普城沙雷氏菌RsmA蛋白过量表达菌株的构建

普城沙雷氏菌(Serratia plymuthica)G3是本课题组从山东泰安小麦茎秆中分离的1株内生细菌,能产生几丁质酶、蛋白酶和硝吡咯菌素等多种抗真菌因子.次生代谢物阻遏蛋白RsmA(Repressor of secondary metabolite)已知在细菌中是高度保守的,已在大部分革兰氏阴性菌和某些革兰氏阳性菌如枯草芽孢杆菌中被鉴定[1],例如在欧文氏菌Erwinia中,RsmA属于Rsm蛋白家族,主要由两个成员组成:RsmA(RNA结合蛋白)和RsmB(一种不翻译的调控sRNA分子,能消除RsmA的翻译阻遏功能).     

普城沙雷氏菌MM产酶条件优化及对西瓜枯萎病的防治效果

为提高普城沙雷氏菌MM几丁质酶产量,增强拮抗西瓜枯萎病病原菌的能力,通过Plackett-Burman设计和响应面法对其培养基成分进行优化,并测定优化后菌株MM发酵滤液对西瓜种子萌发及西瓜枯萎病防治效果的影响。结果显示,在初始pH 7.0、接种量3%、温度30℃、摇床转速180 r/min、培养时间72 h的基础上获得最佳产酶培养基：葡萄糖12.748 g/L,牛肉膏2.086 g/L,酵母粉3.091 g/L;优化后菌株MM几丁质酶活为0.485 U/mL,比优化前提高1.14倍,对西瓜枯萎病病原菌的抑菌率提高6.42%。菌株MM发酵滤液不同稀释倍数对西瓜种子的萌发具有促进作用,当发酵滤液稀释浓度为150倍时对种子萌发的促进作用最为显著,为98.53%。盆栽试验显示,菌株MM发酵滤液处理西瓜植株后,其株高、鲜质量、干质量分别增加78.82%、126.90%、82.00%,对西瓜枯萎病防效高达74.55%。     

普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素调控基因的鉴定

【目的】鉴定影响普城沙雷氏菌ACCC 02146产灵菌红素能力的基因,构建ACCC 02146的转座子突变体文库,为进一步研究普城沙雷氏菌ACCC 02146灵菌红素合成机制奠定基础。【方法】采用平板划线法从菌种保藏中心购买菌株和实验室保藏菌株中获得15株产灵菌红素的菌株。采用16S rRNA基因测序法鉴定各菌株,邻接建树将其分类,并比较不同类别菌株灵菌红素合成基因簇启动子序列差异,观察各菌株产色能力。对16S rDNA序列和灵菌红素合成基因簇启动子序列均有异于其他菌株的普城沙雷氏菌ACCC 02146合成灵菌红素的调控基因展开研究。构建ACCC 02146的转座子突变体文库,筛选出产色能力明显改变的克隆子并鉴定出对应的转座子插入突变基因。【结果】该突变体文库中有74个突变体表现出产灵菌红素能力的变化。其中25个突变体转座子插入发生在pigA、pigB、pigC、pigD和pigH等5个灵菌红素合成簇基因上,49个突变体转座子插入基因为灵菌红素合成基因簇之外的基因。在鉴定到的产色能力改变的突变体中,麦芽糖O-乙酰基转移酶基因突变菌株有6个,二氢乳清酸脱氢酶基因突变菌株有4个,MarR家...     

