FSH对牛腔前卵泡体外发育的影响

为探讨FSH对牛腔前卵泡体外发育的影响,在McCoy’s 5a基础无血清培养液中,分别加入浓度为0、1、10、50及100 ng/mL FSH,观察培养不同时间腔前卵泡的生长和存活情况。结果显示,在培养6 d后添加50及100 ng/mL FSH组腔前卵泡及其卵母细胞直径都较对照组及其他处理组有较大幅度的增长(P<0.01);添加10 ng/mL以上FSH组腔前卵泡在培养后期的体外存活率也有明显提高(P<0.05),表明适宜浓度的FSH对培养后期腔前卵泡体外发育具有显著的促进作用。     

小鼠腔前卵泡的分离采集和体外成熟研究

采用机械法和酶法结合机械法分离采集小鼠卵巢 ,每只小鼠可获腔前卵泡 5 3 2 5和 5 7 2 9枚 (P <0 0 5 )。成年小鼠腔前卵泡在体外培养 9d ,换用成熟培养液继续培养 2 4～ 2 8h后 ,3种不同培养系统中卵泡的成熟分裂率分别为 5 47%、3 85 %和 9 31%。表明EMEM +5 %FCS +0 2 3mmol/mL丙酮酸钠 +2 0 μg/mLFSH +0 0 5mmol/mL次黄嘌呤 +2 0 0IU/mL青 -链霉素培养系统可以使小鼠腔前卵泡卵母细胞在体外发育达到成熟     

添加物对小鼠腔前卵泡体外培养的影响

为探讨培养添加物对小鼠腔前卵泡生长成熟的影响,在培养液中分别加入不同体积分数的犊牛血清（ＦＣＳ）,牛卵泡液或添加促性腺激素,对小鼠腔前卵泡进行了培养。结果表明,５％以上犊牛血清明显提高腔前卵泡存活率,而１０％以上犊牛血清能明显促进卵泡的生长发育,２０％以上牛卵泡液可抑制卵母细胞的体外自发成熟分裂,并能促进腔前卵泡的生长发育,在不含犊牛血清的培养液中加入促卵泡素（ＦＳＨ）,促黄体素（ＬＨ）或ＦＳＨ＋     

家兔原始卵泡卵母细胞体外发育的培养体系研究

本研究根据家兔卵巢的发育特征初步探讨了家兔卵巢卵母细胞体外发育的培养体系。采集新生或30日龄家兔卵巢在不同培养液中培养,并分析家兔卵母细胞的体外发生与成熟情况与体内正常发育的兔卵巢卵母细胞之间的差异,来筛选和优化家兔卵巢卵母细胞的体外培养体系。本试验从高糖DMEM、FSH浓度、BSA/血清等3个方面来筛选较好的培养条件,结果表明:①不添加高糖DMEM的M199培养液与添加的相比,卵巢上卵母细胞数量要多,但随着培养时间的延长,组织块上卵母细胞的形态会变得不清楚;②家兔卵巢组织在FSH浓度为50和100m IU/m l、添加血清的DMEM/F12培养液中生长较好,体外培养24d后,卵母细胞数量多,直径增加到65μm;③与添加BSA的培养液相比,添加血清的培养液中的卵巢卵母细胞生长状态较好,体外培养28d后,卵母细胞数量多,并且直径可达65μm。     

绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养的研究

研究了绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养,并就影响体外成熟的因素进行了探讨。试验表明:添加10%和15%的胎牛血清(FCS)绵羊卵巢卵母细胞的体外成熟率(81.25%和83.75%)明显高于不添加FCS的对照组的卵母细胞成熟率(65.00%);在基础培养基中10%的FCS存在的条件下,添加一定质量分数的促卵泡素(FSH)和促黄体素(LH)时,卵母细胞的体外成熟率明显高于不添加FSH和LH的对照组的绵羊卵母细胞的体外成熟率;培养24 h和26h卵母细胞体外成熟率(75.00%和80.00%)明显高于培养20 h的卵母细胞体外成熟率(63.30%);从3~6 mm卵泡中抽取的卵母细胞体外成熟率(81.50%)明显高于从1~3 mm卵泡中抽取的卵母细胞的体外成熟率(53.30%)。     

猪卵泡液与猪卵母细胞体外成熟与凋亡的关系

本研究就猪卵泡液对猪卵母细胞的体外成熟及凋亡进行了探索试验一证明,体外培养46-48h,成熟液添加5%猪卵泡液能促进成熟,核成熟率为41.2%,成熟液添加20%猪卵泡液则抑制成熟,核成熟率为23.1%,二者差异显著;试验二证明,添加猪卵泡液可以促进猪卵母细胞体外存活时间的延长,体外培养第16天,含0%、5%、10猪卵泡液的存活率分别为2.6%、22.2%、18.6%,添加与否差异显著.     

