河南省2021-2022年犊牛腹泻主要病原流行情况调查

为了解河南省2021-2022年犊牛腹泻病原流行情况,利用犊牛腹泻病原微生物核酸检测试剂盒（荧光PCR法）分别对2021年河南省20余家牧场送检的170份犊牛腹泻样品,2022年送检的112份犊牛腹泻样品进行牛轮状病毒（BRV）、牛冠状病毒（BCoV）及大肠杆菌K99+(E.coli K99+)荧光PCR检测,并对检测结果采用SPSS 27.0软件进行数据统计以及显著性差异分析（Pearson卡方检验）。结果显示：2022年BRV检出率为50.00%、BCoV检出率为41.00%,相比2021年均显著增高(P<0.01),E.coli K99+检出率与上一年相比基本持平,无明显差异（P>0.05）,说明2022年BRV、BCoV流行情况愈加严重。进一步分析发现,2022年腹泻病原单一感染检出率为26.79%,其中主要是BRV感染,与2021年单一感染检出率25.29%基本持平,差异不显著（P>0.05）。2022年腹泻病原混合感染检出率为35.71%,且主要以BRV、BCoV混合感染为主。相比2021年的12.94%明显上升,差异显著（P<0.01）,说明202...     

新疆喀什地区安格斯犊牛腹泻主要病毒性病原调查及牛诺如病毒全基因序列分析

【目的】调查新疆喀什地区安格斯犊牛腹泻主要病毒性病原流行情况及牛诺如病毒(Bovine norovirus, BNoV)全基因组遗传关系。【方法】采用RT-PCR技术分别对2021年不同季节在喀什4个牛场采集的363份犊牛腹泻粪便样品进行牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus, BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)和BNoV 4种病毒性病原检测,并对扩增获得的BNoV全基因序列进行分析。【结果】BCoV和BNoV检出率较高,分别为36.09%(131/363)和25.07%(91/363),混合感染中BCoV+BNoV检出数量最多,阳性率为44.00%(22/50)。对喀什地区4个场区进行检测,其中A场主要检测出BCoV和BNoV,检出率分别为43.52%(47/108)和32.41%(35/108);B场主要检测到BCoV,检出率为52.21%(71/136);C、D场病原检出率普遍较低。秋、冬季检出量最多的病毒分别为BNoV和BCoV,检出率分别为66....     

一起奶牛腹泻病的病原学诊断

辽宁省某奶牛养殖场10～30日龄犊牛发生腹泻,为查明病因,我们对送检的18份犊牛腹泻样本分别进行牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、产肠毒素大肠杆菌(ETEC)、沙门氏菌(Salmonella)和安氏隐孢子虫(C. andersoni)的PCR检测。结果显示:18份犊牛腹泻样本中,BRV、BCoV、BVDV的检出率分别为83.3%(15/18)、88.9%(16/18)、61.1%(11/18),这3种病原的混合感染率较高,其他病原均未检出,说明该奶牛场的犊牛腹泻主要由BRV、BCoV、BVDV混合感染引起。     

新疆部分地区犊牛腹泻主要病原调查及分离菌耐药性分析

为了调查新疆不同地区犊牛腹泻主要病原的流行情况,试验采用PCR/RT-PCR、细菌分离鉴定对乌鲁木齐市、塔城地区、伊犁州、喀什地区的7个规模化牛场443份腹泻样本进行了腹泻主要病原[牛冠状病毒(Bovine coronavirus, BCV)、牛诺如病毒(Bovine norovirus, BNoV)、牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)、大肠杆菌O157:H7(E.coli O157:H7)、产志贺毒素大肠杆菌(STEC)]的检测及常见致病菌的药敏试验。结果表明：四个地区BCV、BNoV、BVDV、BRV、STEC、E.coli O157:H7的阳性率分别为28.89%、11.74%、3.39%、0.90%、17.83%、0.23%。乌鲁木齐市检出BCV、BNoV和STEC三种病原,其中BCV的检出率显著高于BNoV和STEC(P<0.05);塔城地区检出BCV、BNoV和BRV三种病毒性病原,BNoV检出率显著高于BRV(P<0.05);伊犁州仅检出少量BNoV和...     

