广东地区猪A型塞内卡病毒USA/GBI29/2015-like株的分离鉴定与进化分析

为了了解广东地区猪A型塞内卡病毒(SVA)的遗传变异情况,试验采用病毒分离纯化、间接免疫荧光、增殖动态、电子显微镜观察等方法确定疑似病料感染情况,同时采用序列比对分析方法与GenBank中具有代表性的(SVA)全基因组序列进行同源性分析,利用MEGA6.0软件构建全基因组系统发育进化树。结果表明：分离的病毒能够和SVA多克隆抗体发生特异性反应,病毒粒子呈球形,直径25～30 nm,成功分离得到一株SVA毒株,命名为CH-GDZQ-1;CH-GDZQ-1毒株在感染PK15细胞第15小时时病毒效价达到峰值,为1×10^8.78 TCID₅₀/mL;CH-GDZQ-1全基因组序列与USA/GBI29/2015株核苷酸相似性为98.1%,高度同源,该毒株与中国毒株CH-GDLZ01-2017(MG428680)、CH-GDLZ02-2017(MG428681)、CH-GDQC-2017(MG428682)、CH-GDYD-2017(MG428683)、CH-GDYS01-2017(MG428684)和CH-GDYS02-2017(MG428685)在同...     

掌握塞内卡病毒A的流行病学

进一步了解塞内卡病毒A的传播和发病规律能够揭示它的流行病学特征,这有助于猪场制定预防和控制猪感染塞内卡病毒A的措施。     

猪塞内卡病毒研究进展

塞内卡病毒属小RNA病毒科塞内卡病毒属,可感染各个年龄段的猪群引发猪自发性水疱病,临床表现与口蹄疫、猪水疱病、水疱性口炎、猪传染性水疱病相似,但感染发病率较低,临床症状较轻。2015年以来,塞内卡病毒相关猪自发性水疱病的流行区域迅速扩大,包括巴西、美国、加拿大、中国、泰国和哥伦比亚都相继暴发疫情。另外还出现临床症状加重、新生猪病死率升高等新变化,这些变化给生猪养殖业带来了不小的恐慌,也引起了研究人员的高度重视。为充分了解和掌握塞内卡病毒的最新信息,认清研究的重点和方向,论文对病毒生物学与流行病学特征、临床特性、实验室诊断技术等方面进行了综述。     

A型塞内卡病毒HBWH/1/2018株的分离鉴定及全基因组序列测定

为了鉴定湖北省某猪场水疱性疾病的病原,本研究采用RT-PCR、细胞分离培养、间接免疫荧光检测、电镜观察、病毒基因序列测定及分子进化分析的方法对湖北省某猪场采集的具有水疱样病变的猪水疱皮样品进行了病毒的分离和鉴定及全基因组序列的测定。结果表明：成功分离到1株A型塞内卡病毒（SVA）,命名为HBWH/1/2018株。该毒株接种BHK-21细胞培养能够引起明显的致细胞病变效应;免疫荧光试验结果为阳性;病毒滴度为109.35 TCID50/0.1mL;该毒株基因组全长7281 bp（不包括Poly A）,开放阅读框为6546 bp,编码2181个氨基酸;VP1核苷酸序列的遗传进化分析表明HBWH/1/2018株与HN01/2017株亲缘关系最近（相似性高达99.4%）,而与SVA原型毒株SVV-001株的亲缘关系最远（相似性为91.3%）。本研究不仅丰富了SVA的分子流行病学数据,也为进一步研究SVA的致病机理及相关疫苗的研发奠定了基础。     

提高猪的免疫力有助于净化塞内卡病毒A

一旦塞内卡病毒A在不同猪场之间的传播被阻断,就可以对环境中的塞内卡病毒A进行灭活。     

实时荧光RT-PCR检测塞内卡病毒

塞内卡病毒(SVA)能感染各个年龄段的猪引发水疱病并导致新生仔猪死亡,对生猪养殖业造成巨大威胁。本实验采用北京世纪元亨塞内卡病毒实时荧光RT-PCR检测试剂盒,对攀枝花市各县(区)送检的100份猪血清样品进行检测,结果所有样品均为SVA抗原阴性,表明攀枝花境内尚未发现SVA感染。     

猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续3)

