‘小白杏’诱导愈伤组织及不定芽体系的优化

为建立快速繁殖离体培养再生体系并为遗传转化奠定基础,本研究以‘小白杏’胚和叶片为材料,探讨了氯化汞和次氯酸钠消毒的方法和时间对种子和种胚的影响,2,4-D(0.5,1.0,1.5 mg/L)、ZT(0.5,1.0,1.5 mg/L)和TDZ(1.0,2.0,3.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’胚诱导愈伤组织再分化不定芽的作用,及2,4-D(0.5,1.0 mg/L)、IBA(0.5,1.0 mg/L)、NAA(0.5,1.0 mg/L)浓度配比对‘小白杏’叶片诱导愈伤组织再分化不定芽的作用。结果表明:使用10%的次氯酸钠消毒10 min,种胚污染率和死亡率最低,分别为2.6%、0.7%,存活率最高,为96.7%;在3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D处理下,胚诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为98%、96%;在3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0mg/L IBA处理下,叶片诱导愈伤组织形成率和不定芽诱导率最高,分别为96%、93%。综合来看,胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽的诱导率优于叶片,种子和种胚消毒的最佳方案是10%的次氯酸钠消毒10 min;胚诱导愈伤组织再分化形成不定芽最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L 2,4-D;叶片诱导愈伤组织再分化形成不定芽的最佳配方是3/4MS+2.0 mg/L AgNO_3+1.0 mg/L ZT+2.0 mg/L TDZ+1.0 mg/L IBA。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0mg/L6-BA、0.1～0.2mg/LNAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA3.0mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS＋3.0mg/L6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS＋4.0mg/L6-BA＋0.2mg/LNAA。     

龙选蕉组培快繁技术

【目的】探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系。【方法】以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0～6.0 mg/L 6-BA、0.1～0.2 mg/L NAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养。【结果】相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象。在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA 3.0 mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常。【结论】次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS+ 4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA。     

龙选蕉组培快繁技术

[目的]探讨不同灭菌剂对外植体的灭菌效果及不同激素浓度和组合对不定芽诱导和增殖的影响,建立龙选蕉的高频再生体系.[方法]以龙选蕉吸芽为外植体,以升汞和0.2%次氯酸钠对外植体灭菌;采用0~6.0 mg/L 6-BA、0.1~0.2 mg/L NAA激素组合对不定芽进行诱导或增殖培养.[结果]相对于升汞,次氯酸钠对龙选蕉外植体灭菌的效果更理想,灭菌率达到90.47%,且外植体生长良好,无中毒现象.在不定芽诱导培养基中,随着6-BA浓度的升高,不定芽萌发率呈先增加后降低趋势,其中以添加6-BA3.0mg/L的诱导效果最理想,萌发率为66.67%;随着6-BA和NAA浓度的提高,不定芽的增殖系数也随之增加,其中以4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA为最佳组合,不定芽增殖效果最理想,增殖系数为4.05,芽苗粗壮,叶片颜色正常.[结论]次氯酸钠对龙选蕉吸芽的消毒效果优于升汞,操作简便,易于获得无菌外植体并利于不定芽生长;不定芽诱导最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA;不定芽增殖最佳培养基为MS+ 4.0 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA.     

TDZ在花生离体扩繁中的应用研究

利用TDz(thidiazuron)处理不同基因型花生,研究其在花生丛生芽诱导与扩繁中的作用.结果表明,中花8号在种子萌发阶段用6 mg/L TDZ、诱导和扩繁阶段用4 mg/L TDZ,丛生芽扩繁效牢最高.而保21在种子萌发阶段用2 mg/L TDZ、诱导和扩繁阶段用4 mg/L TDZ,丛生芽扩繁效率最高.不同基因型差异明显,四粒红的丛生芽扩繁效率最高,而中花8号明显低于其他品种.另将四粒红丛生芽块进行了农杆菌侵染转化,CUS的阳性率为15.87%.     

