DNA疫苗免疫佐剂的研究及应用

DNA疫苗是近年来出现的一种新型疫苗,能够诱导机体免疫系统产生体液免疫和细胞免疫,在预防和治疗人和动物的疾病中发挥重要的作用。随着DNA疫苗研究的深入和扩展,用于提高DNA疫苗免疫效果的免疫佐剂也逐渐开展起来。本文就新型细胞因子佐剂、趋化因子和协同刺激分子佐剂、补体分子佐剂和CpGDNA佐剂的研究作一综述。     

DNA疫苗免疫佐剂研究进展

DNA疫苗是编码免疫原或与免疫原相关的真核表达质粒DNA(有时也可为RNA),它能够诱导机体的免疫系统产生体液免疫和细胞免疫,来预防机体免受疾病的侵袭.但是DNA疫苗诱导的免疫应答的效力较低而且不稳定,需要某种物质来协同这种作用,免疫佐剂就在这种情况下产生、发展并发挥增强免疫原性或增强宿主对抗原保护性应答的功能[1].     

DNA疫苗免疫佐剂的研究进展

简要阐述了细胞因子、共刺激分子、CpG DNA和脂质体等DNA疫苗佐剂的来源、性质、免疫增强作用、作用机理和方式。认为以前的研究工作必然会使上述佐剂应用到DNA疫苗的生产中。     

脂质体作为疫苗免疫佐剂的应用研究进展

脂质体作为一种新型疫苗佐剂可同时增强机体的体液和细胞介导免疫应答,对疫苗有很强的增效作用。通过分析脂质体的作用机理,概述脂质体作为疫苗免疫佐剂的一些优点以及目前在抗细菌、抗病毒、抗寄生虫以及抗肿瘤疫苗等方面的应用情况,列举出存在的问题并提出改进的方法,展现出脂质体未来良好的应用前景。     

基因疫苗免疫佐剂的研究进展

随着基因疫苗深入的研究,推动了用于提高基因疫苗免疫效果的免疫佐剂的研究.免疫佐剂不仅可以增强抗原的免疫原性而且还可以提高免疫效果,研究人员正不断地积极探索寻找新型免疫佐剂,以适应时代需求,现将近几年来基因疫苗免疫佐剂研究进展做一下概述,并简要的分析了研究新型免疫佐剂的存在问题、安全性、研究意义和未来发展前景.     

DNA疫苗佐剂研究进展

本文综述了具有载体功能佐剂:脂质体,免疫刺激复合物,减毒的侵袭性胞内细菌和免疫激活作用的佐剂:CpG寡核苷酸免疫调节序列,细胞因子,趋化因子,在DNA疫苗中应用的佐剂机理,相应的优缺点,佐剂应用及现状。     

基因疫苗及其免疫佐剂研究进展

基因疫苗是由编码能引起保护性免疫反应的病原体抗原基因片段和真核质粒表达载体构建成的重组质粒DNA。基因疫苗注入机体后能使外源基因在活体内表达,表达蛋白刺激机体引起特异性免疫应答。基因免疫作为一种新的免疫技术,自上世纪90年代初以来,已展现出广阔的应用前景,特别是在     

疫苗免疫佐剂的研究与应用

近年来,随着免疫学研究的不断深入及基因工程技术的迅速发展,活载体疫苗、DNA疫苗和合成肽疫苗等新型疫苗的研究也取得了可喜的进步。这些新型疫苗纯度高、特异性强,但免疫原性弱,诱导机体产生的免疫应答不够强,因此,应用佐剂来增强其免疫原性或增强宿主对抗原的保护性应答就显得尤为重要。文章就近年来免疫佐剂研究概况作一综述。1铝盐佐剂铝盐佐剂是一类含Al3 的无机盐,其中最常用的效果较好的是Al(OH)3和磷酸铝佐剂。Al(OH)3成本低、使用方便,是兽医生物制品生产中应用最广的一种佐剂,也是至今唯一被美国食品和药物管理局(FDA)批准…     

猪繁殖与呼吸综合征疫苗佐剂研究进展

疫苗免疫是预防和控制传染病的主要措施,但对于猪繁殖与呼吸综合征,疫苗免疫存在免疫效率低与安全性差的问题,效果并不理想。因此,如何在安全剂量下提高动物机体的免疫力,成为疫苗研究的热点之一。试验证明细胞因子、化学试剂和微生物产物等几种免疫佐剂可以增强猪繁殖与呼吸综合征疫苗的免疫效果。在研究的9个疫苗佐剂中,IL-2、IL-12、IFN-α、poly IC和poly ICLC、CpG ODN等能增强猪繁殖与呼吸综合征疫苗的细胞免疫效应;CpG ODN和霍乱毒素能显著提高猪繁殖与呼吸综合征疫苗的抗体产生水平;IL-2和CpG ODN在临床实验中能增强疫苗对实验动物的保护,是最具潜力的免疫佐剂。     

