RAPD分子标记在甘蔗杂种鉴定中的应用研究

从甘蔗杂种梁河78/121及其亲本华南56/12和崖城58/47共3个材料的幼嫩叶片中提取DNA,使用PCR仪,建立了适合甘蔗PAPD分析的PCR条件,对115 个随机引物进行筛选,74个引物可获得甘蔗RAPD多态性,从中找到可用于鉴定该杂种的引物OPR-17,OPK-17和OPR-18.利用该法鉴定甘蔗杂种简单、迅速、可靠,DNA用量少,且不影响被检植株的后期生长.     

甘蔗杂种真实性鉴定研究综述

甘蔗是世界和中国最重要的糖料作物,甘蔗发展,品种是关键,而杂种鉴定是选育新品种的一个重要措施。在此,综述了甘蔗杂种真实性鉴定中常用的形态标记鉴定、细胞学标记鉴定、生化标记鉴定和目前比较先进的分子标记鉴定的研究进展,指出各种鉴定方法的优缺点,探讨遗传标记在甘蔗杂种鉴定研究中的应用前景。     

用RAPD标记鉴定甘蓝型油菜杂种H9909的纯度

通过对杂交组合H9909两亲本的指纹图谱分析，初选出4个引物S374、S1334、S1365和UBC523用于杂种纯度鉴定。引物S1334和UBC523在两亲本中均扩增出特异带，引物S374和S1465能扩增出父本标记带。以两亲本和手工杂种F1为模板对上述4个引物再一次进行RAPD扩增，S1334并没有在F1的RAPD图谱产生理想的双亲型或偏父型标记带，UBC523在F1扩增得到的父本标记带和在母本中扩增的标记带大小相近，不易辨别；引物S374、S1365均能使F1扩增出父本的特异带，进一步确定引物S374和S1365可用于杂种鉴定。引物S374的RAPD标记将待鉴定100个单株中的5个不育单株标记为假杂种，与田间育性调查的结果完全一致。引物S1365的RAPD分析结果显示，除上述5个不育单株外，另外2个可育单株亦为假杂种，可能由外来花粉串粉或机械混杂引起。     

应用RAPD标记鉴定苦瓜杂种纯度

以苦瓜杂交种“闽研2号”及其亲本为材料,利用RAPD标记技术对苦瓜杂交种的多态性进行分析.结果表明:在供试的200条RAPD引物中,筛选出1个引物S115能区分杂交种及其亲本种子.利用互补型RAPD引物S115对苦瓜杂交种“闽研2号”的纯度进行了快速鉴定,结果与田间鉴定结果一致.     

应用RAPD技术快速鉴定樱桃番茄杂种纯度

筛选出应用于樱桃番茄种子纯度鉴定的引物,建立了杂交种子的RAPD指纹图谱.从27条引物中筛选出了18条用于樱桃番茄种子纯度鉴定的引物,其中4条偏母型引物、5条偏父型引物、4条互补型引物、2条特异型引物及3条缺失型引物.利用互补型引物S172鉴定21粒樱桃番茄种子纯度,其中有2个其他种子混杂,该种子纯度为90.48%.     

SSR分子标记在花生杂种鉴定中的应用

以24份花生材料为亲本,配制22个杂交组合,并利用40对SSR引物对24份亲本材料进行多态性筛选,运用多态性引物鉴定92个F1代杂种的真伪.结果表明,不同组合亲本间多态性差异较大,差异最大的两亲本(GT-C20-D和Tamrun OL07)的多态性引物比例为65%.SSR标记法鉴定出49个单株为真杂种;而田间表型鉴定出62个单株为真杂种,与标记鉴定结果差异较大.本研究证实利用分子标记鉴定真假杂种非常必要,且准确可行.同时,本试验证明40对SSR引物具有较高的多态性,可直接用于花生遗传多样性、杂种鉴定以及遗传图谱构建等的研究.     

