胞外多糖对野油菜黄单胞菌野油菜致病变种气孔入侵能力的 …

利用Ｔｎ５ｇｕｓＡ５插入诱变和标记置换等分子遗传学方法,构建了时取油菜黄单胞菌野油菜致病变种（Ｘａｎｔｈｏｍｏｎａｓｃａｍｐｅｓｔｒｉｓｐｖ,ｃａｍｐｅｓｔｒｉｓ）８００４菌株的系列突变体,其中有６个突变体的胞多多糖产量显著降低,将它们喷雾接种寄主植物萝卜时,有２个突变体仍具有一定的致病性,４个突变体无致病性,结合扫描电镜观察,我们认为胞外多糖产量影响着该病菌气孔入侵能力。     

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种一个新的致病相关基因的克隆和鉴定

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xcc)是十字花科植物重要的病原菌，能引起十字花科作物发生黑腐病．本课题组采用转座子Tn5gusA5对Xcc野生型菌株8004诱变，获得17280株Tn5gusA5突变体，并从中筛选到一批致病缺陷突变体，采用TAIL-PCR对致病缺陷突变体的Tn5gusA5插入位点进行定位，发现5株突变体的Tn5gusA5插在8004菌株的基因组ORFl857内(未发表资料)，该ORF功能尚未见报道．序列分析表明，ORFl857演绎的编码产物与铜绿假单胞菌(Pseudomonase aeruginosa)的ωbpL基因演绎的编码产物具有33％的一致性和45％的相似性，并具有第4家族的糖基转移酶功能域，因此本暂将ORFl857命名为ωbxL基因．对ωbxL基因进行缺失，获得的缺失突变体用剪叶法接种到寄主萝卜叶片时，缺失突变体完全丧失致病性，一段PCR合成的包含ωbxL基因的DNA片段能互补缺失突变体，恢复缺失突变体的致病性．这证实ωbxL基因是Xcc的一个新的致病相关基因．     

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种一个新的致病相关基因的克隆和鉴定

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xcc)是十字花科植物重要的病原菌,能引起十字花科作物发生黑腐病.本课题组采用转座子Tn5gusA5对Xcc野生型菌株8004诱变,获得17280株Tn5gusA5突变体,并从中筛选到一批致病缺陷突变体,采用TAIL-PCR对致病缺陷突变体的Tn5gusA5插入位点进行定位,发现5株突变体的Tn5gusA5插在8004菌株的基因组ORF1857内(未发表资料), 该ORF功能尚未见报道.序列分析表明,ORF1857演绎的编码产物与铜绿假单胞菌(Pseudomonase aeruginosa)的wbpL基因演绎的编码产物具有33%的一致性和45%的相似性,并具有第4家族的糖基转移酶功能域,因此本文暂将ORF1857命名为wbxL基因.对 wbxL基因进行缺失,获得的缺失突变体用剪叶法接种到寄主萝卜叶片时,缺失突变体完全丧失致病性,一段PCR合成的包含wbxL基因的DNA片段能互补缺失突变体,恢复缺失突变体的致病性.这证实wbxL基因是Xcc的一个新的致病相关基因.     

转录调节因子VrhR负调控野油菜黄单胞菌的致病力

以野油菜黄单胞菌（Xanthomonas campestris pv. campestris, Xcc）转录调节因子VrhR,VrhA和VrhB为研究对象,通过基因敲除和致病性分析确定它们在Xcc与宿主互作过程中的作用。结果表明:VrhR只含有HTH（helix-turn-helix）结构域;在基因组上vrhR位于其他2个lysR类转录调节因子（vrhA和vrhB）之间,但转录方向相反。vrhR突变会提高Xcc的致病能力,但vrhA和vrhB突变对病原菌的致病能力没有影响。同时, vrhR,vrhA和vrhB突变均不影响细菌的运动性及胞外酶（蛋白酶、纤维素酶和淀粉酶）的活性。     

野油菜黄单胞菌重组克隆pIXU9278对黄原胶生物合成的影响

用ＰＩＪ３２００作为载体,构建了包含１５６２个重组克隆野生型野油菜黄单胞菌的粘粒文库,通过三亲交配法,基因文库中的重组克隆可以在ＰＲＫ２０１３的帮助下,从Ｅ．ｃｏｄｉ中以ＸＣＣＮＡＵ－９２中,绝大多数重线克隆对黄原胶合成无影响,但导致菌株生长缓慢,工程菌株ＸＣＣＮＡＵ－９２７８（ＰＩＸＵ９２７８）在２８℃、１２０ｔ／ｍｉｎ条件下发酵７２ｈ,产量达３７．５０ｇ／ｋｇ,发酵液度力为１４６００ｍＰａ．ｓ     

