中华绒螯蟹多倍体的诱导研究I.细胞松驰素B诱导中华绒螯蟹三倍体和四倍体胚胎

采用细胞松驰素Ｂ（Ｃ．Ｂ）处理法，研究了诱导中华绒螯蟹（Ｅｒｉｏｃｈｅｉｒｓｉｎｅｎｓｉｓ）三倍体、四倍体的可能性和处理条件。实验所用Ｃ．Ｂ浓度为０．５～２．０ｍｇ／Ｌ，处理的起始时间分别在受精后１０～２５ｍｉｎ（诱导三倍体）和８．５～９．８ｈ（诱导四倍体），处理的持续时间为１０～２５ｍｉｎ。三倍体的适宜诱导条件为卵子在受精后１５ｍｉｎ，浓度为１．５ｍｇ／Ｌ的Ｃ．Ｂ溶液处理１８ｍｉｎ。三倍体诱导率最高可达５８．１８％。根据诱导三倍体的适宜Ｃ．Ｂ处理浓度和处理时间，用１．５ｍｇ／ＬＣ．Ｂ溶液处理卵子１８ｍｉｎ，获得了２９．４６％～５７．８９％的四倍体胚胎。另外，还对中华绒螯蟹三倍体、四倍体胚胎的诱导技术、诱导参数对胚胎发育的影响等有关问题进行了分析讨论     

人工诱导长牡蛎Crassostrea gigas（Thunberg）三倍体发生的初探

用细胞松弛素B（C.B)，抑制长牡蛎第二极体释放，药物诱导产生三倍体，对药物处理的浓度、时间、操作方法进行初步探讨。     

僧帽牡蛎三倍体和二倍体的生长比较↑（*）

１９９３ 年采用高温（３７ ℃） 休克处理受精卵１５ ｍｉｎ ,抑制第一极体排放诱导出僧帽牡蛎三倍体,在早期幼虫阶段,处理组幼虫平均壳长显著较对照组大,经过１ 年的养殖,三倍体壳长、壳高、软体部湿重和干重分别比二倍体增加１３ ．２ ％ 、８ ．９ ％ 、１２４ ．６ ％ 和８７ ．１ ％ 。１９９７ 年采用０ ．５ ｍｇ／Ｌ 细胞松弛素Ｂ 在５０ ％ 受精卵出现第一极体时处理受精卵１５ ｍｉｎ 诱导出僧帽牡蛎三倍体,经过１４ 个月养殖,三倍体壳长、壳高、体重和软体部湿重分别比二倍体增加３９ ．２６ ％ 、１７ ．２５ ％ 、７２ ．５０ ％ 和１１８ ．４２ ％ ,除个别月份外,三倍体和二倍体的生长差异显著（ Ｐ＜ ０ ．０５） ,僧帽牡蛎三倍体较二倍体具有明显的生长优势。     

合浦珠母贝三倍体的卵诱导四倍体

将合浦珠母贝三倍体的卵与二倍体的精子授精,用０．５μｇ／ｍＬ细胞松弛素Ｂ抑制精卵第一极体的释放诱导四倍体。研究了处理起始时间及持续时间对胚胎孵化率和四倍体诱导率的影响及幼虫的生长及存活。实验结果表明：持续时间与胚胎孵化率呈负相关,而与四倍体诱导率呈正相关,持续时间一般为１５￣１８ｍｉｎ,处理起始时间一般在第一极体出现前３￣５ｍｉｎ。在胚胎期,四倍体诱导率平均为２０％。在幼虫培养阶段,幼虫死亡严重,     

水产动物三倍体育种的研究进展

人工诱导三倍体的方法包括生物学方法(远缘杂交、核移植、细胞融合)、物理方法(温度休克法、水静压法等)和化学方法(使用化学诱导剂如细胞松弛素、咖啡因、秋水仙素等)。利用三倍体动物可以控制过度繁殖，加快生长速度等。     