河北省唐山市奶犊牛病毒性腹泻流行病学调查

试验旨在掌握河北省唐山市13个县（市、区）奶牛场奶犊牛病毒性腹泻病原的流行状况,有效防控奶犊牛腹泻。采集唐山市不同地区38个奶牛场腹泻犊牛粪便样品788份,提取腹泻粪便样品中的基因组RNA。根据GenBank公布的牛病毒性腹泻病毒（Bovine viral diarrhea virus,BVDV）E2基因、牛轮状病毒（Bovine rotavirus,BRV）VP6基因、牛冠状病毒（Bovine coronavirus,BCV）N基因序列,利用Primer Premier 5.0软件分别设计特异性引物,采用PCR方法检测粪便样品中这3种基因,利用Excel 2007对不同地区、不同季节和混合感染病原检测结果进行汇总分析。在采样范围内的788份犊牛腹泻粪便样品中,BVDV、BRV和BCV阳性检出率分别为29.82%（235/788）、29.44%（232/788）和18.02%（142/788）;在所有被检地区,滦南县BVDV感染率最高,阳性检出率为45.38%（59/130）,汉沽区BRV和BCV感染率最高,阳性检出率分别为55.00%（22/40）和37.50%（15/40）;从采样季节来看,春季、夏季和秋季BRV感染率最高,阳性检出率分别为27.71%（46/166）、39.58%（114/288）和19.89%（39/196）,冬季则以BVDV感染为主,阳性检出率为52.17%（72/138）;从混合感染情况来看,以BRV＋BCV二重混合感染为主,感染率为8.37%（66/788）。河北省唐山市各地区腹泻犊牛群中均存在BVDV、BRV和BCV感染,以BVDV、BRV单一感染为主。     

新疆地区奶牛6种腹泻相关病毒的检测

为了解新疆地区奶牛轮状病毒(BRV)、牛冠状病毒(BCoV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、纽布病毒(NeV)、牛诺如病毒(BNoV)、牛库布病毒(BKV)的感染情况,用RT-PCR方法对采集自新疆昌吉和石河子等地区的10个奶牛场共计86份腹泻犊奶牛粪便样本进行分子流行病学调查。86份样品中,BRV检出率为60.5%(52/86),NeV检出率为51.2%(44/86),BKV检出率为39.5%(34/86),BCoV检出率为26.7%(23/86),BNoV检出率为12.8%(11/86),BVDV检出率为9.3%(8/86)。另外,腹泻粪便样本中BRV、BCoV、NeV、BNoV、BKV和BVDV混合感染严重。研究结果为新疆地区奶牛腹泻的综合防治提供了依据。     

牛轮状病毒研究进展

牛轮状病毒(Bovine rotavirus,BRV)是导致新生犊牛腹泻的主要病原之一,给养牛业造成一定的损失。本文从BRV感染机制、流行情况、预防措施、种间传播及人畜共患病的影响几方面加以综述,为BRV感染犊牛的研究提供有效的依据。     

河北省部分地区致犊牛腹泻主要病原分布特征

为了明确河北省内致犊牛感染性腹泻主要病原,本研究自河北省8个地区采集775份犊牛腹泻粪便样品,根据GenBank中登录的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)5′UTR基因、牛冠状病毒(BCoV)N基因、牛轮状病毒(BRV)VP6基因和牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)gB基因序列设计特异性引物,参照文献合成隐孢子虫18S rRNA和大肠杆菌16S rRNA引物,利用PCR方法对BVDV、BCoV、BRV、IBRV、隐孢子虫和大肠杆菌进行检测。结果显示,775份犊牛腹泻临床样品中,BVDV的阳性率为27.11%(205/775);BCoV的阳性率为17.52%(137/775);BRV的阳性率为9.85%(77/775);IBRV的阳性率为3.71%(29/775);隐孢子虫的阳性率为12.28%(96/775);大肠杆菌的阳性率为20.46%(160/775);还有9.10%的样品未检测出病原。在河北省部分地区采集的犊牛腹泻粪便样品中,BVDV检测阳性率最高为27.11%,在冬季犊牛BVDV的感染率最高为40.21%,且唐山和张家口地区奶牛场BVDV的感染率高于其他6个地区。本研究明确了河北省内...     