野油菜黄单胞菌葡萄糖激酶基因的克隆与表达

葡萄糖激酶催化葡萄糖磷酸化生成葡萄糖-6-磷酸,是糖酵解的第一步反应,在野油菜黄单胞菌(Xcc)利用碳源代谢及其致病性中起重要作用.为了初步鉴定Xcc葡萄糖激酶基因功能,为研究其利用碳源相关代谢及致病性提供理论依据,以pQE30为表达载体,采用常规PCR技术对野油菜黄单胞菌Xcc8004基因组上注释为葡萄糖激酶的3个基因(XC_1166、XC_1223和XC_1976)进行了克隆与表达,该3个基因在大肠杆菌JM109中有较高表达量,经Ni2+金属层析柱纯化后分别得到带有3个His的融合蛋白XC_1166-His6、XC_1223-His6和XC_1976-His6,分析表明仅XC_1976的表达产物具有葡萄糖激酶活性,为Xcc8004葡萄糖激酶基因,经测定XC_1976-His6的最适反应温度为45℃,最适pH值为7.1,最适反应条件下比活力为(380.6±1.123) U/mg.     

水稻与油菜黄单胞菌菜豆致病变种非寄主互作体系中病原细菌过氧化氢的作用

 【目的】探讨互作体系中病原菌来源过氧化氢的作用。【方法】采用组织化学法通过透射电子显微镜技术观察水稻与油菜黄单胞菌菜豆致病变种互作体系中的过氧化氢积累的定位。【结果】突变体菌株细胞中烷基过氧化物还原酶亚基C的缺失导致胞内其余过氧化氢清除酶活性的补偿性显著上升,使胞内内源过氧化氢积累水平显著下降,并引起病原菌与水稻互作体系中的过氧化氢积累水平发生显著变化。【结论】病原细菌很可能是互作体系中过氧化氢的一个重要来源。病原细菌产生的过氧化氢很可能在非寄主互作中造成细菌周围植物细胞的损伤,对植物细胞具有潜在的毒性。     

野油菜黄单胞菌8004α-淀粉酶酶学性质研究

对野油菜黄单胞菌的α-淀粉酶进行了定位,确定该酶为胞外酶,且只有一型α-淀粉酶。采用切胶纯化得到纯酶,SDS-PAGE测得其相对分子质量为52ku。研究显示,该酶的最适作用温度为50℃,最适pH值为6.2,通过酶的稳定性研究发现该酶热稳定性较差,而pH值在4.86～10.47具有较好的稳定性。     

转座子诱变甘蓝黑腐病同黄单胞菌所获胞外多糖突变体的验证

利用转座子Ｔｎ５ｇｇｕｓＡ５上的抗性基因，通过“鸟抢法”克隆到用这种转座子诱变甘蓝黑腐黄单胞菌所获得的三个胞外多糖突变体菌株Ｔ１０６，Ｔ１１３和Ｔ１１７中的转座子及其相邻序死的ＤＮＡ片段，并利用含有这些片段重组质粒，通过标记置换构字突变体。     

榆黄菇胞外多糖液体发酵培养基的优化

榆黄菇发酵过程中各成分的比例对胞外多糖的产量有重要影响.正交试验结果表明,当发酵配方为马铃薯30%,蛋白胨0.1%,葡萄糖3%,KH2PO4+MgSO4·7H2O 0%时胞外多糖产量较高.     

野油菜黄单胞菌中长链3-酮脂酰ACP合成酶的鉴定

【目的】研究野油菜黄单胞菌Xanthomonas campestris 8004基因组中3个标注为3-酮脂酰ACP合成酶的基因Xcfab F1、Xcfab F2和Xcfab B在脂肪酸合成过程中的功能.【方法】将这3个基因分别克隆到表达载体p BAD24M,然后转化大肠埃希菌Escherichia coli的fab B和fab F温敏型突变株CY242和CY244,同时利用体外无细胞抽提物酶学分析Fab F1、Fab F2和Fab B蛋白活性.【结果和结论】Xcfab F1和Xcfab B基因分别能遗传互补大肠埃希菌fab F和fab B突变,而Xcfab F2基因则不能互补大肠埃希菌fab F或fab B突变.体外无细胞抽提物酶学分析表明Fab F1和Fab B都能完成辛脂酰-ACP的延伸,但Fab F2则不能完成该酶促反应.Xcfab B基因编码3-酮脂酰ACP合成酶I,Xcfab F1基因编码3-酮脂酰ACP合成酶II,而fab F2基因不参与中长链脂肪酸的合成.     