水牛腔前卵泡体外培养效果影响因素的研究

 【目的】主要探讨水牛腔前卵泡体外培养的影响因素。【方法】采用梳刮法从沼泽型水牛的卵巢中回收得到腔前卵泡，而后用McCoy's5a培养液在96孔培养板中体外培养5～10 d，在显微镜下观测腔前卵泡的形态与增长情况，并用台盼蓝染色鉴定腔前卵泡的存活情况。【结果】在培养液中添加100 µg•L-1的FSH能显著提高腔前卵泡培养5和10 d后的增长幅度，当同时添加50 mg•L-1的维生素C时增长幅度进一步加强；添加50 mg•L-1的维生素C能提高腔前卵泡培养10 d后的形态正常率，但对卵泡增长及存活没有影响；添加50 µg•L-1的EGF能提高腔前卵泡培养5 d的增长幅度，但对培养10 d后腔前卵泡的作用不显著。随着卵泡的直径增加，体外存活率升高，增长的幅度上升，异常率下降。60～100 µm的腔前卵泡用三维培养法（琼脂糖包埋）体外培养10 d的直径增长幅度显著高于二维培养法（琼脂糖铺底）和普通培养法，且形态异常显著低于二维培养法和普通培养法；100～140 µm卵泡用二维培养法培养的增长幅度最大，培养成活率最高。【结论】FSH能促进水牛卵泡的体外增长，维生素C能维持卵泡的正常形态结构，且两者的协同作用显著；水牛卵泡体外发育能力随其体积的增大而增强；三维培养法适宜于培养60～100 µm的卵泡，而二维培养法有利于100～140 µm卵泡的体外发育。     

猪腔前卵泡卵母细胞体外成熟培养初探

【研究目的】为了进一步挖掘猪的遗传潜力,为体外受精、动物克隆和转基因等胚胎生物技术研究提供大量优质卵源。【方法】以极体排出情况为判断标准,采用一步法和两步法成熟培养猪腔前卵泡卵母细胞,来考察猪腔前卵泡卵母细胞最佳成熟方式。【结果】采用任何一种方法卵母细胞经体外成熟后都没有达到MⅡ。然而,腔前卵泡体外培养5d后,分离出的卵丘卵母细胞复合体再培养12d,卵母细胞平均直径达到102.68μm(102.68±12.21),接近正常成熟卵母细胞的体积,为卵母细胞的成熟创造了条件。【结论】用两步法培养猪的腔前卵泡,其卵母细胞能够达到接近正常成熟卵母细胞的体积,说明采用两步法培养猪腔前卵泡卵母细胞是可行的。     

二种分离液对牛腔前卵泡卵母细胞体外培养效果观察

本实验通过２种无血清分离液,采用机械方法分离牛腔前卵泡卵母细胞,体外培养７ｄ,观察其体外培养效果结果表明,Ｍ１９９Ｈｅｐｅｓ组腔前卵泡卵母细胞发育率为６３．４％,ＰＢＳ组为３０．３％,二者差异极显著（Ｐ＜０,０１）;第７ｄ 卵泡平均增长直径以Ｍ１９９Ｈ＿组好于ＰＢＳ组,分别为（２８． ７± ２１． ２）μ和（２１． ６± ８． ０）μｍ,次级卵泡（Ｓｃ）增长速率大于初级卵泡（Ｐｍ）     

