羊源D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了确定石河子地区规模化羊场出现呼吸道症状死亡羊的细菌性病原,采用常规细菌分离鉴定方法、细菌16SrRNA序列分析以及多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt,从病变肺组织分离鉴定细菌,利用5个荚膜血清型特异性基因确定其血清型,扩增分离株的16个毒力相关基因,分析分离菌致病性和对常用抗菌药物的耐药性。结果表明,从病羊的病变肺组织中分离鉴定到一株血清D型多杀性巴氏杆菌,具有较强的致病性;携带8个毒力相关基因,其片段序列与NCBI上己公布的多杀性巴氏杆菌参考株同源性在99%以上;分离株对青霉素、林可霉素、庆大霉素、复方新诺明耐药,对其他23种药物敏感。     

1株羊源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

为了确定和分析新疆某羊场患呼吸道疾病病例的细菌性病原，采集病死羊的肺脏、胸腔积液等样品进行细菌分离，通过生化试验、16S rRNA基因测序、特异性引物PCR鉴定、药物敏感性试验、毒力基因测定、对小鼠半数致死量(LD₅₀)测定等方法对分离株进行生物学特性研究。结果显示，从病羊胸腔积液中分离鉴定出一株荚膜血清D型多杀性巴氏杆菌，将其命名为Pmh7。Pmh7对链霉素、头孢呋辛等10种抗菌药物敏感，对万古霉素、杆菌肽等5种抗菌药物耐药；携带6个毒力基因(fimA、nanB、ompH、sodC、Oma87、sodA),对小鼠的LD₅₀为2.3×10~6 CFU。结果表明，引发该羊场呼吸系统疾病的病原为荚膜D型多杀性巴氏杆菌，有较强的致病性。本研究结果可为防治羊巴氏杆菌病提供参考，为巴氏杆菌病的流行病学监测奠定基础。     

新疆石河子规模化牛场多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定石河子地区某规模化牛场出现呼吸困难、咳嗽、病牛消瘦甚至死亡的病因,本研究以病牛病变组织为研究对象,采用常规细菌分离鉴定和细菌16SrRNA序列分析来鉴定菌种,以及多杀性巴氏杆菌种特异性基因Kmt-1和各个荚膜血清型特异性基因(hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD)PCR扩增来确定细菌的血清型,同时应用纸片扩散法对分离细菌进行药物敏感性试验和小鼠感染试验。结果表明,从病变的肺组织中分离到1株菌落为灰白色、露珠状、不溶血,染色为革兰阴性球杆状细菌,生化鉴定结果符合巴氏杆菌特征,同时16SrRNA序列分析与NCBI上已公布的多杀性巴氏杆菌16SrRNA序列同源性在99%以上;对多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt-1以及各血清型特异性基因PCR扩增只扩增到Kmt-1和hyaD-hyaC特异性基因片段;分离菌株对链霉素、庆大霉素、卡那霉素耐药,对其他30种药物敏感,同时感染小鼠全部死亡。结果显示从病牛体内分离到1株毒力较强的血清A型多杀性巴氏杆菌。     

18株不同源多杀性巴氏杆菌耐药性分析

通过微量稀释法药敏试验及四环素类耐药基因的扩增对18株不同源多杀性巴氏杆菌进行耐药性分析。并采用PCR及其产物测序检测上述菌株中一类整合酶携带率。结果表明,18株不同源的多杀性巴氏杆菌对氯霉素的耐药率为83.33%,对四环素、强力霉素与庆大霉素的耐药率为50%~61.11%,对氧氟沙星、卡那霉素、恩诺沙星与氟苯尼考的耐药率为27.78%~38.89%。18株菌株均未检测到tet A耐药基因,22.22%的多杀性巴氏杆菌携带tet B耐药基因,5.56%的多杀性巴氏杆菌携带tet O耐药基因,tet K与tet Q两种耐药基因的携带率均为27.28%,而对于tet G的携带率为100%,Ⅰ型整合酶携带率为22.22%。本研究为进一步研究多杀性巴氏杆菌耐药机制及跨物种传播奠定了基础。     