砂海螂底播增养殖的研究↑（*）

在烟台北部沿海进行了砂海螂底播增养殖技术研究,选择风浪小、流速不大于０．１ｍ／ｓ的砂泥底质内湾海区。底播前应松动底表层,清除敌害。１０～１１月播放壳长１２ｃｍ的贝苗。经约３年的生长,平均壳长达７．３ｃｍ,平均个体重５０ｇ,存活率达１５％以上。     

皱纹盘鲍三倍体诱导条件及其室内饲育试验

皱纹盘鲍(Haliotis discus hannai)是我国重要的海洋经济贝类之一,近年来北方沿海已开展了人工养殖。但普通二倍体鲍需生长3—4年才能达到商品规格,养殖周期长。由于三倍体的不育性,其能量可全部用于生长,这对改善鲍的生长,缩短养殖周期有着积极的意义。有关鲍三倍体的研究起步较晚,在国外,Arai等[1986]、林崎孝志[1989]分别报道了用温度休克和静水压法及细胞松弛素B诱导皱纹     

长牡蛎三倍体诱导在生产的应用初探

用细胞松驰素B抑制长牡蛎第二极体释放，诱导产生三倍体，在生产中得以应用，并对药物处理的浓度、时间、操作方法进行探讨。     

日本珠母贝三倍体的产生

在日本珠母贝生产业,由于成熟的亲贝不宜于手术插核养殖珍珠,所以在施行插核之前需推迟亲贝生殖腺的成熟或促进生殖腺发育诱导排放精卵。已有报道珠母贝与其它食用双壳类一样在性成熟和产卵季节死亡率较高。因此,利用不育的珠母贝养殖珍珠有很大的前途,三倍体珠母贝是不育的,如三倍体扇贝(Argopecten irradians)(Tabarini,1984)和三倍体软壳蛤(Mya arenria)(Allen et al.,1986;Allen,1987a)性腺不成熟。用细胞松弛素B(也称CB)或物理因素(压力刺激或温度刺激)方法处理,已在软体动物中诱变出一些种类的三倍体(Longo,1972,1983;Stanley et al.,1981,1984;Allen et al.,1982;     

杂交鲍三倍体诱导技术研究

为研究杂交鲍的三倍体诱导技术,通过预试验,观察和了解23.5 ℃下杂交鲍受精卵第一极体和第二极体释放的时间。采用细胞松弛素B抑制第二极体释放的方法,分别在不同的诱导起始时间、诱导剂浓度及诱导持续时间下抑制第二极体的释放,测定鲍的三倍体率,进行了杂交鲍三倍体的诱导试验。试验结果表明:杂交鲍在水温23.5 ℃下,处理起始时间为20 min,诱导剂浓度为0.70 mg·L-1,诱导的持续时间为10 min时,表观三倍体率最高,达75 %以上。检查稚鲍的倍性,三倍体率达到66 %。     

不同方法制备的三倍体长牡蛎养殖效果的比较

比较了细胞松弛素B(CB)和6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)通过抑制受精卵极体释放的方法批量诱导三倍体长牡蛎的养殖效果.长牡蛎卵子在25℃的海水中受精,20～30min后,开始用浓度为0.5mg@L-1的CB处理,持续18～22min,受精卵处理密度为4.0～4.5×107个@L-1,三倍体产率为65.2%～70.1%,面盘幼虫孵化率为12.3%～14.5%,诱导效率指数为0.09.6-DMAP的使用浓度为400～420μmol@L-1,受精卵处理密度为3.0～3.5×107个@L-1,授精水温、处理起始和持续时间等与CB方法相同,三倍体产率为58.7%～65.4%,面盘幼虫孵化率为52.1%～55.4%,诱导效率指数为0.32.两种方法的采苗率基本相同,采苗器为基质较硬的栉孔扇贝贝壳.海区养殖采用浮筏夹苗吊养技术,两种方法诱导的三倍体牡蛎养殖性状没有明显差别.通过比较CB和6-DMAP两种诱导方法及三倍体的养殖效果表明,后者具有更好的应用性.     

