基于 EST 和 GSS 序列的茶树 miRNA 及其靶基因数据挖掘

microRNA（miRNA）是一类长 19~24 个碱基的小分子内源性非编码单链 RNA,通过介导靶基因的裂解或抑 制靶基因的翻译,在植物的发育、新陈代谢、应激响应等方面起着重要的调控作用,在进化上具有高度的保守性。据 此本研究以 miRBase 注册的全部成熟植物 miRNA 序列为探针,基于 NCBI 数据库中茶树表达序列标签（EST）和基因 组勘测序列（GSS）进行同源搜索和 miRNA 二级结构分析,总共发现 7 条茶树的 miRNA,分属于 6 个不同的 miRNA 家族。通过靶基因的预测分析表明,这些 miRNA 可能调节 28 种靶标基因,功能涉及新陈代谢、生长发育、胁迫应答 及转录,为茶树 miRNA 的试验鉴定和功能研究提供更详细精确的范围,为进一步探究茶树 miRNA 的调控机理奠定 基础。     

巨桉组培育苗技术初探

以当年巨桉实生苗顶芽、幼嫩侧芽为繁殖材料,以培养基MS＋6-BA 0.25 mg/L＋IBA 0.3mg/L＋蔗糖35g/L＋卡拉胶6.2 g/L,诱导获得丛芽,在培养基MS＋6-BA 0.25 mg/L＋IBA 0.3 mg/L＋NH4NO3 3 mg/L＋蔗糖35 g/L＋卡拉胶6.2 g/L上继代增殖,增殖倍数2.5以上,生根诱导在MS＋NAA 0.25 mg/L＋IBA 0.3 mg/L＋蔗糖25 g/L＋卡拉胶5.2 g/L的培养基上获得健壮的生根苗,生根诱导率90%以上,移栽苗圃获得成功。     

巨桉EgrWRKY70基因克隆和初步表达分析

WRKY家族为植物所特有,参与调控植物逆境胁迫、生长发育和衰老等生物学过程。为了获得WRKY70同源基因在桉树响应胁迫中的作用和功能,克隆巨桉(Eucalyptus grandis)中的Egr WRKY70基因,通过生物信息学分析和q RT-PCR进行功能的初步鉴定。结果表明,Egr WRKY70基因编码321个氨基酸,蛋白分子量为36.18 ku,只有一个WRKY结构域,属于WRKY转录因子III a类成员。同时,Egr WRKY70与麻风树的Jcu WRKY70的亲缘关系最近,其氨基酸序列相似性达到58.2%。半定量RT-PCR分析表明,Egr WRKY70主要在巨桉叶片、根和花中表达,而在茎部表达量较低。实时定量q RT-PCR分析显示:Egr WRKY70基因在低温和盐胁迫下,表达量快速升高然后下降;在盐胁迫下Egr WRKY70基因表达仍然维持在较高水平;在油菜素内酯和水杨酸处理时,Egr WRKY70基因能够快速的响应,使用茉莉酸甲酯处理时其表达量没有发生明显的变化。由此表明,Egr WRKY70能够通过不同的响应方式参与桉树生物和非生物胁迫的应答。     

巨尾桉挥发物化感作用初步研究

在实验室条件下进行巨尾桉(Eucalyptus grandis×E.urophylla)新鲜桉叶和桉油的挥发物对4种受试植物种子萌发和幼苗生长的影响试验.结果表明:巨尾桉挥发物对受试植物的种子萌发和幼苗生长均有抑制作用,且抑制作用强度,桉油挥发物均显著或极显著大于桉叶自然挥发物.桉油挥发物的作用强度有明显的浓度效应,浓度增大,抑制作用增强.不同受体植物对巨尾桉挥发物化感作用的敏感性差异明显,其中甜菜心和白萝卜敏感性较强,水稻和热研2号柱花草敏感性则较弱.     

尾巨桉萌芽林培育技术

为了充分利用尾巨桉萌芽能力强,培育萌芽林具有省工省本、林分生长快出材量高等优点,通过多年生产实践和试验,总结出尾巨桉萌芽更新主要技术。选择尾巨桉前茬林分为优良无性系,保存株数1100株/公顷以上且分布均匀,经营管理水平较高,林木生长较好的皆伐迹地进行萌芽更新;做好采伐后迹地清理及稀疏地块补植;当萌芽条2周年时,选留2株以内大小基本一致林木培育;及时做好劈草、除萌、施肥抚育管理和虫害防治等工作。     

施肥对尾巨桉林分生长和分化的影响

研究了施肥对龙岩市新罗区6年生尾巨桉林分生长和分化的影响,结果表明：以基肥施钙镁磷肥500 g·穴-1,追施钙镁磷复合肥150 g·株-1、（NH4）2HPO4250 g·株-1、尿素100 g·株-1;第2年追施（NH4）2HPO4500 g·株-1;第3年追施（NH4）2HPO4500 g·株-1的施肥效果最佳。施肥后,大于林分平均胸径的尾巨桉林木株数明显增多,正向分化明显,生产中应及时进行抚育间伐,有利于尾巨桉大径材培育。     