目前养猪界尚无可用的疫苗或治疗方法用于塞内卡病毒感染,文章主要介绍塞内卡病毒的预防控制管理和未来愿景。     

一株塞内卡病毒A全基因组序列测定与致病性分析

本研究旨在明确塞内卡病毒A（Senecavirus A,SVA）FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的同源性关系,并了解SVA-FJLY株的致病性。以分离自福建省某养殖场中的一株SVA-FJLY株为研究对象,参照其原型毒株SVV-001（GenBank No.DQ641257.1）全基因组序列设计5对引物,通过RT-PCR扩增、测序、拼接,获得SVA-FJLY株全基因组序列并进行序列分析;并通过滴鼻攻毒3~4周龄仔猪。结果表明,SVA-FJLY株基因组全长7 275 bp（不包括PolyA）,SVA-FJLY株基因组存在一个多聚蛋白、VP1蛋白和VP2蛋白。SVA-FJLY株与参考毒株之间的基因组一级结构有较高的相似性,与HeB01-2017株（MF967574.1）相似性最高,达98.5%;而与SVA原型毒株SVV-001株（DQ641257.1）的相似性较低,为93.9%。SVA-FJLY株与国内几个毒株属于同一个分支,与国内的HeB01-2017株亲缘关系最近,同时与国外Colombia-2016株（KX857728.1）的亲缘关系最近。通过动物试验发现试验组猪攻毒10 d后,试验组2/3发病,对照组3/3正常,未出现仔猪死亡。通过全基因组序列测定获得了SVA-FJLY株全基因组序列并进行序列分析,明确SVA-FJLY株的基因组特性及其与其他毒株的相似性关系,了解了SVA-FJLY株的致病性,为SVA的反向遗传学和疫苗的研制提供参考依据,同时也丰富了SVA的基因组信息数据库。     

猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续2)

主要介绍塞内卡病毒的致病性证据、免疫应答和诊断等。     

A型塞内卡病毒CH-HNXC株的分离鉴定及其致病性研究

自2007年A型塞内卡病毒(SVA)在猪体内被发现以来,给全球养猪业造成了严重的经济损失,SVA感染的典型症状包括猪口鼻部囊泡的形成及破裂,以及蹄部冠状带水疱引起的跛行。用RT-PCR从河南某猪场具有水疱样病变的猪水疱皮或水疱液中检测到了SVA的特异性核酸片段,并通过IBRS-2细胞进行SVA的分离和传代,将分离得到的SVA命名为CH-HNXC,扩增和测定了VP1基因序列后分析发现,分离株CH-HNXC与之前报道的2017年河南和福建分离株位于较近的进化分支中,与加拿大和泰国分离株亲缘关系较远,表明SVA流行和进化中由相近时间点和较近地理位置带来高的同源性;分离株攻毒猪鼻吻部和蹄部可见水疱和溃烂、跛行等,表明本分离株能引起SVA所致的典型临床症状,为SVA在国内的流行提供了新的证据,为进一步研究SVA的致病机制、开发诊断试剂和疫苗奠定了基础。     

稳定表达GM-CSF的重组塞内卡病毒A的构建与鉴定

塞内卡病毒A(Senecavirus A,SVA)是近年来新发现的一种能够引起猪水疱性相关疾病的病毒,该病毒在我国流行范围越来越广,对养猪业造成了巨大经济损失。为提高灭活疫苗的免疫效果,本研究以SVA感染性克隆为基础,将猪源GM-CSF-T2A基因通过融合PCR方法插入到SVA的2A和2B之间,成功构建了重组质粒SVA-GM-CSF,将其转染BHK-21细胞进行病毒拯救及传代。结果显示,重组病毒感染BHK-21细胞可以引起明显的细胞病变;经RT-PCR扩增与基因测序结果表明目的基因正确插入;间接免疫荧光鉴定表明外源基因GM-CSF在该病毒中成功获得了表达。生物学特性分析表明,重组病毒与亲本病毒在BHK-21细胞中具有相似的生长特性,并且该重组病毒在传代过程中具有良好的遗传稳定性。本研究已成功构建了稳定表达GM-CSF的重组SVA,该重组病毒的构建为进一步明确SVA致病机制和研制新型疫苗提供了理论支持与技术指导。     

猪塞内卡病毒感染的最新研究进展(续1)

主要介绍2015年及以后猪群塞内卡病毒感染情况以及塞内卡病毒感染的流行病学特征。     

猪塞内卡病毒A、猪水疱病毒和口蹄疫病毒三重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

为建立一种鉴别猪塞内卡病毒A(SVA)、猪水疱病毒(SVDV)、口蹄疫病毒(FMDV)的方法,针对3种病毒的基因保守区域设计引物和探针,建立了可同时检测上述3种病毒的TaqMan三重荧光定量PCR方法。该方法仅能特异性扩增SVA和FMDV病毒基因以及SVDV阳性质粒,与猪繁殖与呼吸综合征病毒、经典猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪圆环病毒2型、伪狂犬病病毒的阳性样品cDNA或DNA无交叉反应,对3种病毒核酸的最低检出限均为10 copies/μL,组内和组间变异系数均小于4%。应用该方法对2019-2022年采集的吉林省部分地区267份病料和本实验室留存的30份猪血清样品进行检测,未检出SVA、FMDV以及SVDV。建立的三重荧光PCR方法有利于对3种病毒进行有效的流行病学调查,可给快速准确鉴别致猪水疱症状病毒性疾病提供诊断方法。     