不同龄小鼠腔前卵泡的采集和体外培养

为了探寻胚胎移植中所需卵母细胞的来源途径,对不同龄小鼠腔前卵泡进行了分离采集,比较了腔前卵泡的不同分离方法,并对其进行了体外培养。结果表明,２－４ｍｇ／ｍＬ胶原酶的处理有利于腔前卵泡的分离,且对卵泡早期培养无不利影响;１０日龄至１年龄小鼠的腔前卵泡,具有相同的体外生长发育与成熟的能力。     

不同激素添加成分和受精液对山羊卵巢卵母细胞体外成熟与受精的影响

就成熟培养液中添加成分和不同受精液对山羊卵母细胞体外成熟与体外受精的影响进行了研究.结果表明,成熟培养液中添加HCG组的卵母细胞成熟率(85.7%)极显著高于PMSG组(50%)和FSH LH组(57.1%)(P<0.01),受精率比较则HCG组(62.2%)极显著高于PMSG组(34.7%)(P<0.01),显著的高于FSH LH组(45.2%)(P<0.05);添加了17β-雌二醇的成熟培养液对山羊卵母细胞的成熟率和受精率没有明显影响(P>0.05),而添加5%山羊卵泡液的成熟培养液则使卵母细胞的成熟率和受精率明显下降,卵裂率(7,7%)却显著高于对照组(0.0%)和17β-雌二醇组(0.0%) (P<0.05);分别以TALP液、BO液、M-199液为基础液组成的三种受精液(I液、II液、Ⅲ液)中II液的受精率(62.2%)显著高于Ⅲ液(44.7%)(P<0.05),而且II液的卵裂率(21.6%)显著高于I液(9.1%)(P<0.05),极显著高于Ⅲ液(0.0%)(P<0.01).     

牛卵巢卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵巢采卵方法以及卵巢保存温度和时间、性周期阶段、激素和培养基对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明:从屠宰场获取的卵巢,先切剖或抽吸卵泡再切割卵巢,可显著提高可用卵母细胞数。卵巢保存时间在 2 h 以内最好,最长不超过 6 h。30~39 ℃的生理盐水保存卵巢,卵母细胞的成熟率(63.9 %)和卵裂率(34.4 %)均显著高于 2~8 ℃(16.7 %、0 %)和 20~29 ℃(54.1 %、31.7 %)保存的。采集卵母细胞时卵巢所处性周期阶段(卵泡期、黄体期)对卵母细胞体外成熟的影响不大(成熟率分别为 69.2 %、64.3 %)。M199 是牛卵母细胞体外成熟理想的培养基,M199 + 50 IU/mL LH+ 100 IU/mL FSH + 1μg/mL 17?-E2和 M199 + 50 IU/mL GnRH+1μg/mL 17?-E2都是牛卵母细胞体外成熟理想的培养系统(成熟率分别为 69.4 %、67.5 %,卵裂率分别为 35.4 %、42.7 %)。     

生发泡移植过程对小鼠卵母细胞体外受精的影响

为研究生发泡(GV)移植后的重组卵母细胞能充分在体外成熟和发育,本试验比较了GV移植过程及体外成熟对小鼠卵母细胞体外受精的影响。通过透明带切口及GV移植获得的重组GV期卵母细胞的成熟率为87.0%(147/169),体外受精后发育到原核期胚和2-细胞期胚的比率分别为76.2%(112/147)和42.2%(62/147),与仅做透明带切口但不进行GV移植的对照组相似(P>0.05),表明GV移植过程未对卵母细胞体外受精后的早期胚胎发育能力产生不利影响。但与体内成熟的卵母细胞相比,体外成熟卵母细胞的受精率和卵裂率都明显降低,表明其进一步发育的能力受到影响。     

山羊卵泡卵母细胞体外成熟体外受精研究

对山羊孵巢卵泡卵母细胞的采集方法、 PMSG处理山羊促进多卵泡发育及受精体系进行了研究。结果表明：切割法获可用卵数高于抽吸法， PMSG处理获卵总数及可用卵数高于对照组， BO液法的受精率高于 TALP液法，而 TALP液法的桑椹胚率高于 BO液法。     

Gamma Irradiation of Embryogenic Callus Cultures and In Vitro Selection for Salt Tolerance in Sugarcane (Saccharum officinarum L.)

