不同碳氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响

【目的】探讨不同碳、氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响,为红汁乳菇的开发利用提供依据。【方法】以红汁乳菇LH-1菌株为供试材料,以菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数为测定指标,研究了13种碳源、22种氮源对红汁乳菇菌丝生长的影响。【结果】红汁乳菇具有较广的碳源及氮源谱,在13种碳源中,以果糖为碳源时,红汁乳菇菌落长势最好,其菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数分别为48.31mm、8.37mm/d和41.87;在22种氮源中,以酵母膏为氮源时红汁乳菇菌落长势最好,其菌落直径、菌丝生长速率和菌丝生长指数分别为50.82mm、7.84mm/d和39.18;红汁乳菇对氨基酸及铵盐类物质利用较差。【结论】红汁乳菇菌丝生长的最佳碳源、氮源分别为果糖和酵母膏。     

松乳菇菌株的分离鉴定及其与马尾松的互作效应

【目的】开展松乳菇的分离鉴定及松乳菇与马尾松的共培养研究,以期通过与马尾松共培养实现松乳菇的规模栽培。【方法】试材松乳菇子实体采自湖北恩施天然马尾松次生林,使用组织分离法获得松乳菇菌株,采用r DNA ITS分子鉴定分离菌株的种属,利用One-way ANOVA分析松乳菇接种对马尾松菌根侵染率、苗木生长及氮（N）、磷（P）、钾（K）含量的影响,并利用Duncan法分析马尾松菌根侵染率与松乳菇子实体生长指标的相关性。【结果】r DNA ITS分子鉴定3株真菌均为松乳菇,其在松木屑、棉籽壳等基质上能实现菌丝体的良好生长,属于兼性腐生菌根真菌。松乳菇与马尾松共培养结果显示,3株松乳菇均与马尾松形成外生菌根,在共培养11个月后,马尾松的菌根侵染率均在95%以上,外源接种松乳菇显著增加马尾松的干重、株高、地径、主根长和侧根数（P<0.05,下同）,与CK相比,接种处理马尾松干重增加5.41%～19.25%,株高增加11.15%～20.59%,主根长增加12.58%～28.90%,侧根数增加34.88%～46.42%,地径增加幅度最大,比CK增加52.63%～68.42%;外源接种松乳菇显著...     

基于菌株生长和菌根苗品质的红汁乳菇菌株筛选

【目的】筛选用于菌根苗接种的高质量红汁乳菇菌株,为提高红汁乳菇产量提供支持。【方法】以10个红汁乳菇菌株（JH1、JH2、JH4、JH5、JH7、JH8、JH10、JH11、JH12、JH13）为研究对象,将菌株分别在PDA和BAF培养基上培养后,测定菌株生长势指标（菌丝生长速度、菌丝生物量）;将红汁乳菇液体菌种接种于马尾松幼苗根部合成菌根苗,以不接种为对照（CK）,培养210 d后对菌根合成能力（菌根数量、菌根侵染率、菌根化率）和宿主植物生长量（苗高、主根长、地径、干质量）进行测定。对上述9个参数进行相关性分析,并用隶属函数法对菌株性状进行综合评价。【结果】①在PDA固体培养基上,以菌株JH1菌丝生长速度最快,达到3.17 mm/d;在BAF液体培养基上,以菌株JH5的菌丝生物量最大,为3.28 g/L。②所有菌株均能与马尾松根系形成外生菌根,但菌根形态并不相同。接种红汁乳菇菌株JH5的马尾松苗的菌根数量为45.65个/株,菌根化率为90.67%,菌根侵染率为79.60%,显著高于其他9个菌株,表现出较强的合成菌根苗能力。③接种不同红汁乳菇菌株的马尾松苗,在苗高、主根长、地径和干质量等指标上表现各异。接种菌株JH4的马尾松苗高、主根长和干质量表现最优,较对照分别提高24.45%,16.72%和53.33%;接种菌株JH5的马尾松苗地径生长量表现最优,较对照提高5.19%。④相关性分析表明,菌丝生物量与菌根化率和菌根苗干质量呈极显著正相关（P＜0.01）,菌根数量与菌根化率和菌根苗地径呈极显著正相关（P＜0.01）。⑤基于隶属函数法的综合评价结果表明,红汁乳菇JH5为适合培育菌根苗的最佳菌株,JH4和JH7为次优菌株。【结论】筛选出1个优良红汁乳菇菌株JH5,该菌株的生长势和菌根苗品质整体表现较好。     

