兔出血症研究

一种新的病毒病-兔出血症（Rabbit Haemorrheagic Disease,RHD）已被确认,其病原-兔出血症病毒（RHDV）首次在中国得到鉴定,RHDV为二十面体的小病毒,直径32-34nm,无囊膜,浮密度1.36-1.38g/cm#+3,沉降系数162 S。核酸为ssDNA,线性,分子量2.4×10#+(6)d,碱基的mol%为C=23.7、G=20.5、T=31.9、A=24,G+Cmol%为44.2,含4条结构多肽,分子量为VP#-(1)58-60kd、VP#-(2)54.7kd、VP#-(3)51-53kd和VP#-(4)26kd,能凝集人红细胞,抵抗乙醚、氯仿,对pH3和50℃60分钟稳定,能形成核内包涵体。据此,该病毒似可归于细小病毒属,为该属的一个新的有特殊个性的成员。该病为一种急性烈性传染病,只侵害成年家兔,在易感兔中传播迅速,发病率和死亡率均极高,常引起毁灭性流行,人工接种多于24-72小时内死亡,以全身性出血和多发性血管内凝血为主要特征。临床诊断的流行病学特点为：急性猝死,肺严重出血,肝充血、出血和坏死。用肝、脾等匀浆或血清作血凝（ HA）和血凝抑制（HI）试验即可确诊该病。脏器甲醛灭活疫苗能在3-4天内控制该病流行,免疫血清效果亦佳。由于预防接种、正确诊断和综合防治措施的贯彻执行,该病在我国已基本得到控制。     

兔出血症的研究

从呼和浩特市郊区分离1株兔出血症病毒,命名NM株,对其进行了病毒理化、生物学特性检测,并研究了应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症的方法。结果表明,病毒在兔体连续传6代,均出现典型症状及病理变化,是1株毒力稳定的强毒株,病毒粒子在电镜下呈球形,直径30.3nm,无囊膜,边缘有均匀排列的齿状突起,有实芯(占40.6％)和空芯(占59.4％)2种病毒粒子。还有少量形态不一、大小不等的类似病毒的粒子。用冷酚法提取的病毒核酸,经二苯胺显色及紫外扫描,证明为DNA。病毒的蔗糖浮密度为1.192g/ml,对氯仿、乙醚及胰蛋白酶不敏感,耐酸(pH5、pH3)耐热(50℃、56℃、60min)。病毒对人的各型红细胞有高度凝集性。经氯仿、乙醚、酸(pHs、pH3),热(50℃、56℃ 60min)处理后血凝价不降或稍降,经胰蛋白酶处理后血凝价明显降低(降5个滴度)。37℃放置4h,4℃冰箱放置48h血凝价不降,4℃放置4～13d降低一个滴度,15d降2个滴度。兔体血清HI抗体滴度与保护力呈正相关,1∶40以上可以完全抵抗强毒攻击。用内蒙古生物制药厂生产的兔出血症组织灭活苗免疫兔,可以抵抗强毒的攻击。采用原代乳兔肾细胞、Vero及BHK_(21)传代细胞,培养病毒均未成功。应用SPA协同凝集试验诊断兔出血症,特异性和可靠性均好,可作为本病的1种快速诊断方法。     

兔出血症病毒的特性

从实验发病兔肝经过聚乙二醇葡聚糖硫酸钠(PEG-DS)二相分配法和蔗糖密度梯度离心提取和纯化兔出血症病毒。紫外测定呈典型的病毒紫外吸收曲线,260nm/280nm比值为1.33,1％的琼脂电泳检查呈一条带。负染电镜下观察,病毒无囊膜,二十面体立体对称,直径34—36nm,病毒子表面有直径5—6nm的壳粒32个。另外,电镜下还见到22nm左右的病毒颗粒。病毒在氯化铯中的浮密度为1.36—1.38g/cm~3,沉降系数为162S。琼脂糖电泳在pH8.3条件下,病毒子向阴极移动。     