用RAPD和SSR分子标记鉴定小金海棠F1代 杂种实生苗的研究

小金海棠(Malusxiaojinensis)具有多种抗逆特性,是苹果属植物中一种珍贵的野生种质资源。由于小金海棠具有无融合生殖特性,早期准确、快速、有效地鉴定其F1代杂种实生苗对于研究利用其众多抗逆基因具有重要意义。RAPD技术是现有鉴定果树杂种实生苗最为简单、快速和有效的分子标记技术,但RAPD技术本身存在一定的不稳定性。笔者对小金海棠和山荆子(M.baccata)F1代杂交实生苗79个单株进行了RAPD分析,并用SSR标记对RAPD标记的初步鉴定结果进行了进一步的验证。结果显示,RAPD标记鉴定出的杂种实生苗有72.2%得到SSR标记的证实。研究的结果还表明,“叠加”和“新带”两种RAPD带型,结合RAPD标记特异位点数可以为小金海棠F1代杂种实生苗提供可靠的鉴定依据。研究为利用RAPD技术早期快速鉴定果树杂种实生苗提供了新的信息和依据。     

RAPD鉴定番茄一代杂种遗传纯度的研究

以番茄优良一代杂交种毛粉８０８、毛粉８１８和强选一号为材料,提取ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ分析,在３００个ＲＡＰＤ随机引物中筛选出了可鉴定３个品种一代杂种遗传纯度的特异性引物。其中Ｓ１０１９,Ｓ１３８８和Ｓ１４２２可用于这３个品种的纯度鉴定;Ｓ１０７２用于毛粉８０８和毛粉８１８的纯度鉴定;Ｓ１３８８用于区分３个品种的父本和子代。     

RAPD技术鉴定苦瓜杂种一代的研究

利用RAPD技术对苦瓜杂种一代顶优苦瓜及其父母本的特异性进行分析,结果引物OPU19扩增的OPU19-1600bp片断在父本和F1中出现,在母本中不出现;对该一代杂种的F2、B1、B2代进行的遗传分析表明:OPU19-1600bp片断可能与父本的某一对基因连锁,在F2、B1、B2代中符合孟德尔一对显性基因的分离规律,从而证实其可用于区分杂交种与母本的自交种。     

RAPD分子标记在猕猴桃种质资源鉴定上的应用

采用RAPD技术对15种猕猴桃种质资源进行鉴定．结果表明，材料选用1年生休眠枝条，取刚展叶1～2d的幼叶，用改良CTAB法提取DNA较好；在所选的引物中，S21对11个品种中的7个样品的RAPD指纹图谱鉴定效果较好，可以以此作为鉴定小果甜、华光2号、海沃德等品种的特征指纹图谱，并将其中的7个品种分成2组，一组为大扩增片段组，包括小果甜、华光2号、海沃德．第2组为小扩增片段组，包括华美2号、金魁、米良1号、徐香，海沃德被划分到了大片段组即中华猕猴桃组内．S130扩增带数较多，可作为至少6个以上猕猴桃品种资源鉴定中的特异性引物，S269，S218引物也都有特异的带谱，但特异性不很强。     

RAPD技术在鞘翅目昆虫中的应用概况

随机扩增多态性DNA(RAPD)技术因其检测效率高、简便、灵敏等特点,近年来,被广泛应用于昆虫系统学研究中.作者通过对国内外十多年来的相关资料进行整理,对鞘翅目昆虫的RAPD研究进行综述.表明在鞘翅目中,利用RAPD进行过研究的科级单元在国外有步甲科、象甲科等7个科,涉及上百种昆虫;而国内仅对3科的少数种类进行过研究.研究内容包括近缘种的分类、不同地理种群的起源和演化、种间亲缘关系及遗传多样性等方面.     