红汁乳菇液体发酵基质配方的优化

【目的】研究不同营养物质对红汁乳菇发酵液抑菌效果的影响,为红汁乳菇的开发利用提供依据。【方法】以红汁乳菇菌株SH-3为研究对象,大肠杆菌为指示菌,用摇瓶培养法研究不同碳源、氮源对红汁乳菇发酵液抑菌效果的影响,采用二次通用旋转组合设计安排试验方案,并通过回归分析和响应面分析优化红汁乳菇发酵基质的配方。【结果】在试验范围内,以葡萄糖和麦芽糖为碳源,蛋白胨和酵母膏为氮源时,发酵液的抑菌效果最佳;最佳的液体发酵基质配方为:葡萄糖48.30g/L,麦芽糖45.29g/L,蛋白胨4.69g/L,酵母膏4.12g/L,KH2PO41.0g/L,MgSO40.5g/L,水1 000mL(pH=7.0),抑菌圈理论直径为2.01cm。【结论】发酵基质配方影响发酵液的抑菌效果,红汁乳菇发酵的最佳碳源为葡萄糖和麦芽糖,最佳氮源为蛋白胨和酵母膏,最终确定的最佳基质配方对提高红汁乳菇发酵的经济效益有一定参考作用。     

红汁乳菇、半血红乳菇及橙色乳菇的rDNA ITS序列分析

从分子角度对红汁乳菇(Lactarius hatsudake)、半血红乳菇(Lactarius semisangui fluus)及橙色乳菇(Lactarius akahatsu)的分类地位进行了阐述。利用真菌通用引物对湖南衡阳的红汁乳菇rDNA的转录间隔区(ITS)进行扩增、测序。所得序列与GenBank中的半血红乳菇及橙色乳菇的ITS序列比较,最后得出Lactarius semisanguifluus和Lactarius hatsudake是同物异名,而Lactarius semisanguifluus和Lactarius akahatsu则不是同种的结论;试验中还发现GenBank中的AF096988 Lactarius semisanguifluus是错误的命名种,应该是乳菇属中的松乳菇。     

新疆红枣软腐病病原菌的鉴定

【目的】鉴定枣软腐病的致病病原,为有针对性的开展病害防治奠定基础。【方法】采用病原菌常规分离技术获取疑似病原物,通过形态学特征和回接验证对病原进行鉴定;利用PCR技术获取病原菌的ITS基因的序列片段,通过与Gen Bank中已有的相关序列进行比对分析,构建遗传进化树,结合形态学鉴定和致病性实验验证,鉴定病原。【结果】新疆枣软腐病病原的形态学特征与米根霉(Rhizopus oryzae)相似。枣软腐病的病原与Gen Bank中已知的米根霉菌株的ITS序列显示99%~100%的相似性,在遗传进化树分析中并聚在同一组。【结论】基于形态学特征、致病性试验以及分子鉴定结果,新疆枣软腐病病原被鉴定为Rhizopus oryzae。     

贵州芒果畸形病病原菌的分离与鉴定

【目的】确定引起贵州兴义芒果畸形病的病原菌种类,为防治该病提供理论依据。【方法】以典型的芒果畸形病株花序为试验材料,采用组织分离法获得纯化菌株,通过离体接种和活体接种方法进行分离菌株的致病性测定、采用形态学结合r DNA-ITS序列的分子系统学方法鉴定病原菌的种类。【结果】分离真菌菌株MGXJB-1在离体条件下能侵染芒果果实,形成褐色的水渍状圆形病斑,在活体条件下能侵染芒果花序并引起畸形病害,根据培养特征和显微形态学特征结合r DNA-ITS序列的分子系统学鉴定该菌株为腐皮镰刀菌(Fusarium solani)。【结论】贵州兴义芒果畸形病的病原菌为腐皮镰刀菌(F.solani),是国内首次报道腐皮镰刀菌(F.solani)能够引起芒果畸形病害。     