兔出血症病毒结构多肽的研究

纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ,硝酸银染色显示８条多肽,分子量分别为８５．１,７１．２,６４．５,６１．４,５７．３,５４．０,２９．２,２８．１ｋＤ,免疫转印结果确认其中的６条多肽为病毒结构多肽,分子量分别为６４．５,６１．４,５７．３,５４．０,２９．２,２８．１ｋＤ且其相对百分含量分别为６５．８７,３．１７,３．９７,１０．３２,９．５２,７．１４％,表明分子量为６４．５ｋＤ的多态为病毒主要     

兔出血症病毒感染性克隆的优化

为避免细胞外转录步骤,使RHDV感染性克隆的转录和病毒拯救过程一步化,试验通过PCR反应在RHDV cDNA序列的5′端添加T7启动子核心序列,3′端添加具有自身切割功能的核酶核心序列.然后,将RHDV基因组的不同cDNA片段装配到pTVT转录载体中,构建了含有RHDV全长cDNA序列的重组质粒pTVT-RHDV.在转染能稳定表达T7RNA聚合酶的BHK细胞后,将收获的细胞培养物感染MA104细胞.分别用逆转录PCR、间接免疫荧光检测以及一步生长曲线等方法对拯救病毒进行了鉴定.结果表明,试验成功拯救出了RHDV,优化了RHDV感染性克隆的构建过程.     

兔瘟病毒结构蛋白的研究

本文用氯仿处理,PEG沉淀;超离,Sepharose 4B柱层析及蔗糖密度梯度离心等方法纯化了兔瘟病毒(RPeV)。电镜下观察到RPeV为无囊膜,大小为32～34nm。纯化了的RPeV通过SDS-聚丙烯酰胺连续梯度凝胶电泳进行多肽分析。发现RPeV多肽只有1条63～64kd主要结构蛋白组成。用SPF兔肝粉吸收后的抗RPeV抗体作免疫转印。证明这条多肽是RPeV所特有的。     

应用高效液相色谱分析兔出血症病毒核酸

本试验应用聚乙二醇(PEG)沉淀、有机溶剂抽提和差速离心等方法,提取和纯化兔出血症病毒。用核酸酶降解病毒子表面污染的核酸后,再抽提,得到病毒核酸,并经琼脂搪凝胶电泳-电洗纯化,得到高纯度的病毒核酸。应用高效液相色谱对提纯的病毒核酸分析结果表明,兔出血症病毒的核酸为ssDNA.它的碱基组成为:C23.7,G20.5,T31.9,A 24.0。它的G+Cmol％为44.2。     

兔出血热病毒单克隆抗体的研究

本文应用杂交瘤技术,将兔出血热病毒免疫的 BALB/C 小白鼠脾细胞与骨髓瘤细胞 SP_2/O 在PEG 存在下进行融合。杂交瘤细胞经 HAT 筛选,用间接 ELISA 法检测相应的阳性抗体。经三次克隆化及三个多月的传代扩大培养,获4株能稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,编号为84、83、44、19,其腹水滴度为1:1×10~(-5),1:1×10~(-4),1:1×10~(-5)及1:1×10~(-4)。经分类测定其免疫球蛋白均属于 IgG。亚类测定除44号属 IgG_(2a)外,其他均属 IgG_1。从阻断试验看,单抗的作用能被兔特异性抗血清所阻断,则证明84号腹水具有抗兔出血热病毒的特异性。应用 ELISA 法测定非标记抗体间对抗原的反应增值,说明83与44号间的反应增值很低,可能是识别同一个抗原决定簇,而84及19号则分别识别其他两个不同的抗原决定簇。同时也讨论了单克隆抗体发展的远景。     

小苍兰病毒病初步研究 Ⅰ.症状及病毒粒体形态观察

对三个品种共九个类型的小苍兰小苗观察的结果表明,各类型小苗在长出3～5天后,就能从叶片上看到明显的病毒病类症状。开始多为小方块形或长条形斑驳,后逐渐转变为不规则花叶,叶片微皱。少数产生坏死条斑。具明显症状的样品占各品种观察总数的比例分别为:“Royal Blue”占63.5％,“Rose Marine”66.3％,“Red Lion”21.6％,都相当高。取“Royal Blue”新球类幼株全部样品和“Rose Marine”子球类幼株全部样品电镜观察,结果是52个样品中检出病毒样品49个,占94.23％。其中,46个全部为单一的线状粒体,其余3个为线状与球状粒体同时存在。表明在该批供试小苍兰中,病毒以线状病毒为主,少数为线状病毒与球状病毒复合侵染。文中简要综述了国内外的小苍兰病毒病研究的基本情况和新进展,并提出了应进一步研究的几个问题。     