普城沙雷氏菌BU09的分离鉴定及其对疮痂链霉菌的防治效果

[目的]筛选马铃薯疮痂病的生防菌。[方法]从马铃薯疮痂病发病土壤中取样,经过稀释培养和二次划线纯化获得单克隆菌株,通过抑菌试验最终得到1株对马铃薯疮痂病具有较好抑制效果的细菌BU09,通过16S r DNA测序和系统进化分析对该菌株进行分子鉴定。[结果]细菌BU09属于普城沙雷氏菌,对马铃薯疮痂病具有较好的防治效果。[结论]试验结果为马铃薯疮痂病的田间防治提供了参考。     

黏质沙雷氏菌产几丁质酶的诱变

分析了紫外线、NaNO2及其复合处理对黏质沙雷氏菌产几丁质酶的诱变效果,经几丁质平板透明圈初筛与摇瓶复筛,筛选出1株几丁质酶活较高的诱变菌株NU2,产量为出发菌株的2.75倍.研究发现,原生质体紫外线诱变对酶活的提高效果比菌悬液NaNO2诱变更明显;复合诱变中,菌悬液经NaNO2诱变后再经原生质体紫外线诱变的方法产酶能力更强,且菌株遗传稳定性较好.     

普城沙雷氏菌Z10发酵工艺参数的研究

通过对普城沙雷氏菌Z10(Serratia plymuthica)在发酵罐中的发酵温度、pH、通气量的研究,得出沙雷氏菌Z10发酵工艺的优化培养条件为:温度28℃、pH7.5、通气量1000L·h-1,在12h补加10%的培养基.在上述优化发酵条件下培养4h,沙雷氏菌Z10进入对数生长期,16h时达到稳定期,最终浓度可达10.632×1012个·mL-1.     

高产几丁质酶的粘质沙雷氏菌株的诱变选育

以黑龙江省科学院微生物研究所实验室保存的1株粘质沙雷氏菌S68为出发菌株,进行原生质体紫外线、Na NO2和复合诱变,通过透明圈对比和酶活测定,最终获得1株产酶量高于原始菌株4.3倍的粘质沙雷氏菌诱变菌株,产酶量达到4.98μg·h-1。确定该菌株最佳诱变方法为复合诱变,首先进行紫外诱变(高度为30 cm,诱变时间为12 s),再用化学诱变(0.4 mol·L-1Na NO2诱变5 min),经验证该诱变菌株遗传稳定。     

黏质沙雷氏菌3种几丁质酶基因的克隆及功能预测

黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)可产生多种几丁质酶,为比较黏质沙雷氏菌Txch-1中几丁质酶系在结构上的差别,利用3对特异性引物从Txch-1中扩增获得了3种几丁质酶SeChiA、SeChiC、SeChi40基因,并进行生物信息学分析与比较.结果表明:SeChiA基因全长2196bp,含有1个1 ...     

粘质沙雷氏菌几丁质酶(ChiC)基因克隆及其生物信息学分析

从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescensATCC14041)中克隆出几丁质酶基因(ChiC),将回收纯化的PCR产物与载体pMD18-T连接,构建成的重组质粒命名为pMD-Ch iC,将重组质粒转化到受体E.coliDH5α中进行克隆,经BamHI和NheI双酶切验证、核酸序列测定证实,重组质粒pMD-Ch iC含有几丁质酶C基因(ChiC)。利用生物信息学的方法,推测该粘质沙雷氏菌ChiC基因编码的蛋白质由480个氨基酸组成。预测该蛋白的等电点为5.63,分子量约为52kD。针对粘质沙雷氏菌中的几个几丁质酶基因做了进化树,进而验证了粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)几丁质酶(ChiC)在沙雷氏菌几丁质酶中的分类;同时对粘质沙雷氏菌几丁质酶C(ChiC)蛋白的高级结构作出了预测,得到其编码的属于18家族的蛋白质高级结构图谱。     

粘质沙雷氏菌的生防作用

粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)是一种广泛存在于自然界中的革兰氏阴性菌,能够在植物根际、植物体和昆虫体内定殖,对害虫、虫媒传染病病原物、植物病原物、杂草等具有一定的生物防治功效,由于粘质沙雷氏菌能在松墨天牛(Monochamus alternatus Hope)与松树体内富集,因而在松材线虫病防治方面具有很好的潜力。粘质沙雷氏菌还具有促进植物生长,净化环境等作用有待探讨。本文基于国内外研究进展,系统论述了粘质沙雷氏菌在生物防治方面的研究,为未来粘质沙雷氏菌微生物农药的进一步开发利用提供参考。     

