犊牛腹泻源大肠杆菌生物被膜形成相关基因检测及菌株致病力测定

利用PCR技术检测25株犊牛腹泻源大肠杆菌的生物被膜形成相关基因,并通过动物试验测定了菌株的致病力,分析生物被膜形成相关基因与菌株致病力的关系。结果显示:flu在所检测25株菌中出现的频率最高,占68%;其次是ropS和fimA,分别占44%和40%;espA占24%;fliC占10%。6株生物被膜阳性菌株的动物攻毒试验显示,其致病力明显强于生物被膜阴性菌株,且含有3种或3种以上待测基因。本试验为探讨生物被膜与大肠杆菌致病性的关系提供一定的基础。     

大肠杆菌生物被膜与耐药性的关系

生物被膜的形成是大肠杆菌引起消化道反复难治性感染的重要因素。大肠杆菌形成生物被膜后使感染易于慢性化、控制困难,具有高度耐药性的同时还能逃避免疫系统的攻击和抗菌药物的杀伤作用。生物被膜的耐药机制主要包括营养限制、渗透障碍、表型结构学说等。现就大肠杆菌生物被膜的形成、耐药机制及其防治策略等研究现状做一综述。     

包头地区仔猪源致泻性大肠杆菌进化分群、生物被膜形成能力及耐药性检测

为分析包头地区仔猪源致泻性大肠杆菌进化分群情况、生物被膜形成能力(BF)及耐药性情况。试验采用PCR法、结晶紫微孔板法和K-B药敏纸片法对48株仔猪源致泻性大肠杆菌进行进化分群、生物被膜形成能力及耐药性检测。结果显示,48株仔猪源致泻性大肠杆菌中以B2群和D群流行为主,分别占分离菌株的35.4%和25.0%;48株仔猪源致泻性大肠杆菌对氨苄西林、阿莫西林、新霉素等7种药物耐药率在58.3%以上,对其他药物的耐药率在11.9%～31.3%;48株仔猪源致泻性大肠杆菌中强形成膜能力菌株有20株、中形成膜能力菌株有16株、弱形成膜能力菌株有7株、不形成BF菌株的有5株,分别占分离菌株的41.7%、33.3%、14.6%、10.4%。经分析,48株仔猪源致泻性大肠杆菌的BF形成能力与多黏菌素、新霉素、磺胺间甲氧嘧啶、氟苯尼考、恩诺沙星、氨苄西林、阿莫西林7种药物耐药性存在一定的相关性。本试验为临床中合理用药及该病的防控提供科学依据。     

河南猪源致病性大肠杆菌分离、鉴定及其生物学特性

从河南省不同地区采集腹泻死亡仔猪进行病原分离鉴定,通过对细菌形态观察、PCR检测、生化试验以及小鼠毒力试验鉴定出了8株具有致病性大肠杆菌。通过WHO推荐的Kirby-Bauer(K-B)法测定8株大肠杆菌对21种抗菌药物的耐药性,并进一步对分离的8株大肠杆菌进行运动性以及生物被膜形成特性进行比较。生化特性结果表明8株大肠杆菌对各种糖的分解能力无明显差异;耐药性结果表明8株大肠杆菌均是多重耐药菌株,并且8株大肠杆菌在半固体培养基上均具有运动性,形成较明显的运动圈;生物被膜表型检测结果表明:有4株大肠杆菌具有较强的生物膜形成能力。本试验为进一步研究河南地区大肠杆菌的流行病学和探讨生物被膜和致病性、毒力之间的相关性奠定基础。     

宁夏地区犊牛腹泻源大肠杆菌的分离鉴定

为了解宁夏地区犊牛腹泻大肠杆菌的耐药情况及血清型分布,采集犊牛腹泻样本35份,进行大肠杆菌的分离鉴定、药敏试验和血清型鉴定。结果显示,共分离鉴定得到26株大肠杆菌,对四环素、阿莫西林100%耐药,对哌拉西林、氨苄西林、头孢唑啉的耐药率大于95%,对阿米卡星较敏感,耐药率为19.23%;最多对20种抗菌药物耐药,占7.69%(2/26)。10株可定型,16株未定型;已定型的10株大肠杆菌分属7个血清型,分别为O2、O9、O20、O26、O36、O44和O64,优势血清型是O20和O26。结果表明,宁夏地区犊牛腹泻大肠杆菌对抗生素的耐药率高,多重耐药普遍,耐药现象严重。     