续随子愈伤组织诱导与不定芽分化探讨

为建立续随子的高频再生体系,从续随子外植体除菌方案与外植体选择、愈伤组织诱导以及不定芽分化等多方面进行了探索.结果显示,70%乙醇处理15s+无菌水冲洗3次+4%次氯酸钠处理5 min+无菌水冲洗5次为最佳外植体灭菌方案;根、茎和叶中,仅有叶片能诱导出愈伤组织;虽然多个激素组合可以诱导续随子叶片产生愈伤组织,但在MS培养基,TDZ 0.2 mg/L或0.4 mg/L以及TDZ/NAA(0.5/0.1 mg/L)组合,光下培养时,愈伤组织诱导率达到100%,且出愈时间短、愈伤生长速度快;新鲜愈伤组织只有在MS培养基,TDZ 0.4 mg/L或TDZ/NAA (0.5/0.1 mg/L)才可分化出单个不定芽(无丛生芽),且分化率也仅为25%和15%.     

新疆两种纤维亚麻胚轴段高频萌芽诱导

【目的】通过建立新疆主栽的两个纤维亚麻品种(范妮和天鑫3号)高频率不定芽离体再生体系,为进一步筛选其体细胞耐盐突变体奠定基础。【方法】以不同消毒剂处理种子,以下胚轴段为外植体,运用不同植物生长调节剂组合诱导胚轴段再生不定芽。【结果】两种种子在10%的H_2O_2中处理10 min灭菌效果最好;范妮不定芽诱导最适宜培养基为:MS+BA 0.45 mg/L+IAA 0.3 mg~/L,不定芽诱导率达180%;天鑫3号不定芽诱导最适培养基为:MS+BA 0.6 mg/L+NAA 0.3 mg/L,不定芽的诱导率达到98%。【结论】不同的亚麻品种在下胚轴萌芽过程中对植物生长调节剂的配比和浓度的要求也不尽相同,探明了范妮和天鑫3号高频不定芽发生的最佳植物生长调节剂的组合和浓度。     

江蔬1号番茄子叶离体再生体系的建立

以番茄品种江蔬1号和金陵之星101F1为试材,MS为基本培养基,研究70%酒精和20%次氯酸钠溶液不同时间处理对种子表面的消毒效果和对种子萌发的影响,并研究不同基因型、不同植物生长调节物质及浓度对番茄子叶再生的影响。结果表明,70%酒精处理50 s后,再用20%次氯酸钠溶液浸泡30 min,江蔬1号和金陵之星101F1种子萌芽率分别为98%、63.2%,而污染率分别为0、2.2%;不同的番茄品种在相同的培养基上愈伤组织诱导率和不定芽的分化率存在着显著差异,江蔬1号优于金陵之星101F1。适于江蔬1号子叶再生的培养基为MS ZT0.5 mg/L IAA0.3 mg/L,再生频率可达49.14%;适宜的生根培养基为MS NAA 0.5 mg/L,生根率为100%。     

长白落叶松愈伤组织诱导与不定芽分化

以长白落叶松成熟胚作为外植体进行消毒和不定芽诱导。研究结果表明:将去皮种子用流水冲洗3d,用70%酒精消毒1min,转入1%的次氯酸钠消毒50min后,再将剥出的胚放入0.5%的次氯酸钠中浸泡2s为最佳消毒方法;在光照条件下(约1600lx),BM培养基中填加1.0mg/LBA,愈伤组织与不定芽的诱导效果最好,愈伤组织诱导率达到100%,不定芽分化率为73.8%;在BM培养基中加入1%活性碳对不定芽有伸长作用。     

