传统乳制品中-产细菌素乳酸乳球菌的筛选

采用平板挖井扩散法对从内蒙古传统乳制品中分离鉴定的34株乳酸菌的细菌素产生特性进行研究。在排除有机酸和过氧化氢的干扰后发现，一株乳酸乳球菌CB20—2的发酵上清液对革兰氏阳性60乳酸菌和非乳酸菌显示出抑菌活性，但对革兰氏阴性菌无抑菌作用。其蛋白特性及广谱抑菌性表明乳酸乳球菌CB20—2产生的抗菌物质是一种细菌素。     

罗伊氏乳杆菌所产细菌素的研究

试验对罗伊氏乳杆菌6126的发酵上清液进行了系统研究。结果表明:罗伊氏乳杆菌6126发酵上清液可以产生细菌素,并研究了6126发酵上清液中细菌素的部分特性。该细菌素抑菌谱广,可以抑制多种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,对热(100℃,30min)和pH(2.0～10.0)稳定,胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、蛋白酶K等多种蛋白酶可使其部分失活。     

鸡源乳酸菌细菌素的分离筛选及鉴定

为了分离鉴定产乳酸菌细菌素,采用双层琼脂扩散法,对从健康鸡肠道内容物分离到的68株乳酸菌进行筛选,获得对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、鸡白痢沙门菌均有抑制作用的17株乳酸菌,在排除酸、过氧化氢等因素作用后仍具有较强抑菌活性,表明发酵液中还有其他抑菌活性物质的存在,用蛋白酶处理上清液后有6株菌的抑菌效果消失,表明抑菌物质具有蛋白质性质,是一种细菌素类物质。筛选出的菌株所产抑菌物质是一种广谱细菌素,它们对革兰阳性菌和革兰阴性菌均具有较强抑制效果。结合形态鉴定、生理生化特性试验以及16S rRNA序列同源性分析鉴定菌株LABJN02、LABJN05、LABJN06和LABJN14分离菌为唾液乳杆菌,LABJN16为约氏乳杆菌,LABJN31为卷曲乳杆菌。细菌素作为潜在的抑菌物质,与其产生菌一起在平衡肠道菌群中具有重要意义。     

抗水产病原菌乳酸菌的筛选及其发酵饲料的制备

为筛选具有拮抗水产病原菌特性的乳酸菌并制备发酵饲料,本试验从各类生境分离和收集乳酸菌33株,考察各菌株发酵上清液对革兰氏阴性水产病原菌的抑制作用.选用抑菌性能优良的菌株制备发酵饲料,优化发酵条件,并测定发酵饲料对水产病原菌及益生菌生长的影响.结果 表明:33株乳酸菌的发酵上清液对6株病原菌有不同程度的抑制作用,其中屎肠...     

鸡肠道内乳酸菌的分离鉴定及体外抑菌试验

为获得鸡肠道内抑菌效果好、适应性强的乳酸菌,从健康鸡小肠内容物中分离乳酸杆菌,并对其进行生化鉴定。结果成功从鸡小肠中分离出6株细菌。通过革兰氏染色和生化鉴定,发现这6株细菌分别是微小乳酸菌(L.minor)、约氏乳杆菌(L.johnsonii)、弯曲乳杆菌(L.curvatus)、肠乳杆菌(L.intestinalis)、嗜酸乳杆菌(L.acidlophilus)、植物乳杆菌(L.plantarum)。对分离到的6株乳酸菌进行体外抑菌试验,结果表明肠乳杆菌(L.intestinalis)对大肠杆菌有一定的抑菌作用。该研究为后期开发益生菌制剂奠定了一定的基础。     

分泌抗金黄色葡萄球菌细菌素乳酸菌的分离鉴定

为分离和筛选产抗金黄色葡萄球菌乳酸菌素的优势乳酸菌,利用乳酸菌分离培养基MRS从收集的各种腌制菜汁中分离培养乳酸菌,通过细菌培养特性、革兰氏染色特点、生理生化特性初步鉴定,同时根据Genbank中乳酸菌的16SrDNA序列设计特异性引物,采用PCR方法进一步鉴定,并以金黄色葡萄球菌为指示菌对乳酸菌的发酵上清液进行抑菌特性研究。结果表明,从腌渍菜汁中分离获得90株产酸菌,通过形态学、生理生化特性和PCR鉴定,结果73株产酸菌为乳酸杆菌;分泌产物抑菌试验表明,有10株菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性,经酸排除和过氧化氢排除试验,仍然有5株乳酸菌的分泌产物具有抑制金黄色葡萄球菌活性。可见,从腌渍菜汁分离到的乳酸菌具有抑制金黄色葡萄球菌活性的特性,主要是通过分泌乳酸菌素来发挥作用。     