细胞因子类佐剂在核酸疫苗中的作用

细胞因子在免疫应答的产生和调节中具有重要作用,可作为免疫佐剂增强疫苗的免疫效果。近年来,重组质粒表达的细胞因子在核酸疫苗研究领域引起了人们广泛的兴趣与关注。文章简述了三类细胞因子在核酸疫苗的研究与应用,探讨了目前应用这些细胞因子类佐剂所存在的问题。     

DNA疫苗佐剂研究进展

DNA疫苗是近年来发展较为迅速的一类生物制剂,它能诱导动物机体产生持久的体液免疫和细胞免疫,其在抗病毒、细菌和寄生虫的感染方面起到了重要作用。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效果并不理想。为了攻克DNA疫苗免疫效力低下的难题,一些学者已经研制了多种佐剂制品,以提高DNA疫苗对动物疾病免疫保护的能力。文章对使用佐剂提高DNA疫苗免疫效力进行了综述。     

融合表达猪源C3d与猪流感病毒HA DNA疫苗的构建

为了构建融合表达分子佐剂猪补体C3d与猪流感病毒血凝素(HA)的真核表达载体,论文克隆了猪C3d全长基因与H3N2亚型猪流感病毒的HA基因,并构建了包含3拷贝的C3d和经过改造的HA(替换信号肽并去除跨膜区)的质粒pHA-C3d3.序列分析表明,获得的猪C3d与参考序列相比核苷酸同源性达到99.7%,氨基酸同源性达99...     

白细胞介素-2基因表达质粒对犬细小病毒VP2DNA疫苗在小鼠的免疫增强作用

犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒主要抗原蛋白。研究证实由VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应。为提高VP2DNA疫苗的免疫原性,本研究在小鼠体内尝试了利用犬白细胞介素2（cIL-2）基因增强VP2DNA疫苗免疫应答的研究。通过RT-PCR方法从犬脾淋巴细胞中分别扩增含终止密码子和不合终止密码子的cIL-2cDNA基因,然后将基因插入到真核表达载体pcDNA3．1中,分别构建成非融合的和与Myc／His融合的clL-2基因真核分泌型表达载体,pcDNA-cIL-2和pcDNA-cIL-2／MH。将pcDNA-oIL-2／MH表达栽体通过磷酸钙方法转染HEK293T细胞进行瞬时表达,以确定构建的表达栽体能否介导cIL-2在真核细胞中进行分泌表达。然后用VP2表达载体（pcDNA-CD5sp-VP2,本室构建）单注射和VP2／IL-2表达载体共注射对小鼠进行免疫（用pcD-NA3．1栽体作为阴性对照）。免疫后通过ELISA方法检测免疫后不同时期小鼠血清VP2的抗体水平,并通过细胞增殖试验检测免疫后小鼠脾脏淋巴细胞的增殖反应,用ELISA方法测定小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平。试验结果表明,扩增的小鼠cIL-2基因与GenBank的参考序列一致,构建的cIL-2表达载体能够介导重组cIL-2在HEK293T细胞中进行分泌表达。免疫结果显示,利用cIL-2／VP2表达载体共免疫小鼠,免疫后35d血清中VP2的抗体水平达到1：5120,明显高于VP2表达载体单免疫组（P〈0．01）。淋巴细胞增殖试验表明,2组免疫小鼠的淋巴细胞刺激指数均明显高于阴性对照组（P〈0．01）,共免疫组的刺激指数又明显高于单免疫组（P〈0．05）。共免疫小鼠淋巴细胞7干扰素的表达水平明显高于单免疫组和阴性对照组（P〈0．01）。由此可见,cIL-2表达载体可明显提高CPVVP2基因疫苗的免疫应答水平。     

鸡球虫早熟株的生物学特性及其在疫苗中的应用

按照Jeffers建立的艾美耳球虫早熟株选育方法选育出的球虫早熟株，其潜在期明显缩短，繁殖力和致病性显著降低，但保持良好的免疫原性.并且，早熟株的弱毒性和早熟性具有遗传稳定性，通过放松选择压力反复传代后无恢复现象。国内外学者根据早熟株的这些生物学特性，并在深入了解鸡球虫病的保护性免疫机制的基础之上研制了抗鸡球虫病的早熟株弱毒活苗。本文综述了球虫早熟株的生物学特性，并介绍了目前国内外研制出的球虫早熟苗在鸡球虫病防治方面的应用。     