河南省濮阳市犊牛腹泻大肠杆菌分离鉴定及生物学特性分析

为了解河南省濮阳市致犊牛腹泻大肠杆菌的致病性、血清型、生物被膜形成能力及耐药性等生物学特性,对2018—2020年采集的243份腹泻犊牛肛拭子以及粪便、肝脏等病料样品进行大肠杆菌分离鉴定,采用人工感染小鼠试验、玻板凝集试验以及结晶紫微孔板法和K-B药敏纸片法,对分离的致病性大肠杆菌进行相关特性检测。结果显示：从243份病料样品中分离到87株致病性大肠杆菌,致病性大肠杆菌分离率为35.8%（87/243）;分离的致病性大肠杆菌分属于14种血清型,其中O101（18.4%）、O38（17.2%）和O142（14.9%）为优势血清型;分离的致病性大肠杆菌中,被膜形成能力强的24株（26.6%）,中等的34株（43.6%）,弱的17株（19.5%）,不形成的12株（15.4%）;分离的致病性大肠杆菌对阿莫西林、氨苄西林、链霉素10种药物的耐药率较高,均在49.4%以上。结果表明：致病性大肠杆菌在濮阳市可能呈地方性流行,O101、O38、O142为犊牛源优势血清型;该地的致病性大肠杆菌外界生存能力较强,且对多种临床常用药物产生了耐药性。因此,应采取综合防控措施,科学使用敏感抗菌药物,研制优势血清型多价疫苗,加强犊牛大肠杆菌性腹泻的防控。     

小檗碱对小鼠感染犊牛源生物被膜阳性、多重耐药大肠杆菌的体内抑菌作用

为阐明小檗碱对小鼠感染犊牛源生物被膜阳性、多重耐药大肠杆菌的体内抑菌作用,试验采用微量肉汤稀释法确定41株分离株的MIC值|采用改良结晶紫染色法,确定其生物被膜形成能力|采用ELISA法检测小鼠血清中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量|采用血常规检测小鼠血液中白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数目及血红蛋白含量。结果显示：分离菌株对四环素、氨苄西林、甲氧苄啶、磺胺嘧啶耐药率较高,对阿米卡星、米诺环素、头孢西丁较为敏感|生物被膜形成能力无、弱、中、强的菌株数分别为14、10、7、10株|生物被膜阳性大肠杆菌耐10种以上药物的菌株占比73.9%,且多重耐药菌株占比66.7%|生物被膜强阳菌株中的多重耐药菌株占比80%|小檗碱高、低剂量组及联合给药组可不同程度降低小鼠血清中促炎因子的含量,降低血液中白细胞、淋巴细胞、中性粒细胞数目,并升高血红蛋白浓度。犊牛源大肠杆菌形成生物被膜可增强自身多重耐药性,且小檗碱具有成为临床治疗由生物被膜阳性、多重耐药大肠杆菌引起的犊牛腹泻病药物的潜力。[关键词] 犊牛|大肠杆菌|生物被膜|小檗碱|促炎因子     

生物被膜形成对猪源沙门氏菌耐药性和毒力的影响

旨在探究猪源沙门氏菌生物被膜形成能力(成膜能力)对其耐药性和毒力的影响.通过96孔微量板法、K-B纸片法、微量稀释法和寇氏改良法,测定来源于腹泻仔猪的69株沙门氏菌的成膜能力、耐药表型、最小抑菌浓度(MIC)和对小鼠的半数致死量(LD50).结果显示,69株沙门氏菌成膜阳性率为92.8％(64/69),以弱阳性(1+)...     