鸭源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为鉴定临床疑似鸭多杀性巴氏杆菌感染肉鸭的病原菌，本试验通过细菌分离培养、菌体形态观察、细菌生化鉴定、16S rRNA基因测序分析、细菌种特异性鉴定、荚膜分型鉴定和动物回归试验进行鉴定，并通过药敏试验和耐药基因检测进行耐药性分析。结果显示，从患病鸭肝脏组织分离到的细菌在鲜血琼脂培养基中呈现表面光滑凸起、灰白色菌落，为革兰氏阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；生化鉴定结果显示，分离菌能发酵葡萄糖、蔗糖和甘露醇，硫化氢、氧化酶和吲哚等试验阳性；16S rRNA基因序列系统进化树分析显示，该分离菌与多杀性巴氏杆菌聚为一支，同源性 > 99%；细菌种特异性鉴定结果与多杀性巴氏杆菌相符；荚膜分型鉴定结果仅扩增到约为1 050 bp的目的基因片段，与荚膜血清A型相符；动物回归试验显示，该分离菌有较强的致病性；药敏试验结果显示，该分离菌对羧苄西林、氨苄西林、复方新诺明和四环素等12种药物耐药；经耐药基因PCR检测显示，该分离菌携带Sul1、Sul3、tet（X）和Intl1 4种耐药基因，与药敏表型相符。本试验成功分离到1株鸭源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌，为鸭多杀性巴氏杆菌病的防治提供参考依据。     

D型多杀性巴氏杆菌和绵羊肺炎支原体引起山羊的混合感染

2018年9月广西某羊场部分山羊发生流涕、咳嗽、呼吸困难和体温升高等临床症状的疾病,为确诊发病原因并提供治疗方案,采用病原分离培养、PCR扩增鉴定的方法进行诊断,并对分离菌进行生化鉴定、致病性试验和药敏试验。结果显示,病料在血平板有圆形的小菌落生长,革兰阴性小球短杆菌,而在PPLO培养基上不生长;病料的PCR扩增结果显示绵羊肺炎支原体和多杀性巴氏杆菌均为阳性;所分离到的病原菌经生化鉴定,该菌符合多杀性巴氏杆菌的特性;用多杀性巴氏杆菌种属和D型多杀性巴氏杆菌特异性引物扩增为阳性;致病性试验显示该菌对小鼠有很强的致病性;药敏试验显示该菌对头孢他啶、头孢噻肟、氧氟沙星高度敏感,对复方新诺明、强力霉素、红霉素、青霉素为耐药。结果表明该病是由绵羊肺炎支原体和D型多杀性巴氏杆菌混合感染引起。     

羊急性巴氏杆菌病的病理学观察

为深入研究甘肃省永登县某羊场绵羊发生的疑似羊巴氏杆菌病的病例,本试验采用染色镜检、分离培养、生化鉴定、动物实验、病理观察等方法对采集病料进行了研究。结果表明,瑞氏染色有两端着色椭圆形短杆菌,分离培养、生化试验鉴定、动物实验均表明其特性为多杀性巴氏杆菌。病理观察,肺脏呈纤维素性-化脓性肺炎,心脏呈变质性心肌炎,肝脏呈变质性肝炎,脾脏呈急性脾炎,肾脏呈急性肾小球肾炎,全身淋巴结呈浆液-出血性淋巴结炎。结果证明,本次永登县某羊场绵羊发生的急性疾病为羊巴氏杆菌病,肺脏呈纤维素性-化脓性肺炎为特征性病变。     