不同接种和处理方式对巨桉幼苗青枯病发生的影响

桉树青枯病的发生由于影响因素较多导致其人工接种重复性差,因此需要获得稳定的青枯病感染,同时在此基础上可以进行桉树苗期青枯病的防治研究。在本研究中采用水培后伤新根和袋苗未经水培直接伤根后转移到青枯菌液中浸泡6、12、18、24 h后移植,调查桉树幼苗青枯病发病率和生长状况,同时通过在接种前喷施不同浓度的BR、Me JA、SA 3种激素,诱导桉树抵抗青枯菌侵染,调查处理后苗木死亡率。结果表明,未经过水培直接伤根移植的苗木更容易感染青枯菌,经过24 h菌液浸泡处理后的幼苗的死亡率,达到86.67%,同时发现SA对缓解桉树青枯病的发病有明显的作用,且在喷施浓度为0.001 mmol时使用,青枯菌侵染的植株仍有75.0%的存活率。本研究获得了桉树幼苗稳定感染青枯病的一种方式,为室内研究桉树幼苗感染青枯病的机制奠定基础,同时获得了降低桉树青枯病发生的处理方式,为桉树苗期青枯病的防治提供一种方案。     

龙海九龙岭林场不同采伐迹地尾巨桉造林效果比较

对尾巨桉在马尾松和杉木采伐迹地的造林效果进行比较,研究结果表明,马尾松采伐迹地的尾巨桉造林效果比杉木采伐迹地的尾巨桉造林效果好。     

不同基质配比对尾巨桉组培苗成活率和生长的影响

以尾巨桉容器苗为材料进行试验,选用木屑、椰糠、泥炭土、珍珠岩为基料,采用正交试验设计L9(33),研究不同基质配比对尾巨桉容器苗移植成活率及苗木生长。结果表明:不同轻基质配比尾巨桉移植成活率、株高、地径及根系长度均有显著性差异。不同水平木屑和泥炭土均对苗高和地径有极显著性影响,木屑对成活率、泥炭土对根系长度也存在显著性差异;不同水平珍珠岩对成活率、根系长度达到显著性差异,对苗高则有极显著影响;椰槺对苗木生长没有显著性差异。综合分析表明以处理7(木屑:椰糠:泥炭土:珍珠岩=5:2:3:2)为尾巨桉育苗的最佳轻基质配比。     

巨尾桉小枝、叶片水浸提液对三种蔬菜种子发芽的影响

为了解巨尾桉小枝、叶片内含物对三种蔬菜种子萌发的化感作用,分别用巨尾桉新鲜叶片、小枝的水浸提液供水做萝卜、甘蓝和油青菜心种子的发芽试验,结果表明：新鲜叶片、小枝水浸提液会强烈地抑制三种供试种子的萌发和胚根的生长。对三种供试种子萌发的抑制作用叶片浸提液大于小枝浸提液。     

木薯耐寒相关microRNA的差异表达分析

采用荧光实时定量PCR(quantitative Real Time-PCR,qRT-PCR)技术对低温胁迫处理及对照的两个木薯品种C4和KU50材料进行差异表达分析。结果表明,该6个miRNA在胁迫材料与对照中的表达不同,不同品种及器官中也存在差异表达,且6个miRNA属于受低温诱导与上游调节基因相关的miRNA,这将成为今后研究的主要对象。     

不同林龄史密斯桉树能源林现存量与能量研究

对云南省牟定县2～6年生史密斯桉的现存量和能量进行研究。结果表明:史密斯桉林分各器官现存量以及林分现存量都随林龄的增加而增大,林分现存量年增长量在第6年达到最大,为22.52t/(hm2·a)。不同林龄史密斯桉器官现存量排序为干根或枝皮叶,器官平均灰分含量排序为叶皮根枝干,平均干重热值排序为叶干枝根皮,平均去灰分热值排序为叶枝干根皮。史密斯桉树植株体的平均灰分含量和平均去灰分热值随林龄的增加而减小,而平均干重热值却在第4年达到最大。植株体平均灰分含量为1.17%～2.65%,平均干重热值为18.61～18.86kJ/g,平均去灰分热值为18.83～19.29kJ/g。林分总能量随林龄的增大而增大,其年增长量在第6年达到最大,为414.59GJ/(hm2·a)。只从现存量和能量的角度考虑,云南省牟定县的史密斯桉树能源林收获周期应为6a。     