一株沙雷氏菌红色素的理化性质研究

[目的]为沙雷氏菌红色素的结构分析和开发利用奠定基础。[方法]从一株产天然红色素沙雷氏菌培养物中提取红色素,通过薄层层析、质谱分析和光谱扫描对色素成分进行分析,并研究温度、光照、pH值、金属离子、氧化剂及还原剂对色素稳定性的影响。[结果]所提取色素中主要含有分子量分别为393．5、324．0和754,0的3种成分;色素醇溶液在535和469nm处有特征吸收峰;色素对温度和pH值3—11较稳定,对光照较敏感;Mg^2＋和Mn^2＋对色素具有保护作用,K^＋对色素持续增色,其他多种金属离子对色素具有破坏作用;色素的抗氧化性和抗还原性良好。[结论]沙雷氏菌所产红色素被初步判定为灵菌红素类物质。     

粘质沙雷氏菌发酵工艺参数研究

研究了发酵温度、培养基pH、接种量及溶解氧等对粘质沙雷氏菌生长的影响,得出粘质沙雷氏菌的优化培养条件为温度30℃左右,pH 7.0～7.5,接种量1:10,通过振荡或通气的方法保证培养基中含一定的溶解氧有利于细菌的生长。用发酵罐测定了粘质沙雷氏菌的生长曲线,在上述优化培养条件下粘质沙雷氏菌约4 h后进入对数生长期,18 h达到稳定期,最终菌液浓度达16.00亿/mL。     

沙雷氏菌PFMP-5发酵条件的优化

利用生防菌防治温室大棚根结线虫已逐渐成为当前保护地栽培蔬菜病害防控治理的一种新方法。试验主要对山西农业大学植物病理学重点实验室分离得到的对根结线虫有明显防效的生防细菌菌株PFMP-5的发酵条件进行优化。结果表明,最佳碳源为蔗糖,最佳氮源为蛋白胨,最适合菌株的发酵时间为30 h,最佳p H值为7,最佳发酵温度为28℃,最佳接种量为5%,最佳装液量为150 m L,最佳转速为180 r/min,最佳Na Cl浓度为6%。     

饮用纯净水中粘质沙雷氏菌的分离及其生物学特性研究

从桶装饮用纯净水中分离到一株产红色色素的革兰氏阴性杆菌。经微生物学鉴定该菌为粘质沙雷氏菌。药敏试验结果表明该菌对复方新诺明、链霉素、氟哌酸和庆大霉素敏感。该菌株耐紫外线照射。动物试验结果表明,该菌对小白鼠有致病力。     

产玫瑰红色素粘质沙雷氏菌的分离鉴定及抑菌活性

旨在分离鉴定产玫瑰红色素菌株,及其分离菌株和色素对病原菌的生物拮抗作用。经形态观察、生理生化试验和16S rRNA序列分析对其进行鉴定,通过控制变量法确定最佳产色素的温度及光照条件,破裂菌体提取色素分析此菌株产色素的量和红色素的性质,采用滤纸片法研究对病原菌的拮抗作用。结果表明：（1）分离细菌Dse\|01菌株最终鉴定为粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）;（2）该菌在25～35 ℃条件下培养色素形成较早且颜色较深,30 ℃温度下产色素最佳,光照对其色素形成时间没有明显影响;（3）30 ℃ 150 r·min-1培养24 h,提取获得色素粗品确定为灵菌红素,产量达（567.90±7.77）mg·L-1;（4）分离菌株的全菌液、上清液、菌体和提取色素对病原性大肠杆菌、沙门氏菌均无拮抗作用,而全菌液、菌体和提取色素对金黄色葡萄球菌具有明显的抑制作用。     

