法测定蜂蜜的糖度、酸度、淀粉和糊精、5-羟甲基糠醛含量、还原糖含量五项指标;采用硫酸苯酚法测定可溶性糖含量;采用Folin-Ciocucalteu比色法测定总酚酸含量;采用亚硝酸钠-硝酸铝法测定总黄酮含量;采用考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量;采用试管比色法测定淀粉酶活性。【结果】三种百花蜜的含糖量存在明显差异,新疆黑蜂蜂蜜的糖度、还原糖含量、可溶性糖含量、黄酮含量均高于其它两种蜂蜜。三种蜂蜜都有较高的酚酸含量。而蜂蜜中蛋白含量和淀粉酶活性则是喀尔巴阡蜂蜂蜜较高。【结论】不同蜂种酿制的蜂蜜主要成分存在一定差异。     

蜜蜂高产抗螨杂交种“HYR”和“JYR”的选育

    选取卡尼鄂拉蜂、高加索蜂和平湖意蜂为蜂种选育的主要素材,以闭锁集团繁育和人工授精技术为主,RAPD分析为辅,建立和保持3个纯系,在此基础上选育出"HYR"和"JYR"2个高产抗螨杂交蜂种.这2个杂交蜂种除抗螨能力强外,分别具有蜂蜜高产和蜂蜜、王浆双高产的生产性能.与本地意蜂相比,"HYR"和"JYR"蜂种的蜂蜜平均单产分别提高59.40%(P＜0.01)和32.27%(P＜0.01),"JYR"蜂种的王浆平均单产提高69.95%(P＜0.01);2个蜂种的秋季蜂螨寄生率分别为1.97%(P＜0.01)和2.19%(P＜0.01),均显著低于本地意蜂.     

中蜂与意蜂营养杂交对工蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ的影响

本研究以中华蜜蜂(Apis cerana cerana)和意大利蜜蜂(Apis mellifera ligustica)为实验材料,进行中华蜜蜂与意大利蜜蜂营养杂交,然后应用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(IEF-PAGE)技术检测亲本和营养杂交后代的工蜂苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型、基因型频率、等位基因频率、杂合度和纯合度,结果表明:经过营养杂交后,杂交后代工蜂的苹果酸脱氢酶基因型发生了变化,并且苹果酸脱氢酶条带位置朝着对方蜂种偏移。     

枸杞种质过氧化物酶同工酶分析与评价

对60份不同类型的枸杞种质材料进行过氧化物酶同工酶的检测分析,共检测到3个基因位点,12个等位基因,没有发现共同酶带,其中等位酶基因在杂交一代中分布频率最高,宁夏品种(系)次之,不同基因型枸杞最低。3个基因位点的平均杂合度为0.389,其中不同种的杂合度(0.553)明显高于宁夏品种(0.338)和杂交一代(0.276)的杂合度,说明不同基因型枸杞种质有着丰富的遗传多样性。相同双亲正反交,杂种一代酶谱均有差异,杂种一代过氧化物同工酶表现较强的母性遗传特征,这对枸杞杂交亲本的选择具有重要意义。     

咽下腺小囊数及其在意蜂品种鉴别中的应用

通过对西方蜜蜂意大利亚种（意蜂，ＡｐｉｓｍｅｌｌｉｆｅｒａｌｉｇｕｓｔｉｃａＳｐｉｎ）下王浆高产的浙农大１号意蜂品种（Ｅ＿ａ）和王浆低产的本地意蜂品种（本意，Ｅ＿ｂ）工蜂咽下腺小囊数的解剖学比较，寻求用咽下腺小囊数多少作为意蜂的王浆高产品种和低产品种鉴别指标的可能性。结果表明，每条咽下腺的小囊平均数Ｅ＿ａ比Ｅ＿ｂ高，差异极显著。经生产测定证实，蜂群Ｅ＿ａ的王浆产量相应比Ｅ＿ｂ高，差异显著，因此，咽下腺小囊数可作为意蜂下Ｅ＿ａ和Ｅ＿ｂ品种鉴别的重要依据之一，它们的指标是：Ｅ＿ａ为（６５６±６２）个，Ｅ＿ｂ为（５６２±６５）个。亚种下不同品种和品种内不同蜂群间咽下腺小囊数差异的解剖学比较，可作为选育王浆高产新品种的新手段。     

不同基因型陆地棉异交亲合力及杂交铃主要性状分析

研究了人工授粉条件下6个遗传背景差异较大、纯合度高的陆地棉亲本的异交亲合力及杂交铃主要性状差异。结果表明，不同基因型间的异交亲和力差异很大，杂交成铃率在41．4％～83．8％之间，平均杂交种产量1225．5～2257．5kg／hm^2；杂交铃与其母本自交铃相比．铃重降低幅度1．61％～20．75％；衣分降低7．14％～10．62％；籽指提高2．86％～8．33％。指出棉花杂交种筛选应在确保杂种优势的前提下，进一步加强亲本的异交亲和力及杂交铃主要性状选择，最大限度提高杂交制种产量和质量，降低制种成本。     