一株高产酸乳酸菌的分离、鉴定及高密度发酵研究

为获取产酸能力强、发酵性能好、具有强抑菌能力的乳酸菌,本试验以35日龄断奶健康仔猪粪便为菌源,对其乳酸菌进行筛选、分离、鉴定,并对分离菌株进行发酵性能研究。从35日龄断奶健康仔猪粪便中分离得到6株目标菌株,经产酸测试及抑菌试验后,得到一株产酸能力强、抑菌效果良好的筛选菌株,命名为RSJ-5。通过对RSJ-5菌株的菌落与菌体形态观察、生理生化鉴定试验、糖醇发酵试验,确定其为嗜酸乳杆菌。利用50 L发酵罐接种RSJ-5菌株厌氧发酵36 h,发酵液活菌数达158 CFU/mL,乳酸钙含量为85 mg/mL,pH4.2,发酵液对大肠杆菌、沙门氏菌有较强抑菌作用。结果表明RSJ-5嗜酸乳杆菌具备优良乳酸菌发酵剂的性能,探索了发酵工艺的可行性,为液体饲料(乳酸菌发酵液)大规模发酵生产提供参考。     

一株产细菌素乳酸菌的分离和鉴定

从市售3种酸乳中分离得到4株乳酸菌,通过发酵液的抑菌试验确定S1菌株为细菌素产生菌,综合S1菌株的形态学特征、生理生化特征,将其初步鉴定为乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。在排除过氧化氢和有机酸对指示菌的抑制作用后,确定该菌株产生的抑菌物质为细菌素。该细菌素对大肠杆菌具有较好的抑制作用。     

抑制奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌的乳酸菌的筛选

为获得抑制奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌(S. aureus)的乳酸菌(LAB),本研究从新疆巴音布鲁克牧区鲜牛乳和哈萨克族乳制品奶疙瘩样品中分离培养LAB,通过传统的分离鉴定与16S rDNA基因序列测序相结合的方法鉴定LAB种类,同时以临床奶牛乳房炎源金黄色葡萄球菌S. aureus N2为指示菌,采用双层琼脂扩散法检测分离株的抑菌能力。通过测定生长曲线确定分离株的生长稳定期,进而利用硫酸铵沉淀法透析提取稳定期内分离株的细菌素,并检测其细菌素抑菌效价。结果显示:从样品中筛选获得5株能够抑制指示菌生长的LAB,分别为希氏乳杆菌、干酪乳杆菌、粪肠球菌、戊糖片球菌和乳酸乳球菌亚种。生长规律曲线表明20 h^30 h为5株LAB的稳定期,此期培养液pH值维持在3.8~4.5。从培养20 h的5株LAB上清液中提取到了细菌素,经检测其具有抑菌活性,抑菌效价分别为457 IU/mL、1 023 IU/mL、676 IU/mL、1 862 IU/mL和1 023 IU/mL。本研究结果表明5株LAB通过在生长稳定期内维持较低酸性环境(pH<4.5),代谢产生细菌素对乳房炎源S. aureus发挥抑制生长作用。本研究为S. aureus性奶牛乳房炎的生物防治提供了实验依据。     

几株饲用乳酸菌益生性能的研究

对实验室保存的10株乳酸菌进行耐酸、耐胆盐试验,筛选出3株有效菌。采用牛津杯法研究3株乳酸菌对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌机理,即取乳酸菌发酵液、发酵滤液、菌体体外抑制病原菌及经碱处理、乳酸脱氢酶处理的发酵滤液体外抑制致病菌。结果表明:3株乳酸菌都有抑菌能力,菌液及发酵滤液的抑菌能力无明显区别,菌体无抑菌能力。发酵滤液经碱处理后抑菌能力下降,经乳酸脱氢酶处理后抑菌能力无明显影响。     

