木薯茎尖包埋-玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨装载时间、蔗糖浓度、预培养时间和PVS2处理时间对木薯种质超低温保存后成活率的影响.结果表明,长约1.5 mm的木薯茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有2 mol.L-1甘油和0.4 mol.L-1蔗糖的装载液装载30～40 min,然后在含有0.5mol.L-1蔗糖的改良MS培养基上预培养2 d,0℃下PVS2处理4 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻90 sec,用含有1.2 mol.L-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于恢复培养基中(MS 0.02mg.L-1NAA),暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近70%;再生植株生长和分化正常.     

柿休眠芽茎尖包埋玻璃化法超低温保存及植株再生

主要探讨蔗糖浓度、装载时间和PVS2处理时间对部分中国甜柿种质超低温保存后成活率的影响。结果表明,长约1 mm的柿休眠芽茎尖用海藻酸钙包埋后,在含有0.3 molL-1蔗糖的改良MS培养基(KNO3和NH4NO3减半)上预培养1 d,室温(25℃)下PVS2处理2 h后快速投入液氮(LN),1 h后取出,在40℃水浴中化冻1～2 min,用含有1.2 molL-1蔗糖的改良MS培养液洗涤20 min,接种于含ZT(玉米素)2.2 mgL-1、PVP(聚乙烯吡咯烷酮)600 mgL-1的改良MS培养基,暗培养3～5 d,转移至正常光下,最高成活率接近100%;再生植株生长和分化正常。     

菠萝茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

以菠萝为试材,建立试管无性系,进行玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,约2.0 ～3.0 cm的菠萝茎尖于含有0.Smol/L蔗糖的培养基上预培养l～2d,剥取含1～2片叶原基(1.0～2.5 mm长)的茎尖,室温(25℃)下用LS装载液预处理50min,再用PVS2溶液于0℃下处理40 min,换入新鲜的PVS2溶液后迅速投入液氪,保存24h后在40℃水浴中迅速化冻90 s,用1.2 mol/L的蔗糖培养液洗涤2次,每次10 min,然后转入含0.3 mol/L蔗糖的MS培养基上,暗培养48 h后转入含BA 0.5 mg/L的MS培养基上,暗培养1周后转移到正常光下,4个菠萝品种(澳大利亚卡因、夏威夷、巴厘、台农16号)的成活率分别为96.5％、95.3％、78.6％、87.7％,再生率分别为93.2％、92.6％、76.7％、87.7％.再生植株生长和分化正常,其形态上与对照一致,生根后可移栽成活.     

扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存的初探

[目的]研究包埋玻璃化法对扁桃休眠茎尖超低温保存的影响,为扁桃资源的超低温保存提供理论依据.[方法]采用不同预培养蔗糖浓度和预培养时间、不同装载液处理时间、不同玻璃化液处理时间及不同化冻方式对莎车14号扁桃休眠茎尖包埋玻璃化超低温保存存活率进行比较.[结果]将低温贮藏的扁桃休眠茎尖剥成1～2 mm,用3;的海藻酸钠包埋,在含0.4 mol/L蔗糖的0.1 mol/L CaCl2溶液中固定30 min后形成包埋丸,用含有0.5 mg/L蔗糖的MS培养基预培养3d,放入装载液(MS+2 mol/L甘油+0.4 mol/L蔗糖)中处理20 min,0℃下用PVS2处理30 min后迅速投入液氮,超低温保存24 h后取出,放入40℃水浴锅中化冻1～2 min,用1.2 mg/L蔗糖的MS洗涤液洗涤20 min,转入含0.3 mg/L 6-BA和0.3 mg/L IAA的MS培养基中培养,存活率达45;.[结论]包埋玻璃化法能够提高莎车14号扁桃休眠茎尖超低温保存的存活率.     

冬凌草试管苗茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

对冬凌草[Rabdosia rubescens(Hemsl.)Hara.]试管苗茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究。结果表明:1～2cm嫩梢在培养基MS+0.5mol/L蔗糖上培养3d,切取2～3mm茎尖,室温(20℃)下装载液(60%PVS2)过渡30min,0℃下玻璃化液(PVS2)处理45min,投入液氮保存1d后,40℃水浴化冻,1.2mol/L蔗糖的MS培养基洗涤20min,接种于6-BA0.8mg/L、IAA0.05mg/L的MS培养基上,暗处理1周后转到正常光下,成活率达到86%,再生植株生长和分化正常。     