不同基因型陆地棉异交亲合力及杂交铃主要性状分析

研究了人工授粉条件下 6个遗传背景差异较大、纯合度高的陆地棉亲本的异交亲合力及杂交铃主要性状差异。结果表明 ,不同基因型间的异交亲和力差异很大 ,杂交成铃率在41 4%～ 83 8%之间 ,平均杂交种产量 1 2 2 5 5～ 2 2 5 7 5kg/hm2 ;杂交铃与其母本自交铃相比 ,铃重降低幅度 1 61 %～ 2 0 75 % ;衣分降低 7 1 4%～ 1 0 62 % ;籽指提高 2 86%～8 33%。指出棉花杂交种筛选应在确保杂种优势的前提下 ,进一步加强亲本的异交亲和力及杂交铃主要性状选择 ,最大限度提高杂交制种产量和质量 ,降低制种成本。     

应用蜜蜂营养杂交技术培育抗螨蜂种

 【目的】大蜂螨是中国饲养的西方蜜蜂最重要病虫害之一,多年来药物防治蜂螨,一方面蜜蜂对药物产生了很强的抗药性,另一方面治螨药物在一定程度上会污染蜂产品。本研究通过蜜蜂营养杂交,探讨培育抗螨蜂种的可行性。【方法】采用中华蜜蜂的蜂王浆饲喂意大利蜜蜂工蜂小幼虫,然后测定营养杂交后代工蜂形态指标、苹果酸脱氢酶Ⅱ的基因型频率和基因频率、蜂群遗传相似系数以及抗螨力。【结果】营养杂交子后代工蜂的吻长、右前翅面积、腹部第3+4背板总长、第4背板突间距、第6腹节面积、蜡镜面积6个指标与亲本工蜂之间存在显著差异,但肘脉指数、跗节指数和翅钩数与亲本差异不显著;营养杂交子后代工蜂的苹果酸脱氢酶Ⅱ基因型频率和基因频率存在一定的变异;营养杂交子后代之间遗传相似系数明显高于亲本意大利蜜蜂;营养杂交子后代的工蜂抗螨力显著高于亲本意大利蜜蜂。【结论】通过蜜蜂营养杂交,可以改变营养杂交后代工蜂形态、生理生化、分子遗传相似性及抗螨力等特性。蜜蜂营养杂交可成为蜜蜂育种一条新途径。     

3个绵羊群体BMPR-IB基因多态性与产羔数的相关分析

[目的]为解决多胎肉用绵羊杂交育种技术的关键问题提供依据。[方法]以BMPR-IB基因作为候选基因,采用PCR-RFLP方法检测其在萨福克羊、小尾寒羊及萨寒F1代杂交羊中的多态性分布,分析其与产羔数的相关性。[结果]在萨福克绵羊中只有1种基因型野生型(++);在小尾寒羊中检测到3种基因型纯合突变型(BB)、杂合突变型(B+)和野生型(++),基因型频率分别为0.14、0.80和0.06。在萨寒杂交绵羊中,检测到2种基因型(B+和++),基因型频率分别为0.99和0.01。3种绵羊的产羔数差异极显著,萨寒杂交羊的多羔率和平均产羔率均明显高于纯种萨福克羊。[结论]BMPR-IB基因的遗传方式符合孟德尔遗传规律。利用小尾寒羊对萨福克羊的繁殖性能进行杂交改良是有效可行的。     

杜洛克、长白和大约克夏纯种猪微卫星多态性分析

利用8个微卫星标记对杜洛克、长白、大约克夏、长大、杜长大5个种群的等位基因的频率、基因杂合度、平均杂合度、多态信息含量,F-统计量、迁移率以及3个纯种之间的遗传距离进行分析.研究结果表明:各群体的平均基因杂合度存在一定差异,杜长大猪群的平均杂合度高于长大猪群,高于3个纯种群的平均杂合度;3个纯种猪群中,杜洛克平均基因杂合度最低,为0.648 8,大约克夏平均基因杂合度最高,为0.723 3;平均多态信息含量也出现了相同的结果.聚类结果显示:长白、大约克夏间的距离最大,长白、杜洛克间的距离最小,表明长白与大约克夏交配后与杜洛克杂交产生的杂种优势最大,这与实际的杂交组合一致, 遗传距离可以预测杂种优势.Fst衡量等位基因频率群体间方差,显示群体总变异的约有3.9%～11.4%来自种群间,而剩余的88.6%～96.1%则来自种群内, Fst可以作为选育程度的一个指标.     