基于rDNA序列分析的3种丛枝菌根真菌分子鉴定方法比较

【目的】比较基于rDNA序列分析的3种丛枝菌根（AM）真菌分子鉴定方法,为提高AM真菌在种水平分子鉴定的准确性提供参考。【方法】对从柑橘和甘蔗等广西地区主要作物的根际土壤中分离出的AM真菌菌株（编号为A6、B3和GY3-1）进行形态学鉴定,再通过巢式PCR分别扩增AM真菌的18SrDNA、28Sr DNA及含ITS1、5.8SrDNA和ITS2的序列（简写为ITS1+5.8S+ITS2）,分别将其测序结果与GenBank数据库进行比对,并构建系统发育进化树,再结合形态学鉴定结果比较基于3个r DNA序列分析分子鉴定方法的准确性。【结果】菌株A6、B3和GY3-1的形态特征分别与幼套近明球囊霉（Claroideoglomus etunicatum）、黏质隔球囊霉（Septoglomus viscosum）和摩西斗管囊霉（Funneliformismosseae）一致。基于18SrDNA序列,将菌株A6鉴定为近明球囊霉属（Claroideoglomus）,菌株GY3-1鉴定为摩西斗管囊霉（F. moessae）,菌株B3鉴定为黏质隔球囊霉（S. viscosum）。基于28S rDNA序列...     

贵州地区松乳菇生态环境及其影响因子

为初步阐明贵州地区发生橙黄色松乳菇、紫铜色松乳菇的生态环境以及影响松乳菇发生的主要环境因子,采用样线与样方结合法调查松乳菇发生区域的植物多样性、其他大型真菌种类及其郁闭度、温湿度、坡度、腐殖层厚度、土壤类型、pH值等环境因子指标。通过Simpson优势度指数、Shannon-Wiener多样性指数、Margalef丰富度指数、Pielou均匀度指数分析植物群落多样性。结果表明,发生橙黄色松乳菇植物群落的植物种类、数量、多样性指数均高于发生紫铜色松乳菇植物群落,橙黄色松乳菇植物群落的均匀性和稳定性高。在所调查的环境因子中,影响2种松乳菇生长的主要因素是群落坡度、群落植被多样性。本调查结果有助于阐明贵州地区松乳菇的发生机制,为松乳菇的可持续发展和半人工栽培提供依据。     

1株野生高大环柄菇的鉴定、生物学特性及仿野生栽培

【目的】为丰富山东省食用菌栽培品种,实现高大环柄菇的人工栽培提供参考依据。【方法】采用形态学和分子学相结合的方法对采自烟台的1株野生大环柄菇属真菌进行鉴定;采用单因素试验,以菌丝生长量为指标研究其生物学特性,并在此基础上进行仿野生栽培。【结果】经形态学和分子学鉴定,确定该真菌(编号EF-5)为大环柄菇属高大环柄菇,其子实体直径8.5cm,上有同心圆状排列的棕褐色鳞片,子实体中央乳头状凸起,褐色;菌柄中生,长8.2cm,直径0.8cm,上有双层移动菌环;菌褶近白色,不等长,离生,孢子印白色;菌落不规则圆形,灰白色,菌丝多分枝,具锁状联合;其菌丝生长的最佳条件:氮源为土豆浸粉,碳源为糖蜜,温度为25℃,pH为8.0,无机盐为硫酸锰;此菌在麦粒二级种培养基上的生长时间为60d,接种栽培料后66d长满菌袋,经仿野生栽培成功获得了子实体。【结论】采集的野生大环柄菇属真菌为高大环柄菇;此菌二级种生长缓慢,栽培周期长,在实验室无法获得子实体,经仿野生栽培虽然获得子实体,但总产量较低。     

PCR-DGGE指纹技术与分离技术结合筛选藏灵菇奶发酵过程的优势菌

【目的】获得藏灵菇发酵奶发酵过程的优势菌，并开发出纯培养发酵剂替代藏灵菇进行这类新型发酵奶的工业化生产。【方法】将PCR-DGGE指纹技术和传统培养方法结合，对藏灵菇发酵奶中微生物种群结构进行研究。【结果】DGGE指纹图谱显示混合菌群中细菌有4条条带无对应的纯菌株，而纯菌株中有2株在混合菌群的图谱上没有相应的条带。通过对150株分离菌的PCR-DGGE指纹图谱分析，获得了8组乳酸菌和5组酵母菌，进一步的序列分析和相似性比较，确立了藏灵菇发酵奶中的优势菌为肠膜明串珠菌、乳酸乳球菌、开菲尔乳杆菌、干酪乳杆菌和克鲁维酵母，单孢酵母、啤酒酵母、假丝酵母发酵后期成为优势菌。【结论】本研究建立了一种基于分子生态的微生物高效筛选技术，为藏灵菇纯培养发酵剂的开发提供了理论依据及丰富的菌种资源。     

