布氏杆菌S2疫苗免疫绵羊血清抗体消长规律研究

为了解绵羊对布氏杆菌病S2疫苗免疫后的抗体消长规律,通过口服和注射2种方法对绵羊进行了布氏杆菌病S2疫苗免疫试验,利用虎红平板凝集试验(RBT)和试管凝集试验(SAT)以及c ELISA检测方法进行了血清抗体检测。结果表明:正常剂量口服免疫S2疫苗20 d后,RBT、SAT、c ELISA抗体阳性率均达到最高,分别是80%、70%、60%,并且在免疫100 d后羊血清抗体阳性率分别为RBT 20%、SAT 10%、c ELISA 10%,免疫250 d后3种方法检测结果均转为阴性。2倍剂量口服免疫S2疫苗20 d后,RBT、SAT、c ELISA均达到最高为60%,并在免疫100 d后均转为阴性。以正常剂量注射免疫S2疫苗免疫7 d后RBT和SAT抗体阳性率达到最高为80%,c ELISA抗体阳性率达到60%,30 d后达到80%,而疫苗免疫370 d后,RBT和SAT检测抗体阳性率下降到60%,c ELISA检测抗体阳性率依然80%;而2倍剂量注射免疫S2疫苗370 d后,RBT和c ELISA检测抗体阳性率仍保持着100%,SAT检测抗体阳性率达80%。结果表明,从免疫羊抗体产生及体内消长规律来看,布氏杆菌S2疫苗注射免疫明显优于口服免疫效果,且两种免疫途径的试验羊均且未发现明显接种副反应。     

牛4种主要传染病的检测与分析

[目的]旨在研究口蹄疫、布鲁氏菌病、牛结核病、牛结节性皮肤病等4种牛主要传染病的免疫效果和流行情况。[方法]采用疫苗对口蹄疫、牛结节性皮肤病免疫,针对性使用荧光PCR、ELISA方法以及虎红平板凝集试验、皮内变态反应试验对上述4种牛病进行检测。[结果]免疫牛口蹄疫10.21万头次,检测血清1 534份和组织样品233份,口蹄疫免疫抗体合格率94.33%,口蹄疫病毒为阴性。使用山羊痘疫苗免疫牛结节性皮肤病2.89万头次,检测口鼻拭子/抗凝样品200份,牛结节性皮肤病病毒为阴性。监测牛布鲁氏菌病血清2 380份,阳性率为0.17%。监测牛结核病1 291头,阳性率为0.23%。[结论]口蹄疫、牛结节性皮肤病免疫效果良好,达到阻断病毒感染和传播目的。布鲁氏菌病、牛结核病总体上分别达到控制标准和净化标准,但“两病”仍有零星发生,需要加强牛只调运监管检疫。     

中国兽医寄生虫病2007年第15卷1～6期总目次

研究论文·球虫(菌)清缓释剂防治家兔球虫病和大肠杆菌病效果分析………………………………………杨琳芬等(1-1)基于J2EE平台的寄生虫虫种资源库的构建沈海默等(1-8)……………………………………………………水貂隐孢子虫病流行病学调查及虫种的初步鉴定王荣军等(1-13)对并殖吸虫病患者外周血中嗜酸性粒细胞相关性的初步观察……………………………………陈韶红等(1-17)南京地区犬巴贝斯虫病的诊断与预防汪恭福等(1-20)……………………………………………………………斑点金标免疫渗滤法快速检测牛血吸虫病抗体效果观察………………………     

羊棘球蚴病疫苗免疫山羊后的抗体水平检测

棘球蚴病又叫包虫病,是人和动物感染细粒棘球绦虫及多房棘球绦虫幼虫所致的疾病。本试验采用不同的免疫程序分两次免疫羊包虫病疫苗,并于免疫后4、8、12、20、28、42周分别采集血清用间接ELISA法检测抗体水平。结果显示:首次免疫后4周抗体水平达到最高并维持一定时间,第28周抗体水平处于临界值;两次免疫的羊在42周时的抗体阳性率仍达到88.9%。     