花生幼叶丛生芽高效诱导的制约因素研究

以花生品种豫花14号4 d苗龄的幼叶为外植体,对花生幼叶高频不定芽诱导进行研究。在MS培养基的基础上,添加了芽诱导常用的细胞分裂素6-BA、生长素NAA及两种不太常用的脱落酸(ABA)、噻重氮苯基脲(TDZ),结果表明,单独使用6-BA,NAA或TDZ,不定芽诱导率较低;采用较高浓度的6-BA(8 mg/L)、较低浓度的NAA(1 mg/L),添加低浓度的ABA(1 mg/L),不定芽诱导率可达80%以上。最佳诱导培养基为MS+6-BA 8 mg/L+NAA 1 mg/L+ABA 1 mg/L+AgNO32 mg/L,从整体上观察,最佳继代培养基为MS+6-BA 5 mg/L+NAA 2 mg/L+AgNO32 mg/L。同时研究发现,花生幼叶近叶柄基部切口处不定芽诱导率较高,是较理想的不定芽诱导部位。     

大花金挖耳无菌外植体的获得及愈伤组织诱导的初步研究

以大花金挖耳(C arp esium m acrocepha lum F ranch.et Sav)种子为材料,进行了种子消毒和愈伤组织诱导及继代的初步研究。结果表明,对大花金挖耳种子进行消毒的最佳条件为,以体积分数70%的乙醇消毒5 m in后,再用50%的N aC lO3处理30 m in。在大花金挖耳无菌苗的根形成愈伤组织的正交试验中,基本培养基对愈伤组织诱导率的影响最大,NAA次之,6-BA影响最小,对愈伤组织诱导的较优组合是B5+NAA 3.0 m g/L+6-BA 0.2m g/L,诱导率为100%;在优化诱导愈伤组织的激素浓度配比试验中,B5+NAA 2.0~3.0 m g/L+6-BA 0.2~0.4m g/L对大花金挖耳愈伤组织的诱导率为100%,且产生的愈伤组织多为淡黄色、质地疏松、生长势极好、褐化时间长,适合于大花金挖耳愈伤组织的诱导。在培养基中分别添加500 m g/L VC和10 000 m g/L PVP能抑制大花金挖耳愈伤组织的褐变,且有利于愈伤组织的继代。     

樱桃番茄的组织培养与离体快繁技术研究

以樱桃番茄(Lycopersicon esculuntumvar.Cerasiform e)的下胚轴、子叶为外植体,在附加不同质量浓度6-BA和NAA的1/2 MS培养基上进行培养。实验结果显示:消毒方法对种子发芽率的影响很大,以10%NaC lO消毒20 m in最为有效,且能够保证种子的最大发芽率。樱桃番茄下胚轴和子叶的最佳不定芽诱导培养基分别为1/2 MS 3.0 mg/L 6-BA 0.2 mg/L NAA和1/2 MS 2.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA。最佳增殖培养基为1/2 MS 2.0 mg/L 6-BA 0.1 mg/L NAA,其增殖系数为3.4。诱导生根培养基则以1/2 MS 0.1 mg/L NAA最好。     

蝴蝶兰无菌播种及快繁技术研究

以蝴蝶兰无菌种子为材料,对蝴蝶兰种子消毒和萌发、原球茎诱导、增殖和分化培养、芽生根培养基、壮苗培养基配方进行研究。结果表明,种子经次氯酸钠和洗衣粉消毒,有利于促进种子萌发和原球茎的形成;最适合种子萌发的培养基为MS＋香蕉泥100g/L＋马铃薯50g/L＋NAA 0.5mg/L;原球茎的形成及增殖培养以MS＋6-BA 2.0mg/L＋NAA0.1mg/L＋香蕉泥100g/L为佳,分化培养基为MS＋6-BA 0.1mg/L＋NAA 0.1mg/L＋香蕉泥80g/L＋蔗糖20g/L＋活性炭2.0g/L＋卡拉胶7.0g/L。小苗生根培养基为MS＋NAA 0.1mg/L＋香蕉泥100g/L＋蔗糖20g/L＋卡拉胶7.0g/L＋活性炭2.0g/L,生根率达98%以上;壮苗培养基为MS＋香蕉泥80g/L＋马铃薯汁50g/L＋蔗糖20g/L＋卡拉胶7.0g/L＋活性炭2.0g/L。经过适当驯化处理,将壮苗移栽到疏松的水草或苔藓基质中,注意温度、湿度及光照管理,成活率可达90%以上。     