禽致病性大肠杆菌生物被膜的形成及其影响因素

为确定影响细菌生物被膜(BF)的形成条件,本研究采用BF体外定性观察和定量粘附性检测两种方法对1株野生禽致病性大肠杆菌(E.coli)在不同环境(培养时间、培养基类型、引导载体类型、营养条件)下产生BF的差异进行了研究。结果显示野生禽致病性E.coli其宿主体外BF最适形成条件是培养时间为48h,培养基为5%TSB、引导载体为平底96孔聚苯乙烯微孔板(美国Corning Costar)。其生长周期为8h时开始起始粘附、24h形成若干微菌落、36h微菌落粘连、48h形成完整的BF、72h细菌脱落开始下一轮的BF生长。糖分和适量的无机盐都可以在一定程度上促进BF的形成和被膜内细菌的粘附性提高。该研究表明禽致病性E.coliBF的形成周期,并为抑制其形成提供了实验依据。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为确定引起湘西北地区某肉牛养殖场犊牛腹泻发生的致病菌种类并分析其耐药性,采用常规培养、革兰染色镜检和生化试验等方法对致病菌进行分离鉴定,利用药物纸片琼脂扩散法(Kirby-Bauer)对分离菌进行药敏试验。结果表明,引起犊牛腹泻的主要致病菌为大肠杆菌;临床分离的大肠杆菌对头孢哌酮、头孢唑林、米诺环素、头孢曲松4种抗生素敏感;对头孢呋辛和头孢他啶2种抗生素中度敏感;对头孢氨苄、哌拉西林、红霉素、万古霉素、强力霉素、青霉素、氨苄西林、羧苄西林、麦迪霉素、环丙沙星、链霉素、丁胺卡那霉素、头孢拉定、庆大霉素、卡那霉素、苯唑西林、复方新诺明、诺氟沙星、奥复酸、四环素、多西环素、林可霉素22种抗菌药物产生耐药性。分离出的大肠杆菌对多种抗菌药物产生耐药性,研究结果为养殖场科学诊断和治疗犊牛腹泻提供了有效依据。     

犊牛腹泻大肠杆菌的分离鉴定和耐药性检测

为了分析南京地区奶牛场犊牛腹泻的原因,对犊牛腹泻病料进行细菌分离培养,获得了27株细菌。本试验对这些细菌进行了培养特性、染色特性、生化特性、血清型鉴定、药敏试验和TEM、SHV、CTX-M-1、CTX-M-9型超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因的检测。结果显示27株细菌均为大肠杆菌,只有1株细菌对头孢噻吩、头孢唑啉和头孢呋辛耐药,且此菌株检测出CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶基因。试验结果表明犊牛腹泻是由大肠杆菌引起的,犊牛腹泻大肠杆菌能产生CTX-M-1型超广谱β-内酰胺酶,导致对头孢类抗生素耐药性的发生。     

健康牦牛源大肠杆菌耐药性、生物被膜能力及Ⅰ类整合子检测

试验分别采用微量肉汤稀释法、改良结晶紫半定量染色法和普通PCR方法对分离自健康牦牛的大肠杆菌进行耐药性、生物被膜能力及Ⅰ类整合子检测。结果表明:分离菌株对利福平、氟苯尼考和头孢噻呋的耐药率较高,对多西环素和庆大霉素次之,对氟喹诺酮类恩诺沙星和左旋氧氟沙星的耐药率在30%以上。96.84%的菌株有不同的生物被膜表型,只有3.16%的菌株无生物被膜形成能力,且大多数菌株表现出弱的生物被膜表型,占菌株总数的57.52%。30.82%的菌株携带Ⅰ类整合酶基因intⅠ1。     