越橘离体茎尖包埋玻璃化超低温保存

为越橘种质资源保存提供新途径,试验研究了越橘组培苗茎尖包埋玻璃化法超低温保存方法。结果显示适宜的条件包括：剥取顶芽茎尖（长1.0～1.5 mm）,在（25±2）℃黑暗条件下预培养1 d;使用移液枪吸取茎尖与藻酸盐溶液,滴入氯化钙溶液中形成包埋球（直径4 mm）;包埋球在加载液中加载1.5 h（室温）;包埋球转入PVS2溶液处理4 h(0℃);将装有包埋球的冷冻管投入液氮保存1 h;取出液氮中的冷冻管迅速转入37℃水浴锅中解冻1～2 min,在室温下取出包埋球,在卸载液中卸载20 min;卸载的茎尖在再生培养基上（25±2）℃黑暗培养5 d;之后在正常光照条件下培养30 d。所测试的8个越橘基因型平均再生率为57.9%,最高再生率为78.5%,最低为41.7%。     

欧李茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

对欧李(Cerasus humilis)茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究,结果表明,预培养对欧李茎尖超低温保存有一定的影响,茎尖在含有0.5 mg.L-1BA和2 M甘油的B 5培养基上室温(25℃)下预培养3 d成活率最高;最佳预处理时间为60%PVS2处理10~20 min,玻璃化液(PVS2)处理时间为0℃下60 min.在优化的保存条件下,植株再生率达83.9%,再生植株生长和分化正常.这是欧李超低温保存成功的首例报道.     

柿休眠芽茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生

 对柿 (DiospyroskakiThunb .)休眠芽茎尖进行了玻璃化法超低温保存及植株再生研究 ,结果表明 ,1.5～2 .0mm茎尖在含有 0 .3、0 .5和 0 .7mol·L-1蔗糖的改良MS培养基 (KNO3 和NH4NO3 减半 )上预培养各 1d ,室温(2 0℃ )下装载液 (2mol·L-1甘油 ,0 .4mol·L-1蔗糖 )停留 2 0min ,0℃下玻璃化液 (PVS2 或PVS3 )处理 30～ 4 0min ,投入液氮保存 1d后 ,4 0℃水浴化冻 1min ,含蔗糖 1.2mol·L-1的改良MS培养基洗涤 2 0min ,接种于含 0 .2mg·L-1CPPU、1mg·L-1BA、0 .0 5mg·L-1IAA、5 0 0mg·L-1可溶性PVP、30g·L-1蔗糖和 7g·L-1琼脂的改良MS培养基 (再生培养基 )表面的滤纸上 ,暗处理 1d后转移到新鲜的上述再生培养基中 ,暗培养 1周后转到正常光下 ,成活率高达 70 .2 % ,再生植株生长和分化正常。本研究结果为柿种质的长期保存提供了新途径。     

树莓茎尖玻璃化法超低温保存及植株再生研究

为了建立适于树莓茎尖的超低温保存技术程序,试验以树莓茎尖为试材,对树莓玻璃化法超低温保存进行了研究。结果表明适于树莓的超低温保存技术流程是先低温驯化21d,在含0.8mol/L蔗糖的固体培养基预培养4d,再经玻璃化液(PVS2)处理120min后浸入液氮,解冻后茎尖存活率达75%。     

高山红景天愈伤组织的玻璃化法保存及植株再生

采用玻璃化法对高山红景天的愈伤组织进行了超低温保存研究.高山红景天愈伤组织在8%蔗糖中暗培养5 d后,先用25℃的60%玻璃化保护剂PVS2预处理20 min,转至100% PVS2于-20℃乙醇浴中处理2 h后,投入液氮进行保存,48 h后使用40℃水浴快速化冻.冻存后的愈伤组织用液体培养基MS+6-BA 2 mg/L+NAA 0.5 mg/L+40%蔗糖洗涤3次,再转入MS+6-BA 2mg/L+NAA 0.5 mg/L固体培养基中在22℃条件下进行暗培养,2周后转入光照培养（光照强度800 lx）. 6周后观察到高山红景天愈伤组织呈鲜绿色,长势较为旺盛,存活率可达到78.24%.冻存后的愈伤组织可诱导成苗.      

高山红景天花粉形态观察

利用扫描电镜对高山红景天花粉进行了观察,结果表明:来自长白山与大兴安岭的高山红景天花粉的外形、大小较为接近,花粉表面纹饰均呈不规则排列,且纹饰间存在较大的间隙,但无孔隙;两种来源的高山红景天花粉表面纹饰的分叉与交叉的程度则存在较大的差异,来自长白山的花粉表面纹饰分叉与交叉情况比来自大兴安岭的花粉更为复杂,这些花粉表面微观形态的差异将为高山红景天种质资源来源的鉴定提供依据。     

高山红景天花器的解剖结构研究

以栽培高山红景天花为材料,采用石蜡切片技术观察了不同性别高山红景天花器的解剖结构,结果表明:不同性别高山红景天花器的解剖结构有所不同,且雌花和两性花的子房内均有数目不等的胚珠发育,而雄花子房内无胚珠发育.     

