姬松茸与双孢蘑菇不同菌株的RAPD扩增研究

以4个姬松茸菌株和2个双孢蘑菇菌株为材料，用20个随机引物对它们进行RAPD扩增，通过对供试菌株遗传相似系数的估算和系统聚类分析，构建姬松茸和双孢蘑菇遗传相关树状聚类图谱，结果表明，进行RAPD扩增的20个随机引物中，有12个能产生三种带型，当遗传相似系数升至0.8713时，这6个菌株被分为3类，第一类为菌株18和26，第二类为菌株13和12，第三类为菌株33和45。     

利用双孢蘑菇工厂化设施栽培姬松茸初探

利用双孢蘑菇工厂化栽培设施，通过对环境条件的精确控制，进行了姬松茸栽培试验研究，结果认为：姬松茸在利用草炭土作为覆土时易产生菌被，产量较常规栽培高，试验中的2号和3号菌株的表现较好，产量较高。     

双孢蘑菇原生质体杂交系统的建立

双孢蘑菇的常规杂交育种由于次级同宗结合而变得困难。本文研究了蘑菇原生质体制备与再生的最佳条件。从异核菌丝出发,制备与再生原生质体。根据自然性状,推定同核化再生株,栽培验证同核株,并根据配对行为确证同核株并分离异核化杂交种。本文认为原生质体杂交系统比常规杂交育种优越。     

双孢蘑菇原生质体同核体的验证

同核体(homokaryon)是进行双孢蘑菇遗传分析和菌种选育的基本材料。我们曾经报道过应用原生质体技术可以在实验室条件下较方便地用菌丝体分离出大量的原生质体同核体(protoplasted homokaryon),这无疑为加快双孢蘑菇遗传育种研究的进程创造了条件。但是由于双孢蘑菇的菌丝一般是多核的,而且又没有锁状联合标记,因此对所获得的原生质体同核体的真实性缺乏一种简单可靠的检测手段,而只能根据它们在再生时间上的先后顺序以及菌落的形态特征进行推定。鉴此,本研究,旨在寻找到可行的方法对推定的原生质体同核体进行有效的验证,结果报道如下: 1 材料与方法 1.1 供试菌株 双孢蘑菇176菌株,上海市农科院食用菌所提供。P_9、P_(11)、P_(12)、P_(14)、P_(15)、P_(20)、P_(21)、P_(22)为随机挑选出的八个推定的176原生质体同核体。 1.2 培养基及配方 ①PDM:马铃薯200g,葡萄糖     

双孢蘑菇同核原生质体育种技术研究：Ⅱ.同核原生质体的杂交

为建立双孢蘑菇同核原生质体杂交育种体系,本文对同核原生质体亲合性反应及杂交异核体F_1代的农艺性状和F_2代的分离与变异规律进行了研究。结果表明:双孢蘑菇同核原生质体的杂交是一个较复杂的性亲合与核迁移过程,其杂交率较低。在按气生型×气生型、气生型×匍匐型、匍匐型×匍匐型组合的520个杂交配对中,共获得113个杂交异核体,平均杂交率为22%。本研究同时建立了以菌落形态、菌丝生长速度、羧甲基纤维素酶相对活性以及酯酶同功酶电泳为手段的杂交异核体鉴定体系。     

松茸与香菇原生质体融合的研究

以获得利于半人工或人工栽培优良松茸菌株为目的，利用松茸与香菇分离纯化的再生原生质体对潮霉素自然抗药性的差异，结合原生质体灭活为融合子筛选的依据。在PEG、Ca^2 系统中以30％PEG4000，30℃处理25min，诱导松茸与香菇良用菌原生质体融合，获融合子5株，融合率0．45％。     

双孢蘑菇遗传育种研究进展

综述了人工选择育种、杂交育种、原生质体融合育种和基因工程育种等双孢蘑菇遗传育种研究的现状及进展,并展望了上述研究领域的发展趋势。     

应用原生质体技术培育双孢蘑菇杂交新菌株

应用原生质体技术从双孢蘑菇气生型与匍匐型二类品种中制备出原一质体同核本并进行杂交配对。结果表明,从１６个组合中得到６个杂交菌株,其中２个不能结实,４个结实正常,且主要农艺性状明显优于双亲。     

木耳灭活原生质体融合育种研究

以黑木和毛木耳为亲本菌株 ,通过灭活原生质体融合 ,经过初筛和复筛 ,一株新的稳定的木耳高产菌株被选育出来。黑木耳和毛木耳原生质体分别被热灭活 (6 5℃ ,30min)和紫外线灭活 (30W ,30cm ,10min) ,双亲存活率为 3 5× 10 -7～ 3 2× 10 -8。在聚乙二醇诱导下融合继续生存 ,亲本原生质体融合被实现 ,重组频率为4 3× 10 -5。     

