观光木基因组DNA提取方法的研究

观光木(Tsoongiodendron odorum Chun)植物体内酚类物质和蛋白质含量较高,影响了基因组DNA提取的产量。采用改良CTAB法对观光木基因组DNA进行提取,经过紫外吸收、琼脂糖凝胶电泳、ISSR标记和双酶切检测,结果表明,改良CTAB法提取的基因组DNA吸光值OD260/OD280为1.80～1.90,DNA无降解现象和杂质污染;ISSR-PCR扩增的条带多而且清晰;基因组DNA双酶切彻底。说明此方法提取的DNA质量较高,符合ISSR和AFLP标记对基因组DNA质量的要求。     

鸡基因组DNA不同提取方法的比较研究

实验用优化煮沸法提取鸡血液基因组DNA,经核酸蛋白定量仪检测,DNA的OD260/OD280达1.77±0.06,证明所提DNA质量较好,用于PCR扩增,可以得到满意的扩增效果。与酚-氯仿法相比,优化煮沸法避免了用氯仿、酚等剧毒试剂,且节约了时间和成本,是一种较好的提取基因组DNA的方法。     

不同诱变方法提高绿色木霉产纤维素酶的研究

该文阐述了紫外、硫酸二乙酯和亚硝基胍三种诱变方法对发菌株绿色木霉TV-96进行诱变以提高其产酶的能力.确定了紫外、硫酸二乙酯和亚硝基胍的最佳诱变时间分别为:120秒、35分钟和2.5分钟;得到了31株菌株的HC值比出发菌株大,通过复筛,发现31株菌株中,有22株的产酶能力比出发菌株有提高,且突变菌株NTG8的产酶能力最高值为4 37 μgG/ml·min,是出发菌株的2.03倍,并具有较好的遗传稳定性.     

一种改进的致病疫霉基因组DNA提取方法

采用改良的CTAB法对富含多糖的致病疫霉基因组DNA进行提取。所得到的DNA样品经紫外分光光度计和琼脂糖凝胶电泳检测,结果表明：改良的CTAB法能够有效去除多糖杂质的干扰,提取的DNA纯度高,质量好,能满足进一步分析的要求。     

鱼糜制品中基因组DNA提取方法的比较

将分别采用普通酚-氯仿抽提法和试剂盒(柱吸附法)提取DNA的两种方法加以比较,以确定最适提取鱼糜制品DNA的方法.将鱼肉和鱼糜制品作为原料,用两种方法提取基因组DNA,利用分光光度计测定其A260与A280的吸光值,计算比率估计核酸的纯度,并利用琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段在凝胶中的位置;并用线粒体16S rRNA基因PCR扩增产物鉴定所提取的基因组DNA.     

生豆浆基因组DNA不同提取方法的比较研究

[目的]探讨适宜生豆浆的基因组DNA提取方法。[方法]以市售豆浆为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH和异硫氰酸胍法以及它们的改良方法提取基因组DNA,并比较了以上方法的提取效果。[结果]除异丙醇沉淀法外,其他方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,生豆浆基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进高盐低pH法、高盐低pH法、改进CTAB法、改进异丙醇沉淀法、异硫氰酸胍法和改进热解法。[结论]这几种生豆粉基因组DNA提取方法均具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。     

生豆浆基因组DNA不同提取方法的比较研究

[目的]探讨适宜生豆浆的DNA提取方法。[方法]以市售豆浆为材料,分别采用热解法、异丙醇沉淀法、CTAB法、SDS法、高盐低pH和异硫氰酸胍法以及它们的改良方法提取基因组DNA,并比较了以上方法的提取效果。[结果]除异丙醇沉淀法外,其他方法提取的基因组DNA均可满足PCR检测要求。同时,综合考虑基因组DNA的纯度和浓度,生豆浆基因组DNA提取方法的优劣依次为：改进高盐低pH法、高盐低pH法、改进CTAB法、改进异丙醇沉淀法、异硫氰酸胍法和改进热解法。[结论]这几种豆粉基因组DNA提取方法均具有操作简单、耗时短、利于快速检测的优点。     