利用AFLP技术鉴定玉米自交系及杂交种

AFLP技术是一种非常有效的分子标记技术，但由于在品种鉴定方面的研究较少，限制了该技术在品种产权保护和真实性鉴定中的应用。本文对适合玉米自交系及杂交种鉴定的引物组合进行了筛选，通过对42种引物组合的试验，选出MGA EGAG和MGAA EGA两组引物组合多态性强、谱带多、质量高，能有效地区分不同材料。研究中还发现随引物选择碱基的增加，扩增的谱带数有降低的趋势，多态性有增加趋势。3 2引物组合比2 3引物组合扩增谱带数有明显降低。这些变化趋势可以作为其它作物引物组合选择的参考。     

甜瓜种质RAPD体系的优化研究

研究了不同ＤＮＡ提取方法的护增效果。采用Ｌ９（３＾４）正交试验设计,快速、有铲地确定了适合甜瓜的最佳扩增条件（包括ｄＮＴＰ、引物、Ｍｇ＾２＋和ＴａｐＤＮＡ聚合酶等浓度的最佳组合）。并通过试验确定了省时的ＲＡＰＤ－ＰＣＲ反应程序。最终得到了一个重复性好、清晰度高、较理想的甜瓜ＲＡＰＤ技术体系。     

RAPD在油用向日葵自交系鉴定和遗传分析中的应用

利用RAPD标记对8个油用向日葵自交系进行了鉴定和遗传分析。从40个UBC引物中筛选出12个能产生稳定遗传多态性的引物，利用其中3个引物提供的RAPD标记可将8个自交系逐一加以鉴别。12个引物对8个自交系共扩增出41条带，其中39条（占95．1％J）具有多态性，每个引物可扩增出1－7条带，平均为3．4条带，不同自交系之间的RAPD遗传距离在0．13－0．85之间，平均为0．42。按UPGMA方法可将8个自交系聚为2大类、4个亚类。     

甘蔗×斑茅远缘杂种的鉴别

本试验采用染色体Giemsa—C带分带和过氧化物酶同工酶电泳频谱分析方法对野生种斑茅(Saccharum arundinaceum Retz.)与甘蔗的远缘杂交后代进行鉴别分析。结果表明,F_1代崖城73/07(2n=68)、崖城75/283(2n=68)染色体数组成为n+n型,染色体带型和同工酶谱均表现为父、母本综合型,崖城57/25(2n=110)、崖城73/512(2n=110)则分别与其母本相似。据此认为,4个待定材料中,仅前二者是真实的斑茅远缘杂交后代。 根据上述结果分析了斑茅对甘蔗育种尚无实质性贡献的原因,认为该野生种之育种性能与其染色体带型有关。最后,讨论了同工酶分析及染色体分带作为杂种鉴别方法的意义及其局限性。     

RAPD技术鉴定3种鲮的研究

以池塘养殖的鲮、麦鲮各１２尾为材料,提取血液基因组ＤＮＡ,利用１０ｂｐ随机引物进行ＰＣＲ扩增,通过缩短扩增反映时间和电泳时间,快速鉴定３种不同的鲮值,建立了一套ＤＮＡ分子水平上的快速鉴定鱼种的方法。     

鱼类RAPD的影响因素及其最优反应体系的研究

在研究白鲢 /团头鲂遗传图谱时 ,对 RAPD反应中的模板浓度、引物浓度、d NTPs浓度、镁离子浓度等影响反应结果的因素进行了系统分析 ,并在些基础上建立了适于实验室 RAPD研究的最佳反应体系 :2 5μL反应体系中 ,含 1 0mmol/L Tris-HCl ( p H 8.0 )、 1 0 mmol/L KCl、 8mmol/L ( NH4) 2 SO4、 2 mmol/L Mg Cl2 、 0 .0 5%NP-4 0、 0 .2 mmol/Ld NTP、 1 5ng引物、 2 0 ng模板、 1 .5U Taq DNA聚合酶。热循环参数为 :95℃预变性 3 min,然后 94℃变性 1 min,3 6℃退火 1 min,72℃延伸 2 min,共 4 0个循环 ,最后 72℃延伸 6min。     

渝糯系列玉米杂种遗传纯度的RAPD鉴定

为了建立一套快速准确的玉米杂种纯度鉴定技术,本研究以渝糯系列5个玉米新品种及其亲本为材料,进行RAPD标记分析。从260个随机引物中,筛选出3个扩增带稳定清晰且为双亲互补型的特征引物,可用于渝糯系列杂种纯度的快速鉴定。