蝴蝶兰组织培养与快速繁殖技术研究

以残败花梗为外植体进行组织培养,建立了蝴蝶兰的无菌繁殖体系,研究了培养基中不同种类植物生长调节物质及其浓度比例对休眠芽的萌发、丛生芽的诱导以及试管苗生根的影响,筛选出了最佳培养基组成;研究了活性炭、PVP、温度、暗培养对培养基褐化的影响。结果表明:在1/2 MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+10%香蕉汁+3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上休眠芽的诱导效果最好,诱导率可达87.5%;在1/2 MS+6-BA 6.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+10%香蕉汁+3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上丛生芽的诱导效果最好,增殖系数可达3.15;在1/2 MS+NAA 0.5 mg/L+活性炭1 000 mg/L+3%蔗糖+0.6%琼脂的培养基上生根效果最好,生根率可达95%,平均每株生根3.11条左右,炼苗后移植成活率可达90%。     

赤霉素、光照及基因型对花生体细胞胚诱导和植株再生的影响

【目的】完善花生离体再生繁殖体系,为花生的遗传转化提供技术支持。【方法】以桂花系列花生品种为材料,以胚小叶为外植体,MS＋10mg/L2,4-D为体细胞胚诱导基本培养基,MS＋3mg/L6-BA＋0.8mg/LNAA＋（0～15mg/L）GA3为苗诱导基本培养基,研究光照、赤霉素和基因型对花生体细胞胚诱导和植株再生的影响。【结果】在光暗比14∶10条件下,花生体细胞胚诱导率明显高于全黑暗培养,体细胞胚诱导率增加7.5～37.5个百分点。在不同花生品种中,桂花26体细胞胚诱导率最高,达62.8%,桂花833最低,为21.7%。在成苗培养基中添加5～15mg/LGA3利于提高体细胞胚的成苗率。桂花26和桂花771在5mg/LGA3处理下成苗率最高,分别为42.8%和35.3%;桂花836、桂花1026、桂花833在15mg/LGA3作用下成苗率最高,分别为38.7%、33.3%、26.4%。所有品种与GA3组合中,以桂花26与5mg/LGA3组合成苗率最高,其次是桂花836与15mg/LGA3组合。【结论】适宜的光照条件有利于花生体细胞胚的发生;成苗培养基中添加GA3利于促进体细胞胚诱导成苗;桂花26和桂花836是体细胞胚诱导植株再生较理想的材料。     

赤霉素、光照及基因型对花生体细胞胚诱导

【目的】完善花生离体再生繁殖体系,为花生的遗传转化提供技术支持。【方法】以桂花系列花生品种为材料,以胚小叶为外植体,MS+10 mg/L 2,4-D为体细胞胚诱导基本培养基,MS+3 mg/L 6-BA+0.8 mg/L NAA+（0~15 mg/L） GA3为苗诱导基本培养基,研究光照、赤霉素和基因型对花生体细胞胚诱导和植株再生的影响。【结果】在光暗比14∶10 条件下,花生体细胞胚诱导率明显高于全黑暗培养,体细胞胚诱导率增加7.5~37.5个百分点。在不同花生品种中,桂花26体细胞胚诱导率最高,达62.8%,桂花833最低,为21.7%。在成苗培养基中添加5~15 mg/LGA3利于提高体细胞胚的成苗率。桂花26和桂花771在5 mg/LGA3处理下成苗率最高,分别为42.8%和35.3%;桂花836、桂花1026、桂花833在15 mg/L GA3作用下成苗率最高,分别为38.7%、33.3%、26.4%。所有品种与GA3组合中,以桂花26与5 mg/L GA3组合成苗率最高,其次是桂花836与15 mg/L GA3组合。【结论】适宜的光照条件有利于花生体细胞胚的发生;成苗培养基中添加GA3利于促进体细胞胚诱导成苗;桂花26和桂花836是体细胞胚诱导植株再生较理想的材料。     