高山红景天不同性别植株形态的比较研究

[目的]进一步了解高山红景天不同性别间的形态特点。[方法]以栽培高山红景天和野生高山红景天为材料,进行高山红景天不同性别植株形态的比较研究。[结果]结果表明,高山红景天不同性别间形态有一定的差异,株高雌株略高于雄株,主茎叶片数雄株多于雌株．叶片形态雄株比雌株狭长且薄、两性植株叶片较宽,茎粗雄株比雌株细,茎数雄株明显多于雌株,地下部根茎粗、根茎长和根茎数等性状雄株均大于雌株。[结论]该研究为高山红景天的性别分化机理、组织培养和遗传育种研究提供基础理论依据。     

冰冻切片技术在高山红景天细胞学研究中的应用

为了解决利用普通石蜡切片观察植物样品需要进行脱水、浸透、包埋操作且耗时长的问题,以高山红景天为试材,对其根和茎进行冰冻切片,过程简单有效且图版清晰,在1d内即可获得高质量图片。冰冻切片的关键步骤是选择合适的甘油浓度、切片时采用的温度及展片技术。     

高山红景天不同继代愈伤组织中红景天甙含量研究

[目的]研究在离体培养条件下红景天甙合成的特征。[方法]以高山红景天的种子和试管苗的茎、叶为外植体诱导愈伤组织,继代培养6次,测定每代愈伤组织中红景天甙的含量。[结果]以不同部位作为外植体诱导的愈伤组织中所含红景天甙的含量不同,茎诱导的愈伤组织中红景天甙含量最高,达6．2100mg／g,其次为种子诱导的愈伤组织,以叶为外植体诱导的愈伤组织中红景天甙含量最小。仅0．9968mg／g;红景天甙的含量在各继代培养的愈伤组织中的含量不同,在1～2代较低,3～5代最高,第6代明显下降。[结论]高山红景天中红景天甙含量与外植体和继代次数有关。     

高山红景天不同性别植株花器形态的比较

[目的]进一步了解栽培高山红景天花器的形态结构。[方法]对高山红景天不同性别植株的花器结构进行较为详细的比较研究。[结果]结果表明,高山红景天是多型的性别类型,有雌株、雄株、雌雄同株。雌雄同株是雄花、两性花同株类型,即一个植株的不同茎上着生雄花和两性花两种花序,两性花的花序中也有不同比例的雄花和两性花;高山红景天雌蕊心皮数目4为基本型,雄蕊花药数目8为基本型,两性花的雌蕊心皮和雄蕊花药数目都比单性花少的变异类型多。[结论]该研究为今后进一步进行高山红景天性别分化机理、性别利用、生殖生物学等方面的研究提供了可靠的理论依据。     

高山红景天叶片愈伤组织诱导与植株再生

以高山红景天叶片作为外植体,研究了影响愈伤组织诱导、芽增殖、生根的主要因素。结果表明:高山红景天叶片切块诱导愈伤组织的最佳培养基为MS 6-BA 2mg/L NAA0.5mg/L,诱导率达88.33%;高山红景天叶片切块经诱导可产生3种色泽的愈伤组织,其中只有绿色愈伤组织诱芽容易,绿色愈伤组织在附加1mg/L6-BA 0.1mg/LNAA的MS培养基中有利于芽的分化和增殖,培养7周左右,平均每个外植体分化形成的再生小植株数达到21.33个;增殖苗转入1/2MS培养基中生根率高达100%。     

植物激素对高山红景天试管苗愈伤组织再分化的影响

以高山红景天试管苗叶片为外植体,研究植物激素浓度对高山红景天再分化的影响,比较诱导培养基和分化培养基植物激素对愈伤组织分化的影响,结果表明:高山红景天试管苗叶片愈伤组织再分化与植物激素浓度关系较大,在0.5 mg/L NAA 0.5 mg/L 6-BA配比的诱导培养基上诱导的愈伤组织均在提供的3种分化培养基上分化率最高;MS 0.5 mg/L NAA 5.0 mg/L 6-BA的分化培养基对不同诱导培养基来源的愈伤组织均表现较高的分化率.     

高山红景天GH3基因克隆及序列分析

参照已知植物GH3的氨基酸序列,通过比较找出相对保守的氨基酸序列设计简并引物,通过RT-PCR和RACE法得到高山红景天GH3的3'端,其长度838bp,编码200个氨基酸的602 bp位于GH3的开放阅读框内和一段长36bp的3'非编码区(3'UTR).序列比较结果表明,GH3推导的氨基酸序列与已公布的几种植物GH3氨基酸序列有较高的序列同源性.