锐棘秃马勃Calvatia holothurioides——中国一新记录种

【目的】确定在广东省广州市中山大学校园采集到的1份大型真菌标本的分类地位。【方法】运用分子系统学分析(构建基于r DNA ITS序列系统发育树)和传统大型真菌形态学鉴定相结合的方法,对采集到的标本进行了鉴定和描述。形态学鉴定包括宏观和微观两方面,宏观特征主要依据采集标本时在野外拍摄的新鲜子实体图片和相关的测量描述记录,微观特征则根据干标本进行徒手切片及显微观察和测量(包括对孢子形态和纹饰的扫描电镜观测)。【结果】采集到的标本与锐棘秃马勃(Calvatia holothurioides)的ITS序列相似性高达99%,两者在构建的系统发育树中聚成一枝,且宏观和微观形态特征也基本一致。【结论】根据分子系统学和形态学鉴定,采集到的标本确定为锐棘秃马勃(C.holothurioides),为中国新记录种。     

贵州百香果病毒病病原的鉴定

【目的】鉴定侵染贵州百香果的病毒病病原种类,为建立分子检测和防控体系提供理论依据。【方法】采集贵州百香果主要种植地疑似感病的百香果样叶,利用去真核生物核糖体rRNA构建测序文库,对疑似病毒侵染的样品进行高通量测序和病毒种类鉴定。【结果】样本中含有夜来香花叶病毒(Telosma mosaic virus, TeMV)、东亚西番莲病毒(East Asian Passiflora Virus, EAPV)和西番莲潜隐病毒(Passiflora latent virus, PLV),占比分别为1.59%、63.65%和34.72%。TeMV和EAPV贵州分离物与已报道分离物的核苷酸序列一致性分别为87.6%～99.7%和85.2%～99.8%。PLV贵州分离物CP基因核苷酸序列一致性为99.5%～100%,与已报道分离物核苷酸序列一致性为93.0%～95.4%。系统进化分析表明,PLV分离物单独形成1个分支,相同地区的分离物优先聚集在一起,表现出较强的地域性。【结论】侵染贵州百香果的病毒病病原主要是TeMV、EAPV和PLV。     

水稻叶部一种植物线虫的形态和分子鉴定

【目的】旨在明确河南省开封市祥符区部分水稻长势弱,叶尖表现灰白干枯、扭曲干尖等症状的病因,为进一步研究水稻上该病害的发生危害规律和防治提供科学依据。【方法】通过改良贝尔曼漏斗法和直接浸泡法分离采集水稻地上部的线虫,挑取单条雌虫在胡萝卜愈伤组织上进行单雌扩繁,采用形态学和分子生物学相结合的方法对纯化培养的水稻线虫KF-1群体进行了种类鉴定。【结果】形态学结果表明待鉴定线虫与水稻干尖线虫(Aphelenchoides besseyi Christie, 1942)的形态特征较一致。rDNA的ITS和28S rRNA基因中D2-D3区序列比对结果表明,待鉴定线虫与GenBank中水稻干尖线虫序列具有高度相似性,最高分别达到100%和98.98%。基于rDNA-ITS和28S D2-D3区序列构建的系统进化树结果与已知鉴定结果相一致,待鉴定线虫与其他水稻干尖种群位于同一高度支持的分支。【结论】通过形态和分子鉴定,确定了造成河南开封市祥符区部分水稻叶尖干枯的病原为水稻干尖线虫,这是河南东部地区首次发现该线虫的发生危害,应采取相应措施避免该线虫病害的进一步扩散蔓延。     

红汁乳菇气候适应性初探

红汁乳菇生长受气象因子影响较大,主要是温度因子和湿度因子。红汁乳菇子实体开始生长的适宜温度为:始菇前7d的平均温度在16~20℃左右,最小相对湿度在45%以上。高于20℃时配合高湿68%以上,也可以出菇。春季红汁乳菇在连续7d平均温度高于24℃,湿度低于37%时将结束生长。     

石河子地区寄生性杂草菟丝子的种类鉴定

【目的】明确石河子市及周边植物地区上寄生性杂草菟丝子的种类,为其科学防除、有效监控提供依据。【方法】在石河子市内及其周边不同寄主上采集菟丝子茎、花和成熟、饱满的种子,采用形态学特征观察及ITS、rbc L、trn L-F序列分析对其进行鉴定。【结果】经形态学特征观察结合ITS、rbc L、trn L-F序列分析结果将37份菟丝子样品鉴定为2个种,分别为单柱菟丝子(Cuscuta monogyna)和田野菟丝子(Cuscuta campestris)。【结论】单柱菟丝子和田野菟丝子是新疆石河子地区的主要危害种。     