唐山地区奶犊牛主要腹泻相关病原的流行病学调查

【目的】掌握唐山市13个县(市、区)规模化牛场奶犊牛感染性腹泻病原的流行状况,为该地区有效开展奶犊牛腹泻防控工作提供临床数据。【方法】利用PCR技术对唐山市38个奶牛场腹泻犊牛788份腹泻粪样进行牛病毒性腹泻病毒(Bovine viral diarrhea virus, BVDV)、牛轮状病毒(Bovine rotavirus, BRV)、牛冠状病毒(Bovine coronavirus, BCV)、大肠杆菌(Escherichia coli)、沙门氏菌(Salmonella)、产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)、球虫(Coccidia)、隐孢子虫(Cryptosporidium)和贾第鞭毛虫(Giardia lamblia)9种病原检测,统计分析其阳性率及混合感染情况。【结果】788份犊牛腹泻粪样中,阳性率最高的为大肠杆菌,为43.53%(343/788)。在所有被检地区,滦南县BVDV的阳性率最高,为45.38%(59/130);汉沽区BRV和BCV阳性率最高,分别为55.00%(22/40)和37.50%(15/40);古冶区大肠杆菌和贾第鞭毛虫的阳性...     

牛冠状病毒TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立特异灵敏的检测牛冠状病毒(BCoV)的Taq Man荧光定量RT-PCR方法,并对犊牛腹泻粪便样品进行检测。本实验根据牛冠状病毒(BCoV)聚合酶基因nsp10核苷酸序列分别设计了1对引物和探针,通过反应体系和条件的优化,建立了检测BCoV的TaqMan荧光定量RT-PCR方法。该方法在3.36×10~1拷贝/μL～3.36×10~9拷贝/μL,质粒标准品与Ct值呈现良好的线性关系,相关系数R~2=0.9996,扩增效率E=109%;该方法只特异性检出BCoV,而不能检出其它常见腹泻病原,特异性较强;对质粒标准品的检测下限为33.6拷贝/μL,与所比较方法的敏感性数量级相同,敏感性较高;批内与批间重复性试验的变异系数均小于5%,重复性较好。该方法对腹泻粪便样品中BCoV检出率高于国外文献报道的TaqMan荧光定量RT-PCR检测方法。利用该方法对采集自新疆和辽宁的16个养殖场153份犊牛腹泻粪便样品进行了BCoV的检测,BCoV阳性率为71.24%,场阳性率为100%,表明犊牛感染BCoV的现象普遍。本实验首次建立了靶向BCoV聚合酶基因的荧光定量RT-PCR检测方法,其特异性和稳定性好,灵敏度较高,为BCoV的快速检测和流行病学调查提供了有力的手段。     

2017—2018年山东省奶牛场犊牛腹泻相关病毒病原学检测

为了解山东省奶牛养殖场中引起犊牛腹泻相关病毒的流行情况，2017—2018年，在全省13个地区51家规模化奶牛养殖场，采集624份犊牛腹泻病料样品，进行牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛肠道病毒（BEV）、牛冠状病毒（BCoV）和牛轮状病毒（BRV）PCR检测，并对检测结果采用SPSS 20.0软件进行数据统计以及显著性差异分析（Pearson卡方检验）。结果显示：BVDV、BEV、BCoV、BRV个体检出率分别为34.58%、11.78%、8.84%、17.70%，群体检出率分别为47.83%、38.89%、35.71%、33.33%，BVDV检出率显著高于其他3种病毒（P<0.01），且有流行加重趋势；鲁西北、鲁中、鲁西南、半岛地区4种病毒的检出率有差异，其中鲁中地区的BVDV检出率明显高于其他地区（P<0.01）。结果表明，BVDV、BEV、BCoV、BRV 4种病原在山东省奶牛场中流行广泛，以BVDV流行最为严重，尤其是鲁中地区，且有流行加重趋势，成为导致奶牛场犊牛腹泻的主要病毒性因素，建议有针对性地开展防控与净化。本检测初步摸清了山东省不同地区引起奶牛犊牛腹泻相关病毒的感染情况，可为山东省制定奶牛腹泻病综合防控措施提供数据支撑。     

奶牛牛病毒性腹泻病毒与冠状病毒混合感染的PCR诊断

为了对河北省石家庄市某奶牛场发病及死亡奶牛进行确诊,试验对腹泻奶牛的粪样进行了牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和牛冠状病毒(BCoV)PCR检测,同时对病死奶牛脏器样品进行BVDV、BCoV、传染性鼻气管炎病毒(IBRV)、牛轮状病毒(BRV)及牛细小病毒(BPV)的PCR检测。试验结果显示,6份粪样BVDV阳性率为50%,BCoV阳性率为33.3%,同一份粪样中可同时检测出BVDV和BCoV两种病毒。小肠、肺脏和肝脏中均检出BVDV和BCoV,未检测出IBRV、BRV和BPV。结果表明,BVDV和BCoV为阳性,IBRV、BRV和BPV结果为阴性。最后确诊为BVDV和BCoV的单一感染和混合感染。     

柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫感染情况调查与种类鉴定

[目的]掌握新疆维吾尔自治区阿克苏地区柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染情况和种类分布情况。[方法]从柯坪县4个乡(镇)6个规模化双峰驼养殖场共收集516份粪便样本,全部提取DNA样本,基于隐孢子虫(Cryptosporidium)SSU rDNA序列进行PCR检测,序列比对分析后进行隐孢子虫种类鉴定;采用χ²检验法比较不同规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率差异;将被鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C. parvum)阳性的DNA样本,基于gp60基因序列进行PCR检测,序列比对分析后进行微小隐孢子虫亚型鉴定。[结果]516份双峰驼粪便DNA样本中检测出34份隐孢子虫阳性,总体感染率为6.59%(34/516),以阿恰勒镇养殖场2的双峰驼隐孢子虫感染率最高,为9.57%(9/94);不同养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率统计学差异显著(χ²=5.497,P<0.05)。基于SSU rDNA序列,34条隐孢子虫序列经比对分析,鉴定出3种隐孢子虫,分别为安氏隐孢子虫(n=29)、隐孢子虫大鼠基因型Ⅳ(n=1)...     

四川省某肉牛场犊牛呼吸道疾病的病原学诊断

四川省某肉牛场新引进的犊牛出现发热、咳嗽、呼吸困难、流鼻涕等呼吸道症状,为了解该病的病因,本试验采集了10份病牛深部鼻腔棉拭子样本,采用PCR方法检测了牛冠状病毒（BCoV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛腺病毒3型（BAV-3）、牛支原体（M.Bovis）、多杀性巴氏杆菌（P.multocida）、溶血性曼氏杆菌（M.haemolytica）及睡眠嗜组织菌（H.somni）等8种常见呼吸道病原。结果显示：BCoV检出率为70%,BVDV检出率为30%,其余病原均未检出,表明该肉牛场犊牛的呼吸道疾病是由BCoV和BVDV混合感染引起的。     

云南某奶牛场犊牛腹泻的病原学检测

云南省某奶牛场1～3月龄犊牛暴发以腹泻为主要症状的疾病，本试验对该场送检的16份犊牛腹泻粪便样本进行牛A群轮状病毒（BRVA）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛冠状病毒（BCoV）、牛诺如病毒（BNoV）、牛凸隆病毒（BToV）、牛纽布病毒（BNeV）、沙门氏菌（Salmonella）、产肠毒素大肠杆菌（ETEC）、安氏隐孢子虫（C.andersoni）9种病原的PCR检测。结果得出：16份样本中BNeV、BRVA、BToV和BNoV的检出率分别为62.5%(10/16)、37.5%(6/16)、18.75%(3/16)和6.25%(1/16)，其他病原体未检出。结合临床检查结果，可以确定BRVA、BNoV、BNeV和BToV这四种病原的混合感染是引起该养殖场犊牛腹泻的主要原因，本结果为该场犊牛腹泻疾病的针对性防控提供了依据。     

猪源E.coli HPI通过NLRP3/ASC/Caspase-1诱导巨噬细胞焦亡的机制

为探讨猪源E.coli高致病性毒力岛(high pathogenicity island, HPI)对巨噬细胞焦亡的影响,以内毒素(LPS)联合三磷酸腺苷(ATP)建立焦亡阳性对照,使用E.coli WT株(E.coli HPI⁺)和前期构建的E.coli HPI敲除株(E.coliΔHPI)感染巨噬细胞,在感染后不同时间点收集细胞,运用PI染色观察细胞膜损伤情况;RT-qPCR测定NLRP3/ASC/Caspase-1焦亡通路中关键因子的mRNA水平;共聚焦观察NLRP3和Caspase-1的炎性复合体的组装;Western blot技术测定GSDMD和cleaved-GSDMD的表达。结果显示,与E.coliΔHPI组相比,E.coli HPI⁺焦亡通路关键因子NLRP3、ASC、Caspase-1、GSDMD及炎症因子IL-18、IL-1β的mRNA水平均升高;NLRP3和Caspase-1蛋白的表达量升高,共聚焦观察到共定位;E.coli HPI⁺组的GSDMD及其活性形式cleaved-GSDMD的表达水平高于...     