Radiation induced mutagenesis followed by in vitro selection was employed for salt tolerance in popular Indian sugarcane (Saccharum officinarum L.) cv.CoC-671.Embryogenic calli were gamma irradiated and exposed to different levels of NaCl (42.8,85.6,128.3,171.1,213.9,256.7,299.5,or 342.2 mM).The relative growth rate (RGR) decreased progressively with increasing salt stress and was the least with a salt stress of 256.7 mM (0.25±0.009),almost 10 fold lesser than the control.The RGR was significantly lower in 85.6 mM and higher salt stressed calli than the control.The survival percent also decreased,with an increase in NaC1 concentration.In case of 10 and 20 Gy irradiated calli,regeneration was observed up to 85.6 mM NaCl selection,medium,whereas,higher treatments (128.3 mM and beyond) exhibited browning initially.However,in the subsequent subcultures,regeneration was obtained in the case of 10 and 20 Gy irradiated calli on 128.3 and 171.1 mM NaCI selections.Higher dose of gamma irradiation (40 Gy) also showed regeneration,but only with 85.6 mM NaCI selection.The unirradiated calli regenerated the highest number of plantlets followed by 10 and 20 Gy irradiated calli on salt selection.A total of 147 plantlets were selected from different salt levels.The salt selected plants are being tested for their field performance.     

奶牛卵丘细胞和共培养细胞对体外受精胚胎发育的影响

对奶牛卵母细胞进行体外受精,研究了卵丘细胞和共培养细胞对体外受精胚胎发育的影响.结果表明,奶牛卵丘细胞有助于卵母细胞的体外受精,能够显著提高体外受精的卵裂率(70.7%)和囊胚率(22.8%),而在B2胚胎培养液中添加Vero作为共培养细胞能显著提高体外受精后胚胎的囊胚率(22.7%).     

Gamma Irradiation of Embryogenic Callus Cultures and In vitro Selection for Salt Tolerance in Sugarcane （Saccharum officinarum L.）

Radiation induced mutagenesis followed by in vitro selection was employed for salt tolerance in popular Indian sugarcane （Saccharum officinarum L.） cv. CoC-671. Embryogenic calli were gamma irradiated and exposed to different levels of NaCl （42.8, 85.6, 128.3, 171.1,213.9, 256.7, 299.5, or 342.2 mM）. The relative growth rate （RGR） decreased progressively with increasing salt stress and was the least with a salt stress of 256.7 mM （0.25±0.009）, almost 10 fold lesser than the control. The RGR was significantly lower in 85.6 mM and higher salt stressed calli than the control. The survival percent also decreased, with an increase in NaCl concentration. In case of 10 and 20 Gy irradiated calli, regeneration was observed up to 85.6 mM NaCl selection, medium, whereas, higher treatments （128.3 mM and beyond） exhibited browning initially. However, in the subsequent subcultures, regeneration was obtained in the case of 10 and 20 Gy irradiated calli on 128.3 and 171.1 mM NaCl selections. Higher dose of gamma irradiation （40 Gy） also showed regeneration, but only with 85.6 mM NaCI selection. The unirradiated calli regenerated the highest number of plantlets followed by 10 and 20 Gy irradiated calli on salt selection. A total of 147 plantlets were selected from different salt levels. The salt selected plants are being tested for their field performance.     

兰花试管开花研究进展

阐述兰科植物试管开花研究的一些进展,着重介绍实生苗、组培苗以及环境、营养条件、培养基附加成分等因素对开花的影响。     

培养条件对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟及受精的影响

对绵羊卵巢卵母细胞体外成熟培养及体外受精培养条件进行筛选,结果表明:在基础培养基中添加FCS可以显著提高卵母细胞的体外成熟率,而添加10%、15%和20%FCS的组间,卵母细胞的成熟率差异不明显,表明在基础培养液中添加10%FCS即可使绵羊卵母细胞的体外成熟率达到一个比较高的水平;体外培养时间不同对绵羊卵母细胞的成熟有较大的影响,培养24 h和26 h的卵母细胞成熟率(分别为73.3%和77.5%)显著高于培养18 h和20 h的卵母细胞成熟率(分别为62.5%和65.0%);对活力较低的绵羊精子而言,采用直接上浮法要比离心洗涤法更有利于选取活力较高的精子,并可提高受精卵的卵裂率.