不同培养基对月见草种子发芽和愈伤组织诱导的影响

[目的]研究不同浓度NAA和6-BA组合的MS培养基对月见草种子发芽和愈伤组织诱导的影响。[方法]通过组织培养,研究了NAA和6-BA16种组合的MS培养基中的月见草种子发芽率和愈伤组织诱导率。[结果]在NAA和6-BA的16种组合中,MS＋10mg/L6-BA培养基中的种子发芽率最高（90%）,其次是MS＋10mg/L6-BA＋2mg/LNAA（87%）,再次是MS＋2mg/L6-BA（83%）和MS＋10mg/L6-BA＋5mg/LNAA（83%）;MS＋2mg/L6-BA＋5mg/LNAA培养基中的愈伤组织诱导率最高（88.89%）,其次是MS＋5mg/L6-BA＋10mg/LNAA（87.50%）、MS＋2mg/L6-BA＋2mg/LNAA（85.71%）和MS＋2mg/L6-BA＋10mg/LNAA（83.33%）;MS＋10mg/LNAA和MS＋5mg/LNAA培养基中有不定芽和不定根产生。[结论]该研究为提高月见草种子发芽率和愈伤组织诱导率提供了技术指导。     

费乌瑞它马铃薯脱毒技术研究

[目的]解决费乌瑞它马铃薯种薯退化问题。[方法]利用植物茎尖脱毒培养技术对费乌瑞它马铃薯进行脱毒。[结果]芽外植体灭菌方式以5%NaClO_3 min+0.1%HgCl_2灭菌7 min+70%乙醇0.5 min组合效果最好;芽外植体消毒灭菌后在MS基本培养基中培养效果最好;6-BA、NAA对芽外植体的诱导和分化有促进作用,最佳诱导培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L,此时芽分化成苗率最高。[结论]该研究可为费乌瑞它马铃薯种薯生产提供理论依据。     

青刺果促腋芽分枝快繁及生根诱导

研究青刺果的快繁技术。通过腋芽丛生方式对青刺果组织培养中种子的灭菌,腋芽丛生,壮苗培养,生根诱导等进行了研究,得出适合青刺果离体培养的培养体系。培养基MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L的激素搭配较适合青刺果的腋芽诱导,平均每个外植体可得到6~10个丛生芽。培养基MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L明显促进茎的增粗和叶片的扩展。适宜的生根培养基为改良的1/2MS+IBA 1.0 mg/L,生根率可达85%。生根苗经炼苗处理后移栽到蛭石∶营养土(1∶1)的花盆中,成活率达80%以上。青刺果带腋芽的茎段丛生增殖效果好。在培养基中添加不同种浓度的各种生长素对再生芽进行培养之后生根效果较好,移栽成活率也较高。     

能源林树种乌桕茎段离体培养与快速繁殖

乌桕是一种经济价值较高的木本油料树种,其种子中的油脂可用于食用油源、工业油源和动力油源,是一种可再生能源培养的优良树种.对乌桕茎段进行离体培养和快速繁殖研究.在初代培养中,先用70%的酒精对带芽茎段消毒30s,再用0.1%升汞灭菌10min,污染率可降到26.5%.在最佳培养基WPM+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L中进行芽诱导,30d后的诱导率可达62.9%.在MS+6-BA 1.0mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L上进行继代增殖培养,增殖效果最好,增值率为81.2%,增殖倍数为3.2倍.将健壮的无根单芽接种于1/2 MS+IBA 0.5mg/L上进行生根诱导,生根率可达93.3%.