中国桉树焦枯病病原菌物种多样性及致病力初步分析

为了明确中国桉树焦枯病病原菌的物种多样性、生物学特性和致病力强弱,本试验对在中国报道的桉树焦枯病病原菌进行了形态学比较,β-tubulin、Histone H3、TEF-1α三段基因系统发育学分析,并测定各病原菌在7个温度下的菌落生长速度,以及对4个桉树无性系(DH32-29、广州1号、广林4号、OC14)离体叶片的致病力大小。结果表明,到目前为止我国桉树焦枯病病原菌分属6个不同的物种,分别是Ca.cerciana、Ca.crousiana、Ca.pauciramosa、Ca.pseudocolhounii、Ca.pseudoreteaudii和Ca.fujianensis。不同病原菌的形态存在一定差异,病原菌分属于不同的系统发育树分枝。被测试病原菌的最适生长温度为20~30℃,在5℃和35℃下均停止生长。被测试的5种桉树焦枯病病原菌在4个桉树无性系上的致病力差异显著,总体致病力强弱顺序为:Ca.cercianaCa.pauciramosaCa.pseudoreteaudiiCa.crousianaCa.fujianensis。桉树无性系对不同种桉树焦枯病病原菌的抗性存在显著差异。研究结果显示桉树焦枯病病原菌物种存在多样性,各病原菌的致病性差异显著,有针对性地选择抗特定病原物种的桉树无性系是解决桉树焦枯病危害的一条有效途径。     

Antioxidant activity and phenolic content of chestnut (Castanea sativa) shell and eucalyptus (Eucalyptus globulus) bark extracts

Chestnut (Castanea sativa) shell and eucalyptus (Eucalyptus globulus) bark, waste products of the food and wood industries, respectively, were analysed as potential sources of antioxidant compounds. The extraction yield, the antioxidant activity and total phenols content of the extracts were greater in chestnut shell than in eucalyptus bark for most of the extraction conditions essayed. Extraction of chestnut shell with a 2.5% Na₂SO₃ aqueous solution led to the highest extraction yield, 25.6%, total phenols, 13.4 g gallic acid equivalent/100 g oven-dried shell, and FRAP antioxidant activity, 80.7 mmol ascorbic acid equivalent/100 g oven-dried shell. Extraction with methanol:water (50:50, v/v) provided the best results for eucalyptus bark. The antioxidant activity and the total phenols content of the extracts had a positive linear correlation. FTIR spectroscopy confirmed the higher content of phenolic compounds in chestnut shell extracts compared to eucalyptus bark extracts. Chestnut shell extracts were characterized by the presence of high molecular weight species whereas lower molecular weight species were predominant in eucalyptus bark extracts.     

巨桉EgrWOX5基因的克隆、表达分析与超表达载体构建

以巨桉(Eucalyptus grandis)EG5无性系为试验材料,通过RT-PCR技术从中克隆得到了1个巨桉WOX家族基因成员的CDS序列,命名为Egr WOX5(Gen Bank登录号为KF964019)。该基因全长为543 bp,编码181个氨基酸,具有WOX基因家族最保守的特征结构域-Homeobox domain(HD)结构域;其氨基酸序列与草本植物的拟南芥At WOX5基因和木本植物杨树Ptr WOX5基因的氨基酸序列有较高的相似性。组织表达分析结果显示,Egr WOX5基因特异性地在巨桉EG5的根组织中表达。这些结果间接或直接地说明Egr WOX5在巨桉根组织的发育过程中发挥重要作用。本研究还利用Gateway技术成功构建了Egr WOX5基因的超表达载体,为后续基因功能的进一步鉴定奠定基础。     

反义4C基因转化桉树调控木质素生物合成的研究

以桉树主栽品种尾叶桉U6(Eucalyptus uroplrylla)为试材,通过根癌农杆菌介导法,将反义4-香豆酸:辅酶A连接酶基因(4-eoumarate:CoA ligase)导入尾叶桉U6叶盘,经卡那抗性筛选共获得了6株转化植株,其中3株转化植株的RT-PCR和Northern blot结果显示内源4CL基因的表达受到抑制.     

利用Solexa测序技术鉴定苋菜试管开花过程中的miRNAs

利用Solexa测序技术对苋菜试管开花过程中的miRNAs进行筛选和鉴定,使用GO数据库和KEGG代谢途径数据库对靶基因进行功能注释和分类。结果显示:共得到sRNA Unique序列5 457 486条,其中与拟南芥基因组完全匹配有27 596条,仅仅占0.51%;miRNA主要分布在18 nt~25 nt之间,其中长度为24 nt序列数量最多;苋菜试管开花过程中miRNA的表达丰度存在明显差异,主要低丰度表达;总共鉴定了235个已知的苋菜miRNA,构成20个家族,不同家族间成员数量存在巨大差异;苋菜保守miRNA的长度主要集中在21 nt和20 nt;另外总共获得14个候选的新miRNA,其中有8个miRNA含单个基因座,另6个miRNA具备多个基因座;11个候选的miRNA预测到了靶基因,总共对应着约46个基因符合靶标特征。这些靶标参与植物生物体的各个发育进程,在苋菜试管开花过程中对生物过程、细胞组分及分子功能起到重要作用。