动物源性沙门菌的血清型、生物被膜形成能力和耐药性分析

本研究旨在探讨动物源性沙门菌的血清型分布、生物被膜形成能力及其耐药性.从不同动物病料中分离细菌,以PCR方法鉴定沙门菌,结合玻片凝集法和16S rRNA序列测定确定沙门菌的血清型和分布,结晶紫染色定量法检测分离株的生物被膜形成能力,药敏试验检测分离菌对常用药物的敏感性.结果共分离鉴定出58株沙门菌,包括鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、肠炎沙门菌、丙型副伤寒沙门菌、乙型副伤寒沙门菌、都柏林沙门菌和阿哥那沙门菌等7种血清型,其中鸡群以鸡白痢沙门菌感染为主,肠炎沙门菌次之;水禽以鼠伤寒沙门菌感染为主.生物被膜测定结果显示51.72％的沙门菌分离株可形成生物被膜,其中83.33％的鼠伤寒沙门菌可形成生物被膜.20种抗生素(氨基糖苷类、磺胺类、喹诺酮类、林可酰胺类、氯霉素类、青霉素类、四环素类和头孢菌素类)敏感性试验表明所有菌株对林可霉素耐药,51.72％对4种及其以上抗生素耐药,并出现了1株对所有受试抗生素均耐药的鼠伤寒沙门菌.结果表明鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌是为目前在家禽中分离的优势血清型;同时具有生物被膜形成能力和多重耐药性的沙门菌将对家禽疾病控制和公共卫生带来更大的威胁.     

某规模化牧场致犊牛腹泻的大肠杆菌分离鉴定及耐药性检测

[目的]为确定引起石河子某规模化牧场犊牛腹泻的主要病原菌及其耐药情况,并针对犊牛腹泻提出合理应对措施,为该牧场防治犊牛腹泻提供参考。[方法]本研究采取现场流行病学检查,无菌采集15份犊牛腹泻病料,对其进行病原菌分离纯化;通过生化试验以及分子生物学鉴定,确定致犊牛腹泻的病原菌;对病原菌进行药敏试验,确定耐药情况。[结果]经生化试验以及分子生物学鉴定发现,15份犊牛腹泻病料中,有12份分离到了大肠杆菌。药敏试验结果显示,13株大肠杆菌对链霉素耐药率最高为46.15%(6/13),对青霉素、氨苄西林耐药率为38.46%(5/13),且敏感菌株多为中低敏;对四环素敏感性为76.92%(10/13),13株菌株对头孢噻肟和万古霉素敏感性最高,为84.62%(11/13),多数菌株为多重耐药菌株。[结论]本研究针对腹泻犊牛进行病原菌分离鉴定、药敏试验,为该牧场犊牛腹泻诊治提供参考。     

牛源金黄色葡萄球菌的分离鉴定、耐药性分析及木糖醇对生物被膜形成的干预

在金黄色葡萄球菌临床分离株耐药表型分析基础上,探索不同质量浓度木糖醇对该菌生物被膜形成的干预,旨在为耐药性研究及奶牛乳房炎治疗提供新思路。通过金黄色葡萄球菌专用显色培养基、PCR等方法分离鉴定金黄色葡萄球菌;按照K-B法测定临床分离株对17种常用抗菌药物的敏感性;采用刚果红平板试验、96孔板和置片法分析分离菌生物被膜形成能力;应用置片法、超声波洗脱结合平板计数考察不同质量浓度木糖醇对生物被膜形成黏附阶段的影响。结果显示:金黄色葡萄球菌的检出率较高达60.7%(236/389);分离株对青霉素、阿莫西林以及氨苄西林耐药率高达98.31%～99.58%,且均为多重耐药;刚果红试验结果表明,74.6%(176/236)的分离株能形成生物被膜;96孔板法发现分离株形成生物被膜能力按强、中、弱依次占34.7%(82/236)、51.6%(122/236)和13.6%(32/236);置片法提示培养4 d可得到成熟的金黄色葡萄球菌生物被膜;随机选取标准菌株ATCC29213和9株分离株(生物被膜形成能力强、中、弱各3株)发现,与不用木糖醇(2.28×10~5)相比,经0.125,0.250,0.500 g/mL的木糖醇处理后黏附到盖玻片上的菌落数(分别为1.51×10~5,1.37×10~5,1.10×10~5)分别降低了33.8%(P0.01),39.9%(P0.01)和51.8%(P0.01)。由此推断:金黄色葡萄球菌临床分离菌株多重耐药严重,生物被膜形成普遍,0.125～0.500 g/mL的木糖醇能有效抵抗金黄色葡萄球菌黏附,从而干扰生物被膜的形成。     