1株野生红侧耳菌株分离鉴定及人工驯化栽培

【目的】对1株野生侧耳菌株PD2021进行分离鉴定及人工驯化栽培,为该菌株的大规模栽培及开发利用提供理论依据。【方法】以从云南省西双版纳州景洪市采集到的1株野生侧耳菌株PD2021为试材,采用组织分离法获得其母种,结合子实体形态学观察、侧耳属DNA条形码和分子系统发育分析界定其分类地位,并通过培养特性试验探究其生物学特性及出菇条件,采用正交试验筛选人工室内栽培该菌的栽培配方。【结果】通过形态学观察发现,PD2021菌株实体为呈淡米黄色,孢子印为白色,菌盖成熟时边缘呈波浪形花瓣状,菌盖边缘与中部交界处有一圈环状、参差不齐的条纹、整个子实体似一朵花子。结合侧耳属DNA条形码分析结果,将PD2021菌株鉴定为红侧耳花形变种（Pleurotusdjamor var. floreus）。PD2021菌株的ITS序列和延伸因子基因（EF-1α）序列均与P. djamor相似性最高,处于系统发育进化树中的同一分支,但二者分支长短不一,表明二者序列出现变异,进一步证明PD2021菌株为红侧耳的变种。该菌株最适生长的碳源为可溶性淀粉,最适生长的氮源为酵母粉,最适温度为26℃;菌丝耐高温能力强,44℃下处...     

玉米品种“家佳荣2号”杂交种子纯度的SNP分子鉴定

【目的】验证SNP分子标记中HRM技术鉴定结果的可靠性,为杂交玉米种子纯度鉴定方法的选择提供参考。【方法】以杂交种家佳荣2号及其父母本、近似杂交组合JR02为材料,采用田间小区种植鉴定和SNP分子标记中的HRM技术两种方法对杂交玉米家佳荣2号的同一批种子样品进行纯度鉴定。【结果】田间小区种植纯度鉴定结果为97.8%,SNP分子标记纯度鉴定结果为97.1%。【结论】SNP分子标记中的HRM技术鉴定结果可靠,可作为杂交玉米种子的纯度鉴定方法之一。     

工业大麻种子及苗期性别鉴定方法的研究

【目的】探究工业大麻在生产实践中减少雄株比例,提高雌株比例的方法。【方法】通过形态学观察法、生理代谢差异比较、化学物质鉴定法及DNA分子标记鉴定法对工业大麻的种子及未进行性别分化的苗期叶片进行性别鉴定。【结果】通过测定雌雄工业大麻叶片中的NADH和TTCH含量发现,雌雄性工业大麻叶片的NADH和TTCH含量差异明显。通过显色反应发现,甲基红染色20 h后,雄麻变为紫红色,雌麻变为黄褐色。溴麝香草酚蓝染色12 h后,雌麻变为草绿色,雄麻变为天蓝色。快蓝B盐染色20 h后,雌叶表层纤毛变成淡红色,雄叶纤毛仍为无色透明态。通过特异性序列OPV-08和SCAR1可鉴定工业大麻种子及苗期的雌雄性。【结论】形态学观察法、生理代谢差异比较、化学物质鉴定法及DNA分子标记鉴定法（特异性序列OPV-08和SCAR1）可用于工业大麻的性别鉴定。     

甘蓝一代杂种纯度SSR鉴定与田间鉴定的一致性研究

【目的】分析甘蓝杂交种纯度的SSR分子标记鉴定结果与田间形态学鉴定结果的一致性,寻找一种快速、准确鉴定甘蓝杂交种纯度的方法。【方法】选用SSR分子标记,筛选杂交种具有父母本互补带型的引物,用其鉴定“秦甘50”杂交种的纯度,并与田间常规鉴定结果的一致性进行比较。【结果】300对SSR分子标记引物中,有1对引物SQ1019对“秦甘50”杂交种表现为父母本互补带型;利用引物SQ1019标记鉴定“秦甘50”大田杂交种的纯度为96.3%;“秦甘50”大田杂交种经田间鉴定纯度为96.0%,2种鉴定结果的一致性高达99.7%。【结论】SQ1019是SSR分子标记“秦甘50”杂交种的特异引物,SSR分子标记是一种快速、准确鉴定“秦甘50”杂交种纯度的方法,其结果与田间常规鉴定结果相一致。