2个绵羊群体BMPR-IB基因多态性与绵羊产羔数的关系

旨在探讨BMPR-IB基因在不同绵羊群体中的遗传变异及其与产羔数的关系,利用RFLP技术分析杜泊及滩寒杂交羊群体中BMPR-IB的基因型和基因频率,以及不同基因型对母羊产羔数的影响。结果显示:杜泊羊群体均为野生型,未检测到突变纯合或杂合基因型个体。滩寒杂交群体中突变纯合子(BB型)、杂合子(B+型)和野生型(++型)个体数分别为13、48和120。在滩寒杂交羊群体中,BB、B+及++基因型母羊的多羔率分别为63.64%、47.06%和32.08%;BB型经产个体平均产羔数比杂合型(B+)及野生型(++)个体产羔数分别高出0.5和0.59,而杂合子母羊产羔数高于野生型个体,但差异不显著。表明BMPR-IB基因Fec B突变位点对滩寒杂交群体产羔数有显著影响,因此可通过杂交手段提高后代群体Fec~B基因频率来增加产羔数,但BMPR-IB基因是否为调控杜泊羊产羔数的主效基因有待进一步探讨。     

应用高分辨率熔解曲线技术分析水稻分子标记基因型

 【目的】验证高分辨熔解曲线（high-resolution melting curve analysis,HRM）技术在水稻分子标记分析中应用的可行性和可靠性,应用该技术对水稻重组自交系（RIL）群体及其亲本进行SSR、InDel和SNP标记基因型分析。【方法】以粳稻品种丽江新团黑谷（LTH）和籼稻品种三黄占2号（SHZ-2）及其衍生的RIL群体为材料,以纯合亲本LTH作为参比基因型,利用HRM技术分析一个G/A转换的SNP标记以及非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）难以分辨的一个SSR标记和一个InDel标记的基因型。【结果】通过加入适量的参比DNA,HRM能够分辨2个纯合亲本及其衍生的纯合体和杂合体RI系的分子标记基因型,并且以加入20%模板量的参比DNA对3种基因型的分辨最好。利用该方法对作图群体的部分RI系进行分子标记基因型分析,结果与变性PAGE的分析结果完全吻合。【结论】验证了HRM应用于水稻SSR、InDel以及SNP标记分析的可行性和可靠性。相对于凝胶电泳分析,HRM具有分辨率高、高效、快速、操作简单、安全等优点,是一种在水稻分子标记分析中很有应用前景的技术。     

田间试验条件下不同基因型水稻对Cd和Pb的吸收分配特征

准确阐明重金属污染土壤中不同基因型水稻品种生长和重金属摄收与积累特征是实现安全生产的保障.以浙江省主栽的11个单季杂交晚稻和常规晚稻为供试品种,在台州温岭Cd、Pb污染土壤上种植,研究了不同基因型水稻对Cd、Pb元素吸收积累的差异.结果表明,不同基因型水稻糙米Cd、Pb含量存在较大差异,其中秀水09、黄华占、秀优5号和绍糯9714糙米Cd含量未超标,钱优8704和黄华占糙米Pb含量未超标.Cd、Pb在不同器官间的分配存在差异,总体上Cd浓度表现为根＞茎＞叶、糙米,Pb浓度表现为根＞叶＞茎＞糙米.水稻不同亚种和杂交组合各器官对Cd、Pb积累存在差异,糙米和茎、根Cd含量与水稻类型关系密切,糙米Cd浓度的顺序为籼型杂交稻＞粳型杂交稻＞常规籼稻＞常规粳稻.除稻根外,其他器官Pb浓度与水稻类型无关.亲本不育系不同的杂交组合F1代的重金属积累存在差异,故可通过筛选重金属低积累的亲本,从遗传上加以改良,培育重金属摄收少、分配安全的杂交稻组合.     

太湖鹅生长激素基因多态性检测及其与体重关联分析

为寻找GH基因编码区存在突变位点及突变对太湖鹅10周龄体重关联性,试验在太湖鹅生长激素基因第2、3、4、5外显子上各设计1对引物,用SSCP方法寻找存在点突变,分析10周龄体重在不同基因型间差异。结果表明,在第2外显子中发现T39C、T74C突变,T74C突变导致氨基酸V25A处发生有义突变。在外显子4中发现T291C、G297A突变,均未引起氨基酸变化。不同基因型频率在太湖鹅群体中差异较大。太湖鹅群体平均纯合度为0.4913,杂合度为0.5087,多态信息含量为0.4108。10周龄太湖鹅体重在不同基因型间均无显著性差异,但外显子2上突变对体重影响在公母鹅中表现一致。GH基因在太湖鹅群体中遗传多样性较为丰富,初步探讨GH基因外显子突变对太湖鹅10周龄体重影响。