嗜酸性粒细胞与寄生虫感染免疫的相关性

嗜酸性粒细胞(EOS)在动物机体抵抗寄生虫感染的过程中具有关键作用,各种寄生虫病都会引起机体内嗜酸性粒细胞数量的变化。嗜酸性粒细胞主要通过其颗粒中的离子蛋白参与细胞毒作用,对原虫、蠕虫等寄生虫产生杀灭,同时对组织也能造成病理损伤。文章对嗜酸性粒细胞免疫作用及寄生虫感染免疫的研究进行了总结及相关性分析。     

鸭抗菌肽Dcath多克隆抗体的制备及鉴定

为制备效价高、特异性强的鸭抗菌肽Dcath多克隆抗体,并对制备的多克隆抗体进行鉴定和初步应用,采用Fmoc固相化学合成法合成鸭抗菌肽Dcath的成熟肽段,与血蓝蛋白偶联后,与弗氏完全佐剂乳化,按照免疫程序免疫接种大白兔,采集免疫兔血清,亲和层析纯化多抗,ELISA检测多抗效价,以制备的多抗为一抗,用Western blot检测鸭血外周异嗜性粒细胞中Dcath的表达,用免疫组化(IHC)检测鸭回肠、肾脏组织中Dcath的表达。结果显示,合成的鸭抗菌肽Dcath纯度达98.28%,经ELISA检测,纯化的兔多抗效价达到1∶128000,经Western blot检测,鸭血外周异嗜性粒细胞大量表达Dcath,经免疫组化检测,鸭Dcath在肾脏及回肠组织细胞中广泛表达。结果表明,成功制备了鸭抗菌肽Dcath多克隆抗体,效价高、特异性强,为深入研究鸭抗菌肽Dcath的生物学特性提供了技术支持。     

棘球蚴基因工程苗免疫羊血清抗体的检测

2000年5－12月用ELISA法对青海省贵南县的棘球蚴基因工程苗免疫羊血清抗体进行了检测。结果：免疫前抗体阳性率为30．3％，保护率为3．03；一免后阳性率为40．40％，保护率为2．02％；二免后阳性率为89％，保护率为72％。说明对羔羊加强免疫后可获得痕好的群体保护力。     

荧光免疫层析法和ELISA方法检测猪瘟抗体相关性的探讨

为了探讨荧光免疫层析法和ELISA方法检测猪瘟抗体的相关性,在屠宰场采集了64份猪血清,分别采用荧光免疫层析法和ELISA方法进行检测,结果为荧光免疫层析法检测抗体阳性率为68.75%,ELISA检测抗体阳性率为57.81%,有55份样品检测结果相符,符合率为85.94%。结果表明,荧光纳米免疫层析法操作简单,试验时间短适合基层大规模监测,但仍可能存在假阴性或假阳性的问题。     

吉林地区规模化猪场猪繁殖与呼吸综合征的血清学检测

本试验应用ELISA法对吉林地区8个猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)未免疫猪场和9个PRRS免疫猪场的后备母猪、生产母猪和5~10周龄的断奶仔猪3个猪群进行了猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)抗体检测,结果表明:吉林地区8个PRRS未免疫猪场均受有PRRSV感染,猪场抗体阳性率为100%,猪群抗体阳性率在50%~75%之间,平均阳性率为62.26%;吉林地区9个PRRS免疫猪场猪群PRRSV抗体阳性率在70%~100.00%之间,平均阳性率为87.78%。PRRS未免疫猪场与PRRS免疫猪场猪群抗体平均阳性率相比,差异极显著(P<0.01)。     

细粒棘球绦虫排泄分泌抗原的研究——绵羊免疫后或感染后的抗体应答及细胞应答

绵羊用六钩蚴排泄分泌抗原(ES)，原头节ES抗原、原头节可溶性粗抗原，绵羊棘球蚴囊液(SHCF)或囊壁抗原免疫后，和攻击感染虫卵后，应用ELISA，酯酶染色法及瑞氏-姬拇萨染色法研究了血清抗体、T、B淋巴细胞、嗜酸性粗细胞及淋巴细胞的应答反应。初步结果表明，绵羊在感染细粒棘球绦虫虫卵后或抗原免疫后、攻击感染后都表现明显的血清抗体应答反应，T淋巴细胞、嗜酸性粒细胞及淋巴细胞数量增加，免疫应答依不同的抗原而具有不同性质。     