广州、成都宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力及耐药性调查

为了解广州、成都两地宠物源性大肠杆菌生物被膜形成能力和耐药情况,为指导宠物临床用药和耐药性监测提供依据,研究采用改良结晶紫半定量方法对300株宠物源性大肠杆菌进行生物被膜形成能力测定,同时采用NCCLS微量肉汤稀释法对之进行头孢噻呋、庆大霉素等14种兽医临床常用抗菌药物MIC值测定.结果表明:广州、成都两地宠物源性大肠...     

203株牦牛源大肠杆菌agn43基因与生物被膜表型相关性研究

为了解牦牛源大肠杆菌agn43基因携带情况及其与生物被膜形成能力的相关性,分别采用PCR扩增和改良结晶紫半定量方法分别对分离鉴定的203株牦牛源大肠杆菌进行agn43基因检测和生物被膜形成能力分析.实验结果表明,分离的203株大肠杆菌中,147株agn43基因检测为阳性,检出率为72.4％;87.19％(177/203...     

内蒙古地区羊源大肠杆菌耐药性研究

为确定内蒙古地区羊源大肠杆菌的耐药表型及其耐药基因的流行情况,本研究采用微量稀释法测定了内蒙古地区108株羊源大肠杆菌对13种临床常用抗菌药物的最小抑菌浓度。结果显示,分离菌株对阿莫西林、头孢噻吩、磺胺甲唑、黏菌素的耐药率最高,均达100.0%,对阿莫西林/克拉维酸、四环素、环丙沙星的耐药率在50%~80%之间,对头孢噻肟、美洛培南、新霉素的耐药率均低于10%,较为敏感。108株羊源大肠杆菌中耐7种以上药物的菌株占94.4%,其中15.6%菌株对13种抗菌药物耐药,只有1株菌对所有抗菌药物敏感。采用PCR方法对羊源大肠杆菌分离株所携带的6种相关耐药基因进行检测,结果显示,6种耐药基因中的4种耐药基因bla_TEM、proP-2、sul-Ⅰ、ampG检出率超过50%,耐药基因aph（3'）-Ⅰ携带率达40%,只有耐药基因aac（3）-Ⅱ检出率仅为5.5%。由此可见,内蒙古地区羊源大肠杆菌对13种抗菌药物产生了不同程度的耐药性,且存在严重的多重耐药情况,羊源大肠杆菌分离株携带aph（3'）-Ⅰ、sul-Ⅰ、ampG、bla_TEM、proP-2、aac（3）-Ⅱ耐药基因。     

桂皮醛对禽致病性大肠杆菌生物被膜形成影响的研究

为探究桂皮醛对禽致病性大肠杆菌(APEC)生物被膜(BF)的形成及其相关基因转录水平的影响,本研究利用牛津杯法分别检测桂皮醛对3株BF强阳性(E-39、E-40、E-41)和3株中等阳性(E-27、E-30、E-42) APEC的抑菌圈,分析桂皮醛对APEC的抑菌活性;采用二倍稀释法测定桂皮醛对上述6株APEC的最小抑菌浓度(MIC);根据该结果,进一步采用96孔板结晶紫染色法测定MIC、1/2 MIC和1/4 MIC桂皮醛对6株APEC BF形成能力的抑制作用;采用q PCR法分别检测1/2 MIC和1/4 MIC桂皮醛对6株APEC BF形成相关基因转录水平的影响。结果显示：桂皮醛对6株APEC的抑菌圈直径为16.12±0.13 mm～23.80±0.23 mm;桂皮醛对BF强阳性和中等阳性APEC菌株的MIC均为256μg/m L;BF形成能力的检测结果显示,与未用桂皮醛处理的APEC相比,MIC、1/2 MIC和1/4 MIC的桂皮醛均极显著抑制上述6株APEC BF的形成(P<0.01),且该抑制作用与桂皮醛的浓度呈正相关;经1/2 MIC和1/4 MIC桂皮醛处理3 ...