萝卜病毒病与过氧化物酶关系的初探

萝卜接种TuMV病毒后过氧化物酶活性和同功酶电泳研究表明:萝卜对芜菁花叶病毒的抗性与叶片中过氧化物酶活性呈显著正相关。抗病的萝卜材料不管是否接种TuMV,过氧化物酶活性都明显高于感病植株。抗病萝卜最高达215.58酶活单位,感病萝卜最低的只有97.59酶活单位;前者比后者高121.13％。感病萝卜不接种病毒时,叶片中过氧化物酶活性很低。接种病毒后增加较多,但绝对数值还低于抗病萝卜。抗病萝卜叶片中过氧化物酶同功酶带宽于感病萝卜。初步认为过氧化物酶变化是萝卜抗病毒病的内在因素之一。     

种传赤豆花叶病毒的研究简报

引言赤豆花叶病是我省江淮地域广大赤豆栽培区一类重要的流行性病毒病害,其发生率80—100%,对生产威胁较大,对于该类病害的研究,我国以往文献报道较少,有关赤豆花叶病毒(Adzuki—been mosaic virus AzMV)由松本(Matsumoto,1922)首次于日本报道,继而大谷(大谷吉雄,1942)报道AzMV不能汁液传染。1956年田杉与福田(田杉平司,福田兼四郎,1956)通过研究认为AzMV可以汁传。日野的研究进一步确定AzMV     

兔出血症病毒（RHDV）及其免疫复合物在兔体内的动态分布

用RHDV人工感染易感兔,每隔4小时剖杀一组,整个病程大多为24小时,且病变典型.血凝试验查得,主要脏器病毒出现时间顺序是肝(攻毒后12小时)、脾、心、肾(16小时)、肺(20小时);病程后期,病毒含量从高到低依次为肝、脾、肺、肾、心。免疫荧光间接法检查感染兔各脏器,发现病毒经肌注兔体后4小时,即可定位于肝细胞,并在肝细胞核内复制增殖;兔感染病毒后16小时,在肝、脾、肾小球中可检出有免疫复合物沉着或抗体附着。电镜检查,肝细胞核内发现有病毒粒子,直径为25～30nm,细胞结构破坏严重。作者认为,RHDV 是一种 DNA 病毒;免疫复合物引起的免疫损伤及肝细胞结构、功能被破坏是兔发生病毒性出血症的重要原因。     

脱毒马铃薯田间再度罹病规律研究

脱毒马铃薯投放大田后重新感染病毒病.其重新罹病的程度、速率和大田连续种植代数、海拔高度等密切相关.在海拔2000m左右的地区,脱毒薯的有效种植年限至多为3代;当海拔升至2400～2700m,到第3代时,病情指数低于5%,可保持高产,若连续种植5～6代,则病情剧增,丰产性丧失;在海拔2800m的农区,重新感病速率接近于零.因此在高寒农区设置原种繁殖基地,并建立梯级循环繁种供种体系,是保持其高产势能的有效措施.     

番木瓜环斑病毒的提纯研究

详细报道了影响番木瓜环斑病毒（ＰＲＶ）粗提纯效果的几个主要因素（繁殖寄主种类，有机澄清剂，分散剂，病毒浓缩前的去渣离心力，浓缩病毒的超离心力等）的最佳选择，繁殖寄主以角葫瓜最好。该研究综合上述最佳选择而拟定的一次差速离心和一次３０％蔗糖硫酸连续密度梯度离心３ｈ的简单程序较好地提供了ＰＲＶ提纯的病毒有典型核蛋白紫外吸收曲线，Ａ２６０／Ａ２８０＝１．６８，提纯产量为２．５６ｍｇ／１００ｇ西葫芦病叶，所