DNA微阵列与基因表达研究概况

DNA微阵列技术是 90年代兴起的一种对成百上千甚至上万个基因同时进行检测的新技术 ,它具有高通量和并行化的特点 ,广泛应用于基因表达、预测基因功能、检测基因突变和多态性分析、发现新药物和药物靶器官以及疫苗设计等方面。文章对 DNA微阵列的基本原理、DNA微阵列制备技术、杂交信号检测以及数据分析。 c DNA微阵列与细胞周期相关基因表达、细菌基因表达、病毒基因表达、肿瘤基因表达进行了概述。     

单细胞凝胶电泳技术在临床兽医学中的应用

单细胞凝胶电泳技术是一种简便、快速、灵敏的检测真核细胞DNA损伤与修复的方法.其基本原理是将单个细胞包理于琼脂糖凝胶中进行裂解、电泳、荧光染色和显微镜观察,细胞DNA损伤产生的断链或碎片在电泳中迁移形成典型的"慧星"图像,根据迁移长度和荧光强度即可定量分析DNA损伤的程度.该文总结了该实验技术的基本原理、检测方法及其在临床兽医学中的应用前景.     

瘤胃微生物总DNA快速提取法研究

本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取植物的CTAB法进行改进而成。与经典反复冻融 SDS/蛋白酶K裂解法相比,该法可在数小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA,经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行检测,证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求。     

瘤胃微生物总DNA快速提取法研究

本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法,该法是对提取植物的CTAB法进行改进而成.与经典反复冻融＋SDS/蛋白酶K裂解法相比,该法可在数小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA,经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行检测,证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求.     

绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究

本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。     

合肥研究院发现全氟辛烷磺酸能诱导DNA损伤和基因突变

<正>全氟辛烷磺酸(PFOS)是目前应用最广的全氟化合物之一,同时也是引起环境污染最典型的持久性有机污染物。中国科学院合肥物质科学研究院技术生物与农业工程研究所环境毒理与生态研究室许安课题组利用gpt delta转基因鼠突变检测系统,发现PFOS能诱导DNA损伤以及基因突变。上述研究成果已被国际环境科学期刊En vironmental sciencetechnology(2015;DOI:10.1021/acs.est.5b00530)接受发表。     

单细胞凝胶电泳检测家蚕冷冻精子的DNA损伤

采用单细胞凝胶电泳法检测家蚕冷冻精子DNA损伤,结果未加冷冻保护剂(含10%DMSO的Grace s me-dium)的部分精子SCGE图呈明显的彗星状,其DNA损伤程度达56%,与对照组相比差异显著,表明DNA受到了一定程度的损伤;而添加冷冻保护剂的精液无论在-80℃下保存4个月还是在液氮中保存1年,其精子的SCGE图仍然呈圆形,DNA损伤程度与对照无显著性差异。     

化学发光法检测苯甲酸钠对DNA损伤的保护作用

应用化学发光法检测了在菲咯啉- 铜 -维生素 C- 双氧水 DNA ( Phen- Cu2 VitC- H2O2- DNA)体系中苯甲酸钠对 DNA 损伤的保护作用。结果表明,苯甲酸钠对 DNA损伤有很好的保护作用,能明显抑制和延迟 DNA的化学发光,且其作用随着苯甲酸钠浓度的增大而加强。     

杜仲提取物对小鼠淋巴细胞DNA损伤的研究

应用单细胞凝胶电泳技术检测杜仲提取物对小鼠淋巴细胞的损伤.结果,高剂量组(0.69g/kg)、中剂量组(0.345g/kg)、低剂量组(0.173g/kg)拖尾率、DNA平均迁移长度和DNA损伤程度与阴性对照组(生理盐水)比较无显著差异(P＞0.05),与阳性对照组比较差异显著(P＜0.05).结论:杜仲提取物不引起淋巴细胞DNA损伤.     