体外条件下肉鸡源乳酸菌抑菌作用研究

从健康肉鸡肠道分离得到乳酸菌,将其菌悬液以不同体积比加入大肠杆菌培养液中,发现大肠杆菌生长受到不同程度的抑制。对于乳酸菌抑菌机理的初步探讨结果表明:乳酸菌菌悬液离心后所得菌体沉淀对大肠杆菌无抑制作用,而上清液中的胞外代谢产物有明显抑菌作用。上清液中抑菌作用约一半以上是由乳酸产生的,其余的抑菌效果则来源于乳酸菌产生的其它抑菌物质。     

青贮添加剂对芦笋茎叶青贮品质的影响

本研究旨在探讨不同添加剂对青贮芦笋茎叶品质的影响。试验在芦笋茎叶鲜样中分别添加乳酸菌、乳酸菌+纤维素酶、乳酸菌+米糠和乳酸菌+纤维素酶+米糠进行青贮调制,乳酸菌、纤维素酶和米糠的添加剂量分别为5×10⁵ cfu/g、0.6 IU/g、30 mg/g,贮存90 d后开包。综合评定芦笋茎叶的青贮质量,测定常规营养成分,浸提液的pH值、氨态氮和有机酸的含量。试验结果表明,与对照组相比,添加乳酸菌提高了乙酸的含量、降低了有氧损失(P<0.05),提高了芦笋青贮料的有氧稳定性;在添加乳酸菌基础上,同时添加米糠和纤维素酶有降低青贮品质的趋势。仅添加乳酸菌即可获得优质芦笋茎叶青贮料。     

玉米青贮饲料乳酸菌检测培养基中放线菌酮添加量的优选

通过在MRS培养基、马丁培养基中添加放线菌酮0、5、10、20、40、80、160、320mg/L和640mg/L的5个试验,研究了玉米青贮饲料乳酸菌检测中放线菌酮在培养基中的适宜添加量。结果表明:添加放线菌酮40mg/L以上时能够极显著(P<0.01)抑制青贮玉米霉菌的生长。因此,确定40mg/L为检测或纯化培养青贮玉米乳酸菌时的适宜添加量;鉴于青贮玉米中乳酸菌是真菌的100倍以上,在乳酸菌培养时通过加大接种液的稀释倍数可达到避免样品真菌污染的目的。     

几株乳酸杆菌耐逆性的比较研究

试验主要比较研究了6株乳酸杆菌对热(55℃和65℃)、酸(pH值1.0、2.0和3.0)、胆盐(0.1%和0.3%)、微量元素铜(0、10、50和250mg/L)和锌(0、120、600和3 000mg/L)的耐受性。结果表明:各菌株对这些因子的耐受性有不同程度的差异,如菌株LGG增殖速度、产酸性、耐酸性和耐温度55℃的能力都较其他菌株好,但该菌株在65℃下存活率极低;菌株ZJ614耐高温能力较强,在65℃处理20min后存活率能达到19.2%,但Cu2+(50 mg/L)对其增殖的不良影响较大;菌株ZJ621虽对酸的耐受性较强,但对胆盐的耐受性较差。经全面考察各菌株对各逆性因子的耐受性,初步推断,菌株ZJ610和ZJ617的综合耐逆性相对较强。     

Production of bacteriocin by Leuconostoc mesenteroides 406 isolated from Mongolian fermented mare's milk,airag

The purification and characterization of a bacteriocin produced by Leuconostoc mesenteroides strain 406 that was isolated from traditional Mongolian fermented mare's milk, airag, were carried out. Leuconostoc mesenteroides strain 406 was identified on the basis of its morphological and biochemical characteristics and carbohydrate fermentation profile and by API 50 CH kit and 16S ribosomal DNA analyses. The neutral‐pH cell‐free supernatant of this bacterium inhibited the growth of several lactic acid bacteria and food spoilage and pathogenic organisms, including Listeria monocytogenes and Clostridium botulinum. The bacteriocin was heat‐stable and not sensitive to acid and alkaline conditions, but was sensitive to several proteolytic enzymes such as pepsin, pronase E, proteinase K, trypsin, and α‐chymotrypsin, but not catalase. Optimum bacteriocin production (4000 activity units/mL) was achieved when the strain was cultured at 25°C for 24–36 h in Man Rogosa Sharpe medium. The bacteriocin was partially purified by ammonium sulfate precipitation (80% saturation), dialysis (cut‐off MW: 1000), and gel filtration chromatography. Sodium dodecyl sulfate‐polyacrylamide gel electrophoresis revealed that the bacteriocin had a molecular weight of approximately 3.3 kDa. To our knowledge, this is the first report of the isolation of a bacteriocin‐producing Leuconostoc strain from airag. An application to fermented milks would be desired.     