斑点免疫金渗滤法检测赤羽病抗体的研究

以亲和层析原理为基础,将提纯的AKAV抗原包被在硝酸纤维膜上,利用胶体金标记SPA显色,建立了斑点免疫金渗滤法诊断赤羽病抗体的方法。其中最佳点样抗原质量浓度是0.099mg/mL,封闭液选择含1%BSA,0.5%Tween-20的0.01mol/LpH7.2的PBS缓冲液,SPA胶体金最佳稀释度为1∶4。特异性试验表明,该方法特异性好,与牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎、牛白血病、口蹄疫、蓝舌病等阳性血清不发生交叉反应。将DIGFA与ELISA进行对比,差异不显著。研究结果表明,该方法操作简单,结果易于判断,适用于赤羽病的临床诊断和流行病学调查。     

斑点免疫金渗滤法检测猪瘟抗体的研究

以猪瘟抗原包被硝酸纤维素膜，然后用胶体金标记SPA，建立检测猪瘟抗体水平的斑点免疫金渗滤法检测试纸盒。通过胶体金标记金黄色葡萄球菌A蛋白(SPA)直接显色，阳性者出现红色斑点，结果易于判断。整个试验过程仅需5min，操作简单，与猪兰耳病、猪伪狂犬病、猪细小病毒、新城疫和禽流感等阳性血清不发生交叉反应。同时将该法与目前猪瘟的常规检测方法Dot—ELISA法和间接血凝试验同时对200份猪血清进行猪瘟抗体检测比较，符合率达98．4％和98．9％。说明该法微量、特异、敏感可靠，检测时间短，效果直观，非常适用于猪瘟的早期诊断和普查以及疫苗免疫效果后抗体水平的检测。     

Diagnosis of Fasciola sp. infections in cattle by enzyme-linked immunosorbent assay

An enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) was evaluated for diagnosis of experimental or naturally occurring Fasciola sp. infections in cattle. The positive rate for the ELISA in calves inoculated with Fasciola metacercariae were 21.1% by 2 weeks postinoculation (PI), 94.6% by 4 weeks PI and 100% by 6-21 weeks PI. The positive rate for the immunodiffusion test (Ouchterlony test) reached 91.7% by 2 weeks PI, however, it dropped to 77.8% by 10 weeks PI. The positive rate for the fecal egg examination was 0% by 10 weeks PI, 77.8% by 12 weeks PI and 100% by 14-21 weeks PI. The practical application of ELISA was tested by using 165 cows raised under field condition. All the 24 cows that were positive both in the fecal egg examination and the Ouchterlony test were ELISA positive. Of the 6 cows that were egg positive and Ouchterlony negative, 5 showed ELISA positive reactions. Of the 27 cows that were egg negative and Ouchterlony positive, 24 were ELISA positive. Of the 108 cows that were egg negative and Ouchterlony negative, 90 were ELISA negative. However, the other 18 cows had ELISA positive reactions. Our results suggested that the ELISA using crude adult antigen was superior to the Ouchterlony test and fecal egg examination for diagnosis of experimental or naturally occurring Fasciola sp. infections in cattle.     

应用斑点免疫金渗滤法诊断犬弓首蛔虫病

根据免疫渗滤原理,采用犬弓首蛔虫抗原蛋白和胶体金标记SPA,建立抗犬弓首蛔虫抗体的斑点免疫金渗滤法(D IGFA)检测200份犬血清样本。结果:阳性检出率为8.00%(16/200);血清样本对应犬粪便用饱和盐水漂浮法检查虫卵,阳性检出率为2.0%(4/200)。结论:斑点免疫金渗滤法具有操作简便、灵敏度高、特异性强的优点,可用于犬弓首蛔虫病的早期、快速检测。     

斑点免疫金渗滤试验检测绵羊脑多头蚴病的研究

为了寻找一种快速、简便诊断绵羊脑多头蚴病的新方法，应用自行配制的胶体金探针标记SPA，建立了斑点免疫金渗滤试验（DIGFA）。该法同ELISA具有良好的相符性。将抗原、待检血清滴加于膜上进行反应，数分钟内即可用肉眼进行结果判定。本法具有操作简单、反应快速、敏感性强、重复性好、不需要贵重仪器等优点，适合于基层推广应用。     