稻飞虱基因组DNA提取方法的比较

 以褐飞虱（Nilaparvata lugens Stal）为材料,分别采用SDS法,CTAB法,冰KAc法和饱和NaCl法提取褐飞虱的基因组DNA。通过电泳、紫外光谱分析和ISSR-PCR扩增等检测手段,比较分析了DNA数量与质量。结果表明： CTAB法和SDS法提取的DNA质量明显优于冰KAc法和饱和NaCl法,适于PCR扩增。并且SDS法提取的DNA经过PCR扩增后得到较多的多态性位点。因此,SDS法是实验室提取稻飞虱基因组有效,经济实用的方法。     

枳壳基因组DNA提取方法的比较研究

以枳壳(酸橙)叶片为试验材料,采用改良CTAB法、CTAB-硅珠法、SDS法、高盐低pH法和周世良法5种方法提取枳壳基因组DNA,并通过紫外分光光度计、琼脂糖凝胶电泳及SSR-PCR扩增3种检测方法比较DNA的提取效果,以期找到枳壳DNA的最佳提取方法.结果表明,5种方法中SDS法提取的DNA浓度最高(平均为900ng/μl),纯度最好(OD260/OD280平均值为1.90),且以SDS法提取的DNA为模板进行SSR-PCR扩增检测,目的条带清晰、亮度均一、稳定性和重复性好.因此,SDS法是枳壳DNA最佳提取方法,可用于分子检测试验.     

天牛基因组DNA的提取方法

通过试验探索出3种可以快速、简便地从天牛干标本、液浸标本和新鲜标本中提取DNA模板的方法。对所获得的基因组扩增分析表明,经过PCR之后的DNA能呈现明显的多态性,同种天牛用同一引物扩增幼虫和成虫所获得的结果相同,可以认为,RAPD技术可以应用于天牛成虫干标本及幼虫浸渍标本的鉴定及系统发育研究中,也证明了这3种方法用于提取不同保存时间、不同种天牛基因组的DNA是切实可行的。     

绿色木霉产纤维素酶的条件研究

[目的]优化绿色木霉产纤维素酶的条件,为其实际应用提供依据。[方法]采用液体发酵方法对绿色木霉产纤维素酶的条件进行研究,分别考察发酵时间、氮源、接种量和pH值对纤维素酶活力的影响。[结果]绿色木霉产不同酶组分的分泌高峰并不一致,FPA酶活在发酵2d后达到最高值,Cx酶活在发酵3d后达到最高值。发酵培养基以蛋白胨为唯一氮源时,纤维素酶活力最高。发酵培养的最佳接种量为5%,最适初始pH值为4.5。[结论]不同培养条件对绿色木霉产纤维素酶的活力影响各异。     

绿色木霉固态发酵产纤维素酶条件研究

[目的]为了优化绿色木霉固态发酵产纤维素酶的条件。[方法]采用固态发酵方法对绿色木霉产纤维素酶的条件进行了研究,分别考察培养时间、培养温度、接种量、含水量和麸皮含量对纤维素酶活力的影响。[结果]不同因素对固态发酵条件下纤维素酶活的影响有明显的变化趋势。通过正交试验,得出绿色木霉固态产酶发酵的最优条件是培养温度30℃,培养时间5 d,接种量5%,含水量250%。[结论]该研究为绿色木霉对秸秆的转化应用提供了理论依据。     

绿木霉ZBS6黏粒基因组文库的构建及质量鉴定

为开展绿木霉ZBS6(Trichoderma viride ZBS6)拮抗基因筛选及克隆工作,建立了高质量基因组DNA的提取方法,并采用SuperCos1载体构建了绿木霉ZBS6黏粒基因组文库。试验中共获得3.9×104个黏粒克隆,平均插入片段大小约为33kb,文库滴度约为4.2×108 cfu/mL。理论上,从该文库中筛选到任一DNA序列的精确概率可高达99.9%。     