微卫星标记在长牡蛎三倍体鉴定中的应用

为开发一种简单有效的倍性检测方法对长牡蛎三倍体诱导结果进行准确评估,本实验采用细胞松弛素B抑制第二极体释放诱导产生长牡蛎三倍体,选用7个微卫星位点扩增基因组DNA,通过亲子代基因分型进行倍性检测,检测结果采用流式细胞仪加以验证,以评估微卫星标记倍性检测的准确性。另外,本研究探讨了准确鉴定倍性所需的微卫星标记数量与微卫星—着丝粒重组率(y)之间的关系,以期为其他物种采用分子标记进行倍性检测提供理论依据。结果显示,细胞松弛素B诱导产生的115个长牡蛎子代经7个微卫星位点鉴定得到40个三倍体,与流式细胞仪检测结果一致,准确率达到100%,7个微卫星位点的(1-y)的乘积为0.005。随机挑选6个位点,也可鉴定出所有三倍体,(1-y)的乘积为0.005~0.042。研究表明,本研究中开发的微卫星标记可以简单高效地鉴定长牡蛎三倍体,微卫星位点的(1-y)的乘积小于0.005,倍性检测的准确率可达100%,采用微卫星标记进行倍性检测对于加速长牡蛎三倍体育种进程具有十分重要的意义。     

矮小蛤的性别确定和多倍体的巨型性

通过雌核发育和用紫外线光照过和精子与卵受精及随后用ＣＢ处理和抑制ＰＢⅡ的释放都成功地诱导生产雌的和三倍体的矮小蛤。进一步处理结果显示矮小蛤可能有Ｙ显性化的ｘｘ－雌，ｘｙ－雄的性别确定，与二倍体相比，三倍体有一定的生殖力，雌性为５９％，雄性为８０％，三倍体雌性产生的卵的容量比二倍体雌性的卵容量大５３％（Ｐ〈０．００１）。     

细胞松弛素B诱导菲律宾蛤仔四倍体的初步研究

采用不同质量浓度的细胞松弛素B抑制第一极体的释放,诱导菲律宾蛤仔四倍体,观察诱导各组胚胎的早期发育过程,结果表明,0.5、0.7mg/L及1.0mg/L的细胞松弛素B均能有效抑制第一极体的释放,获得四倍体诱导率分别为58.2%、55.1%及55.2%,无显著差异;随细胞松弛素B用量的升高,菲律宾蛤仔早期胚胎发育速度略有减慢,各发育阶段胚胎畸形率显著提高,畸形形式增加,孵化率降低。综合分析,0.5mg/L的细胞松弛素B适于诱导菲律宾蛤仔四倍体。     

CB诱导熊本牡蛎三倍体及其存活率与倍化率的变化关系

为诱导熊本牡蛎三倍体,研究了细胞松弛素B (CB)浓度、诱导起始时间、诱导持续时间等因素对卵裂率、D幼率、三倍体率的影响,并分析了幼虫、稚贝及成贝的存活率和三倍体率的变化特征。结果显示,CB浓度为0.5~0.6 mg/L,诱导起始时间为40%受精卵释放第一极体,诱导持续时间为20 min时可获得87%的三倍体率。卵裂率、D幼率、三倍体率的最大影响因素分别为CB浓度、诱导持续时间、诱导起始时间与诱导持续时间。三倍体率与卵裂率无显著负相关性,而与D幼率呈显著正相关。因此,减小CB浓度或诱导持续时间,可同时获得较高的三倍体率与幼虫产量。3~15日龄三倍体组与对照组的存活率分别由71.27%与96.09%降低至34.14%与58.80%,成贝期450日龄(9月)三倍体组与对照组的存活率分别为53.62%与44.67%。3~9日龄三倍体率从87%降低至77%,而90~450日龄三倍体率平均值为59.21%±4.99%,表明幼贝与成贝期三倍体率变化较小,三倍体率的维持与存活率无显著相关性。     