禽霍乱病原菌的分离鉴定及药敏试验

从晋中种鸡场的发病鸡采集病料,经过涂片镜检、细菌分离培养、生化试验、动物接种,确诊该批鸡患有鸡霍乱并从病鸡上分离到1株禽多杀性巴氏杆菌,采用纸片扩散法和试管稀释法分别测定了青霉素钾、土霉素、硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、甲砜霉素、氟哌酸、环丙沙星和恩诺沙星等9种药物对分离菌的体外抗菌活性。结果表明分离到的禽多杀性巴氏杆菌对青霉素钾和土霉素耐药;对硫酸卡那霉素、硫酸庆大霉素、硫酸链霉素、甲砜霉素、氟哌酸敏感;对环丙沙星和恩诺沙星极敏感。结合临床症状及实验室诊断,确诊此次疾病为多杀性巴氏杆菌引起的禽霍乱。     

猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定与药敏试验

2013年3月,迁安市某猪场2月龄仔猪发生一起以呼吸困难为主要临床表现的疾病,无菌采集病猪肺脏、心血等组织进行病原分离培养,经形态特征、培养特性、生化特性鉴定初步确定为多杀性巴氏杆菌,经对多杀性巴氏杆菌种特异性KMT基因的PCR检测,测序结果运用BLAST软件比对,与多杀性巴氏杆菌同源性为100%。动物致病性试验表明分离菌株有致病性。药敏试验显示分离菌株对复方新诺明、庆大霉素、卡那霉素耐药,对氟哌酸、土霉素中度敏感,对头孢噻呋、氟苯尼考、环丙沙星、恩诺沙星、阿莫西林抗菌药物敏感。     

呼伦贝尔市首例羊源荚膜D群多杀性巴氏杆菌的分离与鉴定

为了确定呼伦贝尔市两个羊场的羊只出现体温升高、精神沉郁、食欲废绝、咳嗽、腹泻甚至死亡病因,本研究以病羊病变组织为研究对象,采用常规细菌培养法和多杀性巴氏杆菌种特异性基因KMT1引物以及cap A、cap B、cap D、cap E、cap F荚膜血清型特异性基因引物进行双重PCR扩增,确定分离菌的荚膜血清型,同时应用纸片扩散法对分离菌进行药物敏感性试验。结果显示:从病变的肺组织中分离到1株菌落为灰白色、露珠状、不溶血,革兰氏染色阴性球状短杆菌;通过序列比对及遗传进化树分析,该分离株与印度分离株巴氏杆菌同源性高达100%;本研究只扩增出多杀性巴氏杆菌荚膜血清D群;分离菌株对青霉素、复方新诺明、克林霉素等耐药,对诺氟沙星、卡那霉素、环丙沙星等药物已不敏感。本研究结果表明,我们首次从呼伦贝尔市病羊体内分离到荚膜血清D群多杀性巴氏杆菌。     

腹泻肉仔鸡肠道中致病菌的分离鉴定及药敏试验

从开发区周边一些肉仔鸡养殖场采集腹泻病死鸡的病料,经培养特性和细菌形态观察,生化鉴定,结合临床症状及流行病学特点,最终确定主要病原菌有沙门氏杆菌和多杀性巴氏杆菌。并用12种药物做了药敏试验,结果多杀性巴氏杆菌对恩诺沙星、阿米卡星、左氧氟沙星、庆大霉素高度敏感;对青霉素、链霉素、四环素、土霉素、磺胺六甲氧嘧啶中度敏感;对氟哌酸、卡那霉素、红霉素耐药。而沙门氏杆菌对阿米卡星、卡那霉素高度敏感;对四环素、磺胺六甲氧嘧啶、左氧氟沙星中度敏感;对青霉素、链霉素、四环素、土霉素、红霉素、恩诺沙星、氟哌酸耐药。     