双孢蘑菇同核原生质体育种技术研究：Ⅰ.同核原生质体的分离与鉴定

通过对溶壁酶组成及浓度,渗透压稳定剂、菌丝培养方法等研究,建立了有效的双孢蘑菇原生质体制备与再生系统。采用1.5％Lywallzyme、0.6M KCl为渗透压稳定剂,25℃酶解4小时,原生质体的产量可达到10~7个/ml;纯化后的原生质体在0.6M蔗糖为渗透压稳定剂的PDMA培养基中,25℃恒温培养5～7天,再生率达1%以上,根据原生质体再生菌落出现时间的先后顺序,并以菌落形态特征、菌丝生长速度。羧甲基纤维素酶(Cx酶)活性及子实体形成能力上的差异为鉴定同核体的主要标记,从两种形态类型,不同来源的12个双孢蘑菇菌株中均分离到同核原生质体,同核率为2％～15%,平均为11.75％。     

用原生质体融合进行冬菇育种的研究

用灭活的〔Flammulinasubnudus (Pr .)Sing〕双核菌株原生质体与〔Flammulinavelutipes (Fr.)Sing〕双核菌株原生质体融合 ,在 2 2℃的条件下筛选得融合子。融合频率为 0× 10 -5～ 4 1× 10 -5。融合子与双亲有明显的拮抗性。融合子的菌丝体形态 ,氨基酸含量 ,子实体的形态 ,以及酸性磷酸酶的测定都与双亲不同。     

姬松茸栽培工艺的研究

运用正交试验设计中Fuzzy分析法．研究了在山西省麦秸栽培姬松茸的最佳栽培工艺。不同培养料处理、播种方式、覆土材料直接影响姬松茸生物学效率的高低，3个因素中覆土材料对生物学效率的影响最大，其次为培养料的处理．再次为播种方式．从三因素各水平组合对生物学效率的影响看，采用添加0．5％EM菌液的方式发酵培养料,撒播菌种,覆腐叶土或菜园土最为有利．     

姬松茸菌丝饮料的稳定性研究

研究了姬松茸菌丝粉添加量，姬松茸菌丝粉粒度及羧甲基纤维素钠（CMC）浓度与姬松茸菌丝饮料稳定性之间关系，实验结果表明，使姬松茸菌丝饮料获得最佳稳定状态的条件为：姬松茸菌丝添加量为0．5％，姬松茸菌丝粉粒度为100μm，CMC添加量为0．08％。     

超滤提纯姬松茸多糖的研究

采用超滤提取姬松茸多糖。实验表明 ,离心分离预处理简单可行 ,用PVDF (聚偏氟乙烯 )截留分子量为 8万的管式膜组件抗污染性能强、易清洗 ,更适合于本研究 ,所得实验操作条件为 :室温 ,操作压力为 0 0 8～ 1 0MPa ,多糖可浓缩至 35g·L-1 。在低温下干燥制备的姬松茸多糖制品 ,其纯度为 78 4 %,回收率为 76 36 %。     

双孢蘑菇不同菌株的RAPD扩增研究

用18个随机引物对3个双孢蘑菇生产菌株进行RAPD扩增,通过计算供试菌株遗传相似系数及聚类分析,构建供试双孢蘑菇菌株的系统树状图谱。结果表明,所用18个引物中有8个能对双孢蘑菇菌株扩增出清晰、稳定的DNA谱带。供试菌株2796与F56的相似程度较高,相似系数为0.8571,菌株2796、F56和菌株176的平均相似程度较低,平均相似系数只有0.4728。     

双孢蘑菇褐变的酶学机理研究（续）

从图谱可以看出,从蘑菇开始扭结成小米粒大到开伞整个过程中,其ＰＰＯ同工酶图谱基本相似,但褐变程度却有些不同。在生长的开始阶段,电泳迁移率大的快泳区域（Ｒｆ０－６８～０－７０）具有较强的ＰＰＯ酶活力,褐变程度亦深,但随着蘑菇生长,其活性强带主要是集中的Ｒｆ中等区域（Ｒｆ０－２３～０－５３）,而随着蘑菇的成熟开伞,其活性强带主要是在Ｒｆ中慢泳区域（Ｒｆ０－２３～０－３７）。开伞菇薄菇始薄膜扣菇中菇小菇中豆菇小豆菇图２　蘑菇表层组织在常温中放置的ＰＰＯ同工酶图谱２－５　蘑菇采后ＰＰＯ酶活性变化　一般情…