犬GM-CSF基因对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用

犬细小病毒编码的VP2蛋白是该病毒重要的结构蛋白和抗原蛋白.利用VP2基因制备的DNA疫苗能够刺激机体产生免疫应答反应.为进一步提高VP2 DNA疫苗的免疫活性,本实验利用犬粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因作为生物佐剂研究其对犬细小病毒VP2 DNA疫苗的免疫增强作用.首先通过RT-PCR方法从犬淋巴细胞中扩增GM-CSF基因,并将其插入到pcDNA3.1栽体上,分别构建该基因的两个分泌型真核表达载体,即非融合表达载体pcDNA-cGMCSF和与Myc His融合的表达栽体pcDNA-cGMCSF/MH.用pcDNA-cGMCSF/MH载体转染HEK293T细胞以确定GM-CSF基因能否在真核细胞中进行分泌表达.然后用本室构建的VP2基因表达栽体单免疫小鼠,用VP2表达载体与pcDNA-cGMCSF共免疫小鼠(pcDNA3.1空载体作为阴性对照).免疫后用ELISA方法检测不同时间小鼠血清的抗体水平.用MTT法检测小鼠免疫后35 d时淋巴细胞的增殖活性,同时用ELISA试剂盒检测小鼠淋巴细胞γ干扰素的表达水平.结果表明,本试验构建的表达载体能够介导重组GM-CSF在真核细胞中进行分泌表达.免疫实验表明,利用GM-CSF基因与VP2基因共免疫小鼠,抗体的水平明显高于VP2基因单免疫组(P＜0.01).共免疫组小鼠淋巴细胞的刺激指数和γ干扰素的表达水平均明显高于单免疫组(P＜0.05).由此可见,GM-CSF表达载体可明显提高CPV VP2 DNA疫苗的免疫应答水平.     

鸡球虫病疫苗的研究进展

鸡球虫病是由艾美耳球虫感染鸡引起的一种危害极其严重的寄生原虫病。目前,控制球虫病主要还是依赖于药物,但由于球虫耐药株的频繁出现和人们对药物残留等问题的关注,使人们更加注重探讨从免疫预防的角度去控制球虫病。本文综述了鸡球虫病活疫苗(强毒疫苗和弱毒疫苗)的研究和应用现状及重组疫苗(DNA疫苗和重组蛋白疫苗)的研究进展,同时介绍了新型疫苗佐剂的研究情况。     

猪圆环病毒核酸疫苗pcDNA-PCV-ORF2-ISS的构建及分子佐剂联合免疫研究

用PCR方法扩增猪圆环病毒PCVwhn株编码CAP蛋白的基因ORF2,同时人工合成一段CpG序列,并设计上下游引物,进行扩增,定向插入到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建新型核酸疫苗(pcDNA-PCV-ORF2-ISS),并进行了酶切和测序鉴定.用构建的pcDNA-PCV-ORF2-ISS质粒以及pcDNA-PCV-ORF2与5种细胞因子分子佐剂质粒(IL-6/4、IL-2、IL-4、IL-6、IFN-γ真核表达质粒)联合对仔猪进行免疫试验.免疫后用间接ELISA法测定猪圆环病毒Ⅱ型特异性抗体IgG,用流式细胞仪测定猪血液CD3+、CD4+和CD8+T细胞亚类的数量.结果显示,成功构建含CpG免疫刺激序列的猪圆环病毒Ⅱ型核酸疫苗;pcDNA-PCV-ORF2-ISS在仔猪免疫实验能诱导细胞免疫并产生特异性抗体(P<0.05);用5种细胞因子分子佐荆质粒与pcDNA-PCV-ORF2疫苗同时免疫能显著提高DNA疫苗的免疫效果(P<0.05).分子佐剂免疫增强效果次序为:IL-6、CpG、IL-6/4、IL-2、IL-4和IFN-γ,表明IL-6和CpG最佳.     

DNA疫苗及其安全性

ＤＮＡ疫苗是在传统疫苗基础上发展起来的一种全新的疫苗，同传统的疫苗相比具有多方面的优越性。随着ＤＮＡ疫苗的深入研究，其应用也越来越广泛。本文回顾了ＤＮＡ疫苗的发展史，论述了ＤＮＡ疫苗的免疫机理和在病原微生物中的防制现状，并探讨了其安全性及需要解决的问题。