兔源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析

为了对疑似感染巴氏杆菌的病死兔进行病原的分离、鉴定并分析其耐药情况，本试验对送检的病死兔进行剖检，结合传统分离培养及16S rRNA和荚膜抗原A(capA)基因的PCR扩增等鉴定病原菌，PCR方法扩增其23个毒力基因，最后进行药敏试验。结果显示，分离菌在血琼脂培养基的菌落特征为光滑、湿润、半透明、灰白色、圆形、露珠状，染色镜检可观察到革兰阴性、两端染色较深的红色短杆菌。PCR扩增及测序结果显示，该分离菌株的16S rRNA和capA基因与多杀性巴氏杆菌Q菌株(GenBank登录号：CP033597)同源性分别为99.86%和100%。23个毒力基因中仅pfhA、oma87、fur、pmHAS基因检测出目的条带，其余19个毒力基因均未检出。该分离菌株对环丙沙星、氧氟沙星、头孢拉定、氨苄西林、卡那霉素、阿米卡星、庆大霉素、红霉素和多黏菌素B共9种药物敏感，对四环素、复方新诺明和克林霉素等耐药。结果表明本试验从病死兔中分离鉴定出1株荚膜血清A型的多杀性巴氏杆菌，可选用环丙沙星和红霉素等进行治疗。该结果可为临床巴氏杆菌病的治疗提供一定的理论依据。     

猪源多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其荚膜血清型鉴定

从病死母猪肺脏中分离到一株革兰氏阴性小杆菌,用生理生化鉴定、药敏试验、致病性试验和PCR鉴定方法对分离菌株进行鉴定,并用多杀性巴氏杆菌荚膜分型引物对分离株的荚膜血清型进行鉴定。结果表明:本菌为猪多杀性巴氏杆菌,对多种抗生素高度敏感,对小白鼠有强致病性;PCR扩增16SrDNA基因获得1415bp片段,分离株的16SrDNA核苷酸序列与多杀性巴氏杆菌(AY078999)的同源性为99%,因此该分离菌株被鉴定为致病性巴氏杆菌,命名为YN20110122株;本菌分离株为荚膜A型血清型多杀性巴氏杆菌。     

多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及其系统进化分析

海南某养殖场的黑山羊出现体温升高、咳嗽、呼吸困难、偶尔伴有腹泻症状。为了诊断,采集病死羊肺脏组织,进行细菌的分离培养。对分离得到的细菌进行形态学观察、生化反应鉴定、细菌16S rRNA测序、特异性引物PCR鉴定、小鼠攻毒试验以及系统进化分析。结果确定该患病黑山羊感染了D型多杀性巴氏杆菌,并确定该菌对甲氧苄啶-磺胺甲噁唑、左氧氟沙星、四环素、庆大霉素、阿莫西林敏感。系统进化分析发现,该株多杀性巴氏杆菌与河北、湖北、重庆等地分离菌株的亲缘关系较近。本试验为海南黑山羊流行性疾病诊断提供了重要的资料。     

西藏牦牛多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏分析

为了对西藏牦牛多杀性巴氏杆菌进行分离鉴定和药敏分析,为多杀性巴氏杆菌病的诊断、治疗以及防控提供一定理论依据,本试验对病死牦牛的内脏组织进行了细菌分离,再通过涂片镜检、生化鉴定、荧光定量PCR法对分离细菌株进行了鉴定,并利用17种抗菌药物对该细菌株进行了药敏分析.结果 显示:该细菌株镜检为革兰氏阴性短杆菌,在血清琼脂平皿上形成了表面光滑、湿润、边缘较整齐的半透明灰白色菌落,在麦康凯琼脂平皿上未见生长;符合多杀性巴氏杆菌生化鉴定标准,且在细菌株DNA基因组中能扩增出多杀性巴氏杆菌鉴定基因,表明该致病菌为多杀性巴氏杆菌.13种抗菌药物对该细菌株有显著抑制作用,但其抑菌机理还需进一步研究.     