一种改进的方法提取白头鹤粪便DNA

现有的粪便DNA提取方法通用性不好,DNA纯度不高不适用于白头鹤等水鸟,本研究探索一种改进的硫氰酸胍裂解法。通过线粒体DNA细胞色素b、控制区基因和微卫星DNA的PCR扩增及线粒体DNA控制区序列的测定,经琼脂糖凝胶电泳检测以及测定序列显示,提取的DNA模板纯度高,效果很好,证实改进方法的可靠性、有效性。为其他濒危水鸟的非损伤取样提供了新的材料和方法,为其保护遗传学的研究提供一定的新技术。     

霉菌毒素对多种细胞DNA损伤的研究进展

霉菌毒素广泛存在于饲料原料和人类食品中,会对动物和人类健康造成严重威胁,也会对经济效益产生负面影响。霉菌毒素影响细胞的生长,通过增加细胞内活性氧含量造成氧化应激,对细胞DNA造成损伤。本文在国内外已有研究的基础上,对霉菌毒素对肠、肝、肾和神经细胞DNA破坏作用进行综述。     

高氟低碘对老年大鼠肺脏细胞DNA损伤的影响

研究高氟低碘对老年大鼠肺脏细胞DNA损伤的影响。健康离乳Wistar大鼠21只,随机分为4组：对照组（5只）,饲喂大鼠标准日粮,饮自来水;高氟组（5只）,饲喂大鼠对照日粮,饮100 mg/L氟化钠（NaF）去离子水;低碘组（5只）,饲喂低碘日粮（定做）,饮去离子水;高氟低碘组（6只）,饲喂低碘日粮,饮100 mg/L氟化钠（NaF）去离子水。在大鼠20月龄时,处死采取肺脏组织,检查其DNA的损伤情况。高氟组、低碘组和高氟低碘组的老年大鼠肺细胞拖尾率比对照组显著增高（P＜0.01）,高氟低碘组大鼠肺细胞拖尾率比高氟组、低碘组高,并且均有差异显著性（分别为P＜0.01和P＜0.05）;高氟组、低碘组和高氟低碘组老年大鼠肺细胞的拖尾长度比对照组显著增长,显著性差异分别为P＜0.01、P＜0.05 和P＜0.01。高氟低碘组大鼠肺细胞的拖尾长度比高氟组及低碘组增长,与低碘组有差异显著性（P＜0.01）,但与高氟组差异不显著（P＞0.05）;高氟组和高氟低碘组老年大鼠肺细胞DNA损伤主要是Ⅲ级损伤（Ⅲ级分别为70.00%和79.31%）。低碘组的肺细胞DNA损伤进入Ⅱ级和Ⅲ级范围的比较多,并且Ⅲ级占有率较高（Ⅱ级为31.25%;Ⅲ级为40.62%）。结果表明,高氟、低碘、高氟低碘都影响了大鼠肺脏细胞的DNA损伤。     

改良彗星实验检测黄曲霉毒素B_1致雏鸭DNA损伤

试验旨在通过改良彗星实验检测黄曲霉毒素B1(aflatoxi-B1,AFB1)对雏鸭肝细胞DNA损伤的影响.锥鸭经AFB1灌胃染毒,2 h后分离肝细胞,并通过改良彗星实验测定DNA损伤.结果显示,AFB1能够导致雏鸭肝细胞DNA损伤,表现为尾长、尾部DNA百分含量、尾矩、Olive尾矩等彗星参数与空白和溶剂对照组相比显著增加(P<0.05).表明改良彗星实验能够用于AFB1导致肝细胞DNA损伤的检测,试验还提示,在体肝细胞彗星实验能够作为雏鸭AFB1暴露的遗传毒性标志物.     