美国试生产三倍体牡蛎

由于繁殖的缘故．在牡蛎需要量最大的夏季，它往往变得既瘦又肉色混浊。相反，不孕的三倍体牡蛎却仍是饱满而多肉。因此受到海味消费者的欢迎。三倍体牡蛎最早于1985年出现在市场上，它是由美国华盛顿大学的科学家研究成功的。把牡蛎苗置于静水压力下或浸浴于细胞松驰素B溶液中，即可获得三倍体牡蛎。     

三倍体长牡蛎(Crassostrea gigas)不育性研究

三倍体长牡蛎(Crassostrea gigas)雌性怀卵量在0～2000万,雄性精量在0～1亿,大大低于正常二倍体。三倍体生殖腺发育受阻,大部分停留在增殖期和休止期,一部分虽发育至生长期和成熟期,但与同期的二倍体比较,生殖腺发育差。部分三倍体配子能完成受精作用,并发育至D形幼虫,但不能继续正常发育。卵子减数分裂后为含14～16条染色体的非整倍体。因此,三倍体长牡蛎是不育的。     

熊本牡蛎中国群体与美国群体杂交效应及杂交三倍体优势分析

为了评估熊本牡蛎(Crassostreasikamea)中国群体与美国群体的杂交效应与杂交三倍体优势,构建了杂交群体和自交群体,并使用细胞松弛素B诱导了杂交三倍体,比较分析了幼虫、稚贝与成贝的生长与存活优势。自交群体和杂交群体的幼虫、稚贝与成贝的培养条件均相同,室内培育幼虫,培育密度为4～5个/mL,自然海区养殖稚贝与成贝,养殖密度为40～45个/吊。结果表明,与自交组相比,杂交二倍体具有较高的卵裂率(13.61%)与D幼率(5.67%)(P0.05),但杂交二倍体幼虫的壳高生长表现杂种劣势(–0.43%),而稚贝、成贝的壳长与壳高的生长表现杂种优势,平均优势率分别为3.96%与6.65%。杂交三倍体诱导组幼虫的壳高生长优势率为3.69%,稚贝及成贝的壳长与壳高平均生长优势率分别为12.69%与13.64%,并且日龄越大生长优势越显著。总体上,杂交三倍体诱导组在3～180日龄具有存活劣势,并且15日龄存活劣势率最大(–48.72%),而在360日龄存活优势率为6.70%。杂交二倍体幼虫与成贝均具有存活优势,平均优势率分别为10.44%与4.59%。本研究表明熊本牡蛎中美地理群体杂交二倍体的生长和存活优于自交二倍体,而杂交三倍体诱导组的生长优势较显著,并且在成贝期具有显著的成活率优势,表明杂交三倍体诱导组的优势来源于三倍体优势和部分杂种优势。     

皱纹盘鲍三倍体育苗技术通过专家鉴定

由山东省水产学校的烟台市罘区水产局承担山东省科委下达的“皱纹鲍三倍体育苗技术研究”课题,于1991年12月通过了专家鉴定.该研究采用低温和细胞松驰素 B 诱导皱纹盘鲍三倍体,诱导率     

静水压休克法诱导三倍体鲶鱼（silurus asotus L）的研究

采用静水压休克法诱导三倍体鲶鱼。通过对受精时间、静水压力及持续施压处理时间三方面进行筛选试验的结果表明，鲶鱼卵受精4－5min，用600－649kg/cm^2的静水压力处理3min，可以获得100％的三倍体鲶鱼，而且胚胎存活率也较高，孵化率达对照组的90％以上，是静水压休克法诱导三倍体鲶鱼的最佳条件。三倍体鲶鱼的倍性用细胞遗传学方法验证。