Effect of Trichoderma viride on activities of polygalacturonase of Rhizoctonia

The pectin is a backbone of the plant cell wall, its network structure will systemicly resolve when the plant cell splits up and forms. The pectinase produced by Rhizoctonia mainly acts on the pectin of cell wall, and causes the maceration of tissue and the death of protoplast. Polygalacturonase (PG) can decompose the galacturonic acid of disease tissue. The research defined the PG activities of extracellular metabolite of the different virulence Rhizoctonia isolates, and testifid the e…     

绿色木霉降解稻草秸杆产葡萄糖工艺优化研究

[目的]采用响应曲面法对绿色木霉（Trichodermaviride）降解稻草秸杆产葡萄糖的工艺进行优化研究。[方法]首先通过Plackett-Burman试验从7个发酵参数中筛选出影响葡萄糖产量的3个主要因素,即发酵时间、pH值和料水比。然后利用Box-Behnken试验设计对此3个因素的最佳水平和交互作用进行研究,通过对试验结果的响应面分析得出降解秸秆产葡萄糖的最佳发酵条件。[结果]绿色木霉发酵降解秸秆产葡萄糖的最佳发酵条件为：发酵时间2d,pH值为4.5,料水比2.5%,在此条件下,葡萄糖产量可达191.70mg/g。与优化前相比,葡萄糖产量提高了137.58%。[结论]该研究提高了将稻草纤维素转化成葡萄糖的转化率,降低了生产成本,为后续发酵生产燃料乙醇打下了良好的基础。     

绿色木霉Tr9701对多种病原菌的抑制作用及其抑病机理

对筛选获得的绿色木霉菌株Tr9701（Tr／ehodemmviride）进行抑菌活性测定。结果表明,Tr9701对立枯病菌和灰霉病菌等多种病原菌具有较强抑菌活性。小区试验表明,Tr9701菌剂对黄瓜立枯病的防治效果在66．27％-73．46％间,对番茄灰霉病的防病效果在70：85％-80．06％间。并通过产几丁质酶活性等对其抗病机理进行了初探,结果表明绿色木霉菌Tr9701产生几丁质酶,且经诱导处理酶产量明显提高．其酶粗提液对立枯病菌、灰霉病菌有显著抑制作用。显微观察显示绿色木霉菌对立枯病菌具有较强的寄生能力。     

绿色木霉产孢条件的优化

通过测定不同条件下绿色木霉的产孢量,研究氮源、碳源、生物激活剂、培养温度和时间等因素对产孢量的影响。结果表明:当绿色木霉的培养基中氮源、碳源分别为3‰的硝酸钠和1%的蔗糖时,生物激活剂的添加量为2‰,在30℃环境中培养4 d时,其产孢量较为理想。     

绿色木霉应用的研究进展

绿色木霉(Trichoderma viride)产生的高活性纤维素酶广泛应用于开发纤维素资源,本文主要综述了绿色木霉的降解功能、在生物防治中的应用及其它作用的研究进展。     

绿色木霉菌对丝核菌多聚半乳糖醛酸酶活性的影响

就丝核菌(Rhizoctonia)胞外多聚半乳糖醛酸酶(Polygalacturonase,PG)及绿色木霉菌(Trichoderma viride)对PG活性的影响进行了研究.结果表明,双核禾谷丝核菌(Rhizoctonia cerealis)AG-D融合群WK-47、WK-141、WK-160菌株,多核立枯丝核菌(R.solani)AG1-IA融合群YW-2菌株的胞外PG有较高的活性,不同核型的丝核菌胞外PG的活性差异显著;绿色木霉菌TCS-1菌株不同时间的发酵液对PG的活性具有明显的抑制作用.