氯化钴通过诱发DNA氧化损伤抑制猪卵泡颗粒细胞增殖的研究

旨在探究氯化钴（CoCl₂）诱导的DNA氧化损伤对猪卵泡颗粒细胞增殖的影响。本研究选取猪卵泡颗粒细胞作为试验材料，使用化学性低氧模型诱导剂CoCl₂处理猪卵泡颗粒细胞建立缺氧模型。前期研究已确定CoCl₂最适处理浓度，用200 μmol·L^-1 CoCl₂处理猪卵泡颗粒细胞12 h，将培养出的传代细胞分成4组处理，分别为：对照组、CoCl₂诱导缺氧处理组、GSH处理组、GSH+CoCl₂联合处理组。对照组为完全培养基培养12 h，CoCl₂诱导缺氧处理组给予终浓度200 μmol·L^-1 CoCl₂的培养基培养12 h，单独GSH处理组加入浓度为2 mmol·L^-1的GSH处理12 h，GSH+CoCl₂联合处理组加入200 μmol·L^-1 CoCl₂和2 mmol·L^-1的GSH联合处理细胞后培养12 h。12 h后检测各组细胞增殖活性、ROS水平、γH2AX蛋白活性水平和Oxo-8-G水平。采用CCK-8法检测其增殖活性；采用双氯荧光素（2’，7’-dichlorofluorescin diacetate，DCFH-DA）检测ROS水平；Western blot检测γH2AX蛋白活性水平，采用FITC荧光小鼠单克隆抗体检测Oxo-8-G水平。为了进一步明确CoCl₂诱导的颗粒细胞增殖阻滞与DNA氧化损伤的关系，本试验在CoCl₂处理的基础上添加抗氧化物GSH处理12 h后检测细胞增殖、ROS水平、DNA氧化损伤等相关指标。与对照组相比，200 μmol·L^-1 CoCl₂处理猪卵泡颗粒细胞后，细胞增殖活力极显著降低（P<0.000 1），缺氧组ROS水平极显著升高（P<0.000 1），γH2AX蛋白表达极显著升高（P<0.000 1），Oxo-8-G水平极显著升高（P<0.000 1）。与缺氧组相比，在CoCl₂处理基础上添加GSH后，ROS、Oxo-8-G、γH2AX水平极显著降低（P<0.000 1），并伴随细胞增殖活性的显著恢复（P<0.000 1）。CoCl₂可抑制猪卵泡颗粒细胞增殖活性，机制与诱导DNA氧化应激损伤有关。     

The Comet assay for detection of DNA damage in canine sperm

Sperm DNA integrity is a fundamental prerequisite in fertilization and embryo development. Among DNA integrity tests, the Comet assay is an accurate and sensitive test for the detection of sperm oxidative damage. The aim of this work was to evaluate sperm oxidative damage using the Comet assay and to study the correlation between Comet and routine assays for the evaluation of semen quality. Dogs were divided in two groups: group A (n = 6), comprising dogs with abnormal spermiogram, that is astheno‐, terato‐ or oligoasthenoteratozoospermic (OAT); and group B (n = 8), comprising normospermic dogs. The distribution of sperm oxidative damage was significantly different between the two groups (p = .001): group A—median: 31.55%, interquartile range (IQR): 30.18–38.01; group B—median: 0.90%, IQR: 0.65–1.96. The correlation between oxidative damage and abnormal morphology was high (r = .846; p < .001). There was a negative correlation between progressive motility and oxidative damage (r = ?.792; p = .001). Basal and oxidative DNA damage of spermatozoa are increased in dogs with non‐normospermic semen. In conclusion, and considering the elevated correlation with classical tests of sperm quality, the Comet assay has ample potential for clinical and research purposes in dogs.     

DNA damage is a feature of feline injection‐site sarcoma

Feline injection‐site sarcoma (FISS) is commonly treated with surgery and radiation therapy. Despite aggressive therapy, FISS has a high recurrence rate. The true benefit of adjuvant chemotherapy is not known. DNA damage response mechanisms help protect against genomic instability but can also promote chemoresistance. In order to determine whether DNA damage is a feature of FISS, we evaluated tumour tissues with γH2AX immunohistochemistry. H2AX is phosphorylated to form γH2AX following DNA double strand breaks. Seventeen FISS specimens were evaluated prospectively. DNA damage ranged from 2.18 to33.7%, with a median of 16.2%. Significant differences were noted between cats (P < 0.0001). Mitotic index ranged from 0 to 57 with a median of 13 and did not correlate with γH2AX positivity (P = 0.2). Further studies are needed to determine if γH2AX expression may predict chemosensitivity and have independent value as a prognostic factor.     

F-2毒素致体外培养大鼠睾丸支持细胞DNA损伤

为探讨F-2毒素对雄性生殖机能的影响,取大鼠睾丸支持细胞进行体外培养,运用单细胞凝胶电泳技术检测51、0、20和40 mg/L的F-2毒素攻毒后24 h支持细胞DNA的损伤情况。结果显示,F-2毒素在一定浓度范围内对体外培养的支持细胞DNA产生损伤作用,且受损程度随着F-2毒素攻毒剂量而升高,具有明显量效关系。除5 mg/L剂量组外,其余各组的细胞受损率、彗星尾长和DNA损伤程度与阴性对照组相比差异极显著（P〈0.01）,表明F-2毒素对体外培养的大鼠睾丸支持细胞有毒性作用,能够损伤细胞DNA。