斑点免疫金渗滤法检测鸡白痢/鸡伤寒沙门氏菌抗体的应用研究

将鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原包被于渗滤盒检测区（T区），针对沙门氏菌O9抗原单克隆抗体3-47-0包被在质控区（C区），用胶体金标记鸡伤寒沙门氏菌LPS抗原，建立了一种抗原夹心法快速检测鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌抗体的斑点免疫金渗滤法（DIGFA）。DIGFA比玻板凝集试验（PAT）灵敏度高，人工感染鸡试验表明在感染后第7d即可从32只鸡中的7只检测到抗体，在时间上早于PAT。722份现场血清样品的检疫结果表明，DIGFA的阳性检出率稍高于PAT，阳性样品抗体几何平均滴度DIGFA大于PAT法（P〈0．05）。DIGFA的结果得到细菌分离试验的验证。这些结果表明DIGFA快速、灵敏、准确，为鸡伤寒和鸡白痢的检疫提供了一个新的有效手段。     

新疆部分地区规模化猪场弓形虫抗体监测与分析

为了查明新疆部分地区规模化猪场弓形虫流行情况,应用酶联免疫吸附试验对5个猪场随机采集的173分血清样品进行弓形虫抗体监测。结果表明,猪弓形虫抗体阳性率高达82.7%(143/173),其中3个猪场的后备母猪的弓形虫抗体阳性率高达100%,5个猪场公猪的弓形虫抗体阳性率在85%~75%之间。     

不同方法及材料检测大片吸虫感染的比较试验

为片形吸虫病诊断提供高效、简便的新技术，以大片吸虫分泌排泄抗原（ES抗原），用于斑点酶联免疫吸附试验（Dot－ELISA）、琼脂扩散酶联免疫吸附试验（Dig－ELISA）、免疫胶体金滴渗法（DIGFA）检测动物体内的大片吸虫（Fasciolagigantica）感染。通过检测血清、血纸、牛奶等几种材料，多重试验比较，结果三种方法均具有敏感性高、特异性强、准确性可靠等优点，并各有特长，如操作简便快速、费用低廉，易于在基层推广应用等，同时证明用血纸和牛奶检测抗体效果同样可靠。本试验首次报道用Dot－ELISA、DIGFA在奶中检测片形吸虫抗体，为该寄生虫病普查提供一种新思路。     

用免疫金技术检测猪繁殖与呼吸综合征病毒

用胶体金标记提纯后的兔抗猪繁殖与呼吸综合征病毒 (PRRSV)IgG ,建立了一种以微孔滤膜为固相载体 ,以红色胶体金为标记物的检测PRRSV的斑点免疫金渗滤法 (DIGFA)。特异性阻断试验与交叉试验证明DIGFA检测PRRSV有较高的特异性。检测 1 5份临床样本 ,其中 3份DIG FA及细胞培养均为阳性 ,电镜观察亦可见符合PRRSV特征的病毒粒子     

Verification of sensitivity and specificity of group a rotavirus detection in piglets faeces with monoclonal blocking ELISA methods

Monoclonal antibodies to group A rotavirus Vp6 protein were prepared and used for verification of three blocking enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) modifications to detect rotavirus A. Selected competitive blocking ELISA (CB-ELISA) and electron microscopy (EM) were used for examination of 194 field faecal samples of piglets affected with diarrhoea. Rotavirus was detected in 43 samples (22.2%) by CB-ELISA method, whereas in 26 (13.4%) samples by EM examination. However, of 26 samples positive by EM, rotavirus A was detected by CB-ELISA in 19 (73.1%) samples; indicating the share of group A rotavirus in all cases of gastroenteritis caused by rotavirus. The sensitivity and specificity of the CB-ELISA was verified both by inclusion of control samples containing transmissible gastroenteritis virus (TGEV) and porcine epidemic diarrhoea virus (PEDV) in each analysis and by comparative examination of samples with the commercial ELISA kit. The CB-ELISA sensitivity was positively affected by examination of samples in the presence of chelating agent.