禽源多杀性巴氏杆菌耐药性分析及氟苯尼考耐药基因floR分布

为了解禽源多杀性巴氏杆菌的药物敏感性及氟苯尼考的耐药基因的分布特征,采用琼脂二倍稀释法,对分离自福建、广东和江西等南方数省部分地区113株禽源多杀性巴氏杆菌进行9种抗生素的耐药性分析,并应用PCR方法检测氟苯尼考耐药基因floR的分布情况。结果显示:上述菌株对四环素表现高水平耐药,耐药率为65.49%(74/113);对链霉素、甲氧苄啶/磺胺甲噁唑、氟苯尼考、卡那霉素与恩诺沙星表现中等水平耐药,耐药率分别是43.36%(49/113)、39.82%(45/113)、27.43%(31/113)、25.66%(29/113)与24.78%(28/113);对氨苄西林、头孢噻呋与头孢克洛较为敏感,耐药率分别为4.42%(5/113),2.65%(3/113)与1.77%(2/113);其中52.21%(59/113)菌株能耐受3类及3类以上的抗菌药物;氟苯尼考耐药基因floR的检出率为64.04%(72/113),且所有氟苯尼考耐药菌株均含有floR基因。结论:113株禽源多杀性巴氏杆菌存在多重耐药现象,且floR耐药基因较为流行。本研究结果为上述地区针对禽源多杀性巴氏杆菌临床用药提供科学依据。     

鸡巴氏杆菌的分离鉴定及体外抑制实验

为了诊断一起鸡暴发性死亡病例,对死亡鸡肝脏进行细菌分离、生理生化实验、药敏实验、动物致病性实验。结果:分离菌生理生化特性与巴氏杆菌标准株基本一致;分离菌对青霉素类抗生素完全耐药,对卡那霉素、红霉素、氧氟沙星等中度敏感;分离菌肌注健康试验鸡0.5m L,鸡12h内死亡,口服0.5m L,鸡24h内死亡;鸡唾液乳酸杆菌对分离菌有较强的抑制作用。结论:分离菌为多杀性巴氏杆菌强毒株,该病例是由多杀性巴氏杆菌引起的鸡巴氏杆菌病,有效药物为:卡那霉素、红霉素、氧氟沙星等,鸡唾液乳酸杆菌可减少或部分取代抗生素对该病的使用。     

多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

从病猪的脾、肺、淋巴结等脏器中分离培养的细菌,经ATB鉴定为多杀性巴氏杆菌(pas-teurella multocida).药敏试验表明,分离株对先锋V号、恩诺沙星、环丙沙星等抗菌药物敏感,对复方新诺明、阿莫西林、链霉素、卡那霉素等耐药.     

禽霍乱多杀性巴氏杆菌的分离鉴定

确定某鸭场疑似禽霍乱病的病原种类,为其临床用药提供参考。采用细菌分离技术对病原菌进行实验室分离培养,对分离到的病原菌进行了鉴定、动物攻毒试验、药敏试验和基因分型。结果显示,分离菌20170549具有多杀性巴氏杆菌典型培养特征,菌落形态和菌体染色特征、生理生化特性,基因测序结果均与多杀性巴氏杆菌相符;该菌株对小鼠有强致病性;分离株对头孢噻呋、甲砜霉素、硫酸黏菌素、阿米卡星、恩诺沙星、卡那霉素、庆大霉素、多西环素、氟苯尼考高敏;采用5对分型引物对分离菌进行基因分型,结果仅扩增到大小为1 050bp的目的基因片段,与A型结果相符。研究结果可为禽霍乱的防控提供参考。     

竹鼠多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

从红河州某竹鼠养殖场采集患病竹鼠病灶进行细菌分离培养,并对分离的菌株进行生化鉴定、动物回归试验及药敏试验。结果显示,分离的病原体为多杀性巴氏杆菌,该菌株对青霉素、诺氟沙星、阿米卡星等敏感,对链霉素、红霉素、庆大霉素、氯霉素等耐药。