不可小觑的猪塞内卡病毒病

猪塞内卡病毒病是塞内卡病毒A引起的一种以吻突、口鼻、蹄部等部位的皮肤或黏膜水疱和糜烂为特征的猪病毒性传染性疾病。可以危害任何品种和性别以及所有年龄阶段的生猪,且可致新生仔猪成批急性死亡,在临床上很难通过肉眼观察而把本病与水疱性跨境动物疾病相区别,严重困扰养猪业,因此不可小觑。文章从病原特性、流行病学、临床症状、病理变化、诊断技术、防制措施等6个方面对该病进行了描述,说明了为什么猪塞内卡病毒病不可小觑,供参考。     

嵌合口蹄疫病毒抗原表位的重组塞内卡病毒A的构建及其鉴定

塞内卡病毒A（SVA）与口蹄疫病毒（FMDV）引起猪的临床症状难以区分,并且以SVA作为载体插入FMDV抗原表位外源基因的研究,目前还没有报道。为了构建一种嵌合FMDV抗原表位的重组SVA毒株并进行鉴定,本研究利用基因克隆技术将O型FMDV的B细胞表位与白蛋白信号肽（human albumin signal peptide,HAS）基因串联插入到SVA基因组中,成功构建了重组质粒,转染细胞后拯救出重组病毒rSVA-HAS-OB。结果显示：RT-PCR扩增与基因测序结果表明目的基因正确插入;细胞间接免疫荧光和Western blot鉴定了嵌合抗原蛋白的有效表达;遗传稳定性分析表明重组病毒在25代次的传代过程中仍稳定存在B细胞表位;病毒蚀斑表型和一步生长曲线结果表明,重组病毒与亲本毒株具有相似的增殖特性。本研究成功构建并拯救出能够表达FMDV抗原表位的重组SVA毒株,为以SVA为基础的嵌合病毒及疫苗的研究提供了理论和实验基础。     

A型塞内卡病毒研究进展

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是近年来新发的一种能够引起猪水疱性相关疾病的病毒,为小RNA病毒科塞内卡病毒属唯一成员.据报道,该病先后在加拿大、美国、巴西、泰国等国家流行,2015年SVA首次在我国广东省检出,随后多个省、自治区和直辖市均检测到SVA阳性病例,可见SVA已经在我国流行.猪感染SVA...     

A型塞内卡病毒研究进展

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA),也称为塞内加谷病毒(Seneca Valley virus,SVV),是单股正链RNA病毒,属于小RNA病毒科塞内卡病毒属成员.SVA感染可引发母猪水泡性相关疾病,并可导致新生仔猪急性死亡,严重影响养猪生产.自2015年广东省发生SVA感染以来,我国多省份陆续有感染...     

1株塞内卡病毒A型的基因组序列与演化分析

旨在分析塞内卡病毒A型(Senecavirus A,SVA)CH-HNCY-2019株的基因组特性和演化,参考SVA毒株SVV-001(GenBank No.NC011349)全基因组序列设计8对引物,通过RT-PCR扩增和测序获得SVA CH-HNCY-2019株全基因序列并进行序列分析.结果显示,SVA分离株CH-...     

猪IL-2与IL-6的融合表达及活性研究

为获得具有猪白细胞介素-2(pIL-2)和猪白细胞介素-6(pIL-6)双重活性的融合蛋白,研究其作为高效免疫佐剂的可行性,本研究利用基因重组技术将克隆到的pIL-2和pIL-6的成熟肽基因利用一段柔性Linker序列串联后插入到原核表达载体pBV220中,转化大肠杆菌,42℃诱导表达得到融合蛋白pIL-6-2,对蛋白进行纯化复性后用MTT法检测其生物学活性。结果显示不同浓度pIL-6-2蛋白对小鼠脾淋巴细胞的增殖活性差异很大,0.1μg/mL浓度的pIL-6-2活性最好。本研究为利用该蛋白作为高效免疫制剂的应用奠定了良好基础。     

A型塞内卡病毒研究进展

A型塞内卡病毒(Senecavirus A,SVA)是新发现的一种影响养猪业的RNA病毒,现已在美洲的美国、加拿大、巴西、哥伦比亚以及亚洲的中国、泰国、越南等多个国家被发现。2015年SVA首次在我国广东省发现后,已有15个省、自治区和直辖市报道检测到该病毒,表明SVA已在我国不同地域广泛分布。猪感染SVA后的临床症状与口蹄疫、猪水泡病及水泡性口炎等类似,难以鉴别。SVA的实验室诊断多采用病原学和血清学方法。对于该病目前仍无商品化疫苗可用,但已有研究出重组活疫苗候选株和油佐剂灭活候选疫苗的报道。SVA未来的流行态势目前难以预测,因此需密切关注SVA在全球的流行现状,并深入研究SVA的致病及免疫机理,同时尽快研发有效的疫苗和诊断试剂。通过病原学、临床症状、流行状况、诊断方法、疫苗研发等方面的综述,本文为我国SVA防控提供了参考。