黏质沙雷氏菌C8-8几丁质酶基因的克隆与表达

利用PCR方法从黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens)C8-8中克隆到编码几丁质酶的chiA基因,大小为1 692 bp,推测其编码一条长563个氨基酸的多肽链,分子量约为60 900。同源分析研究结果表明从C8-8中克隆的chiA基因序列与黏质沙雷氏菌株141(DQ 990373.1)和14041菌株(DQ 493896.1)的chiA基因序列相似性最高,达到99%。结构域分析结果表明从C8-8中克隆的chiA基因N末端(23 AA)存在典型的信号肽序列,C端存在另外两个结构域,即PKD区(73 AA)和几丁质酶催化区(387 AA)。采用大肠杆菌表达系统重组表达chiA基因,结果表明重组菌株在几丁质诱导培养基上能产生透明的水解圈。采用SDS-PAGE电泳分析,结果表明chiA重组表达产物的相对分子质量约为60 000,与预测分子量大小基本一致。初步提纯后,生物活性试验结果表明该重组表达产物能水解几丁质,在几丁质培养基上产生透明的水解圈。     

粘质沙雷氏菌中乙偶姻合成途径调控基因的鉴定

粘质沙雷氏菌H30中控制乙偶姻合成的调控因子budR被克隆和鉴定。序列分析表明调控因子budR与液化沙雷氏菌MG1中乙偶姻合成调控因子slaR同源性达80%,属lysR型调控因子。调控因子budR突变可导致粘质沙雷氏菌无法合成乙偶姻,引起培养液pH快速下降和菌体生长缓慢,而在培养过程中维持pH7.0,突变菌的生长可获得恢复,暗示budR的功能为调控粘质沙雷氏菌发酵过程中性产物乙偶姻的合成,以阻止发酵液过度酸化。     

粘质沙雷氏菌在环境修复与农业虫害生物防治的研究概述

随着环境污染的日益加剧,人们越来越期待一种绿色安全高效的生物修复与防治手段。粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)是的良好昆虫内生菌,在近年来是生物防治的研究热门物种,本文综述了粘质沙雷氏菌在重金属污染、化学杀虫剂污染生物修复与农业害虫生物防治上的重点物种与主要防治原理,同时针对粘质沙雷氏菌的未来发展提出了需要解决的问题与障碍,以期为未来微生物制剂的发展提供一些帮助。     

一株粘质沙雷氏菌对蔬菜常见害虫毒力的研究

从棉田中自然死亡的棉铃虫体上分离得到一株昆虫致病菌,经鉴定为肠杆菌科沙雷氏菌属粘质沙雷氏菌(Serratiam arcescens)。实验证明该菌对烟青虫(H eliothis assulta)、菜青虫(Pieris rapae)、棉铃虫(H elicoverpa arm igera)、小菜蛾(Plutellaxylostella)等蔬菜上常见的鳞翅目害虫具有一定的毒力作用。该昆虫致病菌对目标昆虫的毒力主要表现在造成昆虫停食、行动迟缓、对刺激反应迟钝、幼虫生长期缩短、提前化蛹、不能正常羽化等方面。     

一株耐高温抑菌黏质沙雷氏菌的鉴定及其红色素的初步分离

[目的]为了了解黏质沙雷氏菌的抑菌机理及温度对其产生色素的影响。[方法]从土壤中分离纯化得到1株产红色素细菌,对该菌进行生理生化和16S rDNA鉴定,同时对该菌产生的红色素进行了初步的探讨。[结果]该菌为黏质沙雷氏菌(Serratia marcescens),在28℃条件下培养红色素产量最高,37℃下仍能产生色素,说明该菌株是耐高温红色素产生菌。紫外全波长扫描分析和薄板层析结果表明,其红色色素有可能是灵菌红素。[结论]该菌对霉状杆菌和镰刀菌等病原菌具有一定的抑制作用。