野油菜黄单胞菌群体感应的跨界信号交流被首次发现

群体感应(Quorum sensing,QS)是细菌根据自身分泌的信号分子的浓度感应细胞密度进而产生细菌群体行为的基因调控方式。由信号分子介导的信号传递途径不仅发生在细菌之间,也存在于真核生物与细菌之间。野油菜黄单胞菌(Xanthomonas campestris pv.campestris,     

榆黄菇发酵菌丝体及胞外多糖的影响因子研究

研究了NAA、2,4-DI、BA和L-Glu 4种生长因子在深层发酵中对榆黄菇菌丝体得率及胞外多糖产量的影响。结果表明,这4种因子都能使榆黄菇菌丝体得率及胞外多糖产量有不同程度的提高,并初步确定各种生长因子的最佳作用浓度。     

冠突散囊菌胞外多糖的分离纯化

冠突散囊菌液体深层发酵滤液经浓缩,醇析,透析冻干得多糖粗品.粗多糖经Sevag法脱蛋白,DEAE-52阴离子交换柱层析纯化得到4种多糖.将含量最高的多糖ECP-A经Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析得到纯化的冠突散囊菌胞外多糖(ECP-A1和ECP-A2),并测定其相对分子质量.用紫外光谱和红外光谱分析鉴定该多糖,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰,红外光谱揭示ECP-A1具有典型的多糖特征吸收峰,表明ECP-A1和ECP-A2为单一均匀组分的多糖.     

碳氮源对杏鲍菇菌丝胞外多糖产量的影响

[目的]筛选杏鲍菇产胞外多糖的最适碳源和氮源。[方法]利用单因子试验研究不同碳氮源及碳氮源含量对杏鲍菇菌丝胞外多糖产量的影响。[结果]在供试的5种碳源中,杏鲍菇胞外多糖在以淀粉为碳源时产量最大,其最佳浓度为6％,其次是麦芽糖。葡萄糖对菌丝生物量影响最大,高于淀粉和麦芽糖对菌丝生物量的影响。在供试的6种氮源中,有机氮源更适合杏鲍菇菌丝的生长和胞外多糖的生产。其中酵母膏对菌丝生物量和胞外多糖的影响最大,为最佳氮源,其最佳浓度为0．4％。其次是蛋白胨。[结论]不同碳源对胞外多糖产量与菌丝生物量的影响不成正相关,不同氮源对胞外多糖产量及菌丝生物量的影响成正相关。     

Derxia gummosa var.peritricha 7954菌株胞外多糖溶液的性能

胶德克斯氏菌周毛变种7954菌株所产生的胞外多糖是一种粘度很高的水溶性物质,其水溶液具有良好的流变特性,为典型的假塑性流体。其粘度随浓度增加而增大,在50～75℃加热处理的温度范围内,其粘度随温度升高而增大,耐酸碱能力强,但耐盐力差。     

磁处理对蛹虫草胞外多糖的影响

[目的]探明磁处理对蛹虫草（Cordyceps militaris）产生胞外多糖的影响,为蛹虫草胞外多糖的进一步研究奠定基础。[方法]采用不同磁场强度及不同处理时间对蛹虫草的液体菌种进行处理,采用乙醇沉淀法提取其胞外多糖。[结果]不同梯度的磁场强度处理对蛹虫草胞外多糖的影响明显,随着磁处理强度的增大,蛹虫草产胞外多糖的量呈上升趋势,但均低于对照。[结论]磁处理对蛹虫草胞外多糖的产生起抑制作用。     

几种生长因子对鸡腿菇菌丝体及胞外多糖的影响

研究了萘乙酸、2,4-二氯苯氧乙酸、3-吲哚丁酸及L-Glu等几种生长因子在发酵过程中对鸡腿菇(Coprinus comatus)菌丝体得率及胞外多糖产量的影响。在摇瓶转速为160 r/min,温度25℃,培养时间3 d的条件下,几种因子能使鸡腿菇菌丝体得率及胞外多糖产量有不同程度的提高,并初步确定出各种生长因子的最佳作用浓度。     

芽孢杆菌1JN2产胞外多糖协助寄主植物缓解镉胁迫

笔者所在课题组前期筛选到1株芽孢杆菌,能够通过胞外分泌物吸附作用协助寄主植物缓解镉离子胁迫.为了深入研究该菌株吸附镉离子的胞外分泌物组分,构建菌株胞外多糖缺失突变体,首先通过共培养试验比较野生型及突变体菌株在镉离子处理后的生长量变化、镉离子吸附能力;其次通过温室试验评价菌株协助寄主缓解镉胁迫效果及菌株定殖量变化;最后通...     

两种不同形态猪苓菌核液体发酵生产胞外多糖的分析

对2种不同形态猪苓(Polyporus umbellatus)菌核液体发酵生产胞外多糖进行了研究。结果表明,猪苓菌核液体发酵生产胞外多糖的发酵条件是温度28℃,pH 4.8~5.5,振荡速度110 r/min,通气量4 L/min,罐压0.090 0 MPa,发酵7 d,每12 h取样测其胞外多糖的含量,在72 h和60 h时猪苓(FrCM2)和猪苓(FrCM3)液体发酵产胞外多糖的含量分别为1.783和0.044 mg/mL,猪苓(FrCM2)液体发酵产胞外多糖含量明显高于猪苓(FrCM3)。