含水量和乳酸菌制剂对狗尾草发酵品质的影响

研究含水量(30%、35%和40%)和乳酸菌制剂添加量(3%、6%、9%和12%)对成熟期狗尾草(Setariaviridis(L.)Beauv.干草发酵品质的影响。结果表明,在含水量30%条件下添加乳酸菌制剂显著降低粗蛋白质含量(P<0.05);含水量35%和40%条件下添加乳酸菌制剂显著降低粗纤维和中性洗涤纤维含量(P<0.05);随着含水量的升高pH值趋于降低,乳酸、丁酸产量趋于增加;含水量和乳酸菌制剂对pH值、乳酸产量以及乳酸菌数量具有显著的互作效应(P<0.05);在含水量30%-40%条件下,添加乳酸菌制剂3%-12%,各处理组的发酵品质均为优或良。     

高效液相色谱法研究瘤胃甲烷菌共存对厌氧真菌代谢产生有机酸特性的影响

本试验旨在利用建立的高效液相色谱法研究瘤胃甲烷菌共存对厌氧真菌代谢产有机酸特性的影响。根据6种有机酸的化学特性确定紫外检测波长、缓冲液浓度、p H、流速、柱温和进样量等液相色谱条件;利用建立的高效液相色谱法检测厌氧真菌纯培养及厌氧真菌与甲烷菌共培养上清液中6种有机酸的含量。结果表明,高效液相色谱采用的条件为:5 mmol/L磷酸二氢钾-磷酸缓冲液(p H=2.4)作为流动相,流速为0.5 m L/min,柱温25℃,进样量为20μL,214 nm波长检测。6种有机酸能够在30 min内得到良好分离。各种有机酸的线性相关系数均大于0.999,检测限为0.20~1.00μmol/L,定量限为0.667~3.333μmol/L,回收率为92.17%~101.61%。甲烷菌共存影响了厌氧真菌的代谢产物。厌氧真菌利用葡萄糖的主要水溶性代谢产物为甲酸、乳酸、乙酸,以及微量琥珀酸、柠檬酸、α-酮戊二酸及乙醇;甲烷菌共存显著降低了上清液中甲酸和乳酸的含量(P0.05),显著增加了乙酸含量(P0.05)。综上,本试验利用建立的高效液相色谱法可快捷、灵敏、有效地检测厌氧真菌代谢葡萄糖产生的6种有机酸的含量,并发现甲烷菌共存显著促进了厌氧真菌氢化酶体对碳水化合物的代谢。     

3种乳酸菌制剂对苜蓿和羊草的青贮效果

以苜蓿Medicago stativa和羊草Leymus chinensis为研究对象,通过对其发酵品质和化学成分的研究,探讨Lalsil Dry（LD）、H/MF INOCULANT（H/MF）和青宝II号（FS）3种乳酸菌制剂对羊草和苜蓿青贮的影响。结果表明：羊草直接青贮较易成功,添加LD、FS和质量分数0.01%的H/MF可以显著提高青贮料乳酸生成量（P<0.05）,显著降低丁酸生成量（P<0.05）,获得优质的青贮饲料;苜蓿直接青贮pH值和丁酸含量较高,不能调制优质青贮饲料,在试验中添加3种乳酸菌制剂亦未获得优质的青贮料,但LD处理组和0.002 5% FS处理对青贮料的发酵品质较对照有一定的改善。另外,3种乳酸菌制剂处理青贮料中的中性洗涤纤维和酸性洗涤纤维含量与对照无显著差异（P>0.05）。