陆川猪免疫抑制性疾病的流行病学调查

为了掌握近年来纯种陆川猪群中免疫抑制性疾病的感染状况,试验采用PCR方法对2016年3—12月份期间采自广西陆川县及周边地区的389份样品分别进行了猪肺炎支原体(Mhp)、猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)、副猪嗜血杆菌(HPS)、猪链球菌2型(SS2)、猪伤寒沙门氏杆菌(ST)、大肠杆菌(E.coli)、猪附红细胞体(E.suis)和猪弓形体(TP)等病原的检测。结果表明:以上病原阳性率分别为26.74%(104/389)、15.42%(60/389)、10.80%(42/389)、11.83%(46/389)、7.71%(30/389)、30.33%(118/389)、21.59%(84/389)、11.31%(44/389),其中E.coli、Mhp和E.suis感染最为严重。从感染的模式看,陆川猪的这些免疫抑制病病原多表现为混合感染,两种以上病原混合感染的样品占74.65%(162/217),其中以Mhp或E.coli与其他病原混合感染类型为主,分别占61.11%(99/162)和56.79%(92/162)。说明纯种陆川猪群中普遍存在免疫抑制病病原感染且以混合感染为主,其中Mhp和E.coli是混合感染的主要病原。     

西昌市某奶牛场犊牛腹泻的病原学检测

犊牛腹泻是犊牛常见的疾病之一,影响犊牛生长发育和成活率。2021年1月,西昌市某奶牛场发生犊牛腹泻,为确定病因,笔者运用PCR和RT-PCR方法对该场22份犊牛腹泻粪便样本进行10种腹泻病原检测,结果得出：22份样本均检测到牛病毒性腹泻/黏膜病病毒（BVDV）;16份样本显示牛诺如病毒（BNoV）阳性;12份样本显示纽布病毒（NeV）阳性;8份样本显示牛轮状病毒（BRV）阳性;4份样本为牛细小病毒（BPV）阳性;牛冠状病毒（BCoV）和环曲病毒（BToV）各1份样本显示阳性;而大肠杆菌、沙门氏菌、巴氏杆菌等细菌性病原均未检出。本调查结果表明引起该场犊牛腹泻的原因主要是多种病毒的混合感染,其中牛病毒性腹泻/黏膜病病毒的感染率高达100%。     

鼠李糖乳杆菌GR-1缓解大肠杆菌诱导的奶牛子宫内膜上皮细胞炎性反应

为明确鼠李糖乳杆菌GR-1(L.rhamnosus GR-1)在大肠杆菌感染原代奶牛子宫内膜上皮细胞(BEECs)过程中调节炎性反应的机制，本试验将BEECs分为4个组，分别是对照组(加入5 mL培养基)、E.coli攻菌组(加入5 mL浓度为1×10⁵ CFU/mL大肠杆菌)、L.rhamnosus GR-1单独处理组(提前3 h加入5 mL浓度为1×10⁷ CFU/mL L.rhamnosus GR-1)和L.rhamnosus GR-1保护组(加入5 mL浓度为1×10⁷ CFU/mL L.rhamnosus GR-1孵育3 h后去掉上清液，再加入5 mL浓度为1×10⁵ CFU/mL大肠杆菌);采用光学显微镜观察E.coli对BEECs形态的损害情况，实时荧光定量PCR检测相关基因的转录水平，Western blot检测TLR2和NF-κB2的蛋白表达。结果显示，E.coli攻菌6 h后，与E.coli攻菌组相比，L.rhamnosus GR-1保护组BEECs形态保持完整，且TLR2、TL...     

一起犊牛冠状病毒、轮状病毒与大肠埃希氏菌混合感染的实验室诊断

陕西省某规模化奶牛场发生一起新生犊牛腹泻病例,为了确定发病原因,通过临床剖检,无菌采集病料进行细菌分离鉴定、PCR检测病毒等技术,最终确诊这起疫病为牛冠状病毒(BCoV)、牛轮状病毒(BRV)和大肠埃希氏菌混合感染所致的犊牛腹泻.对分离到的大肠埃希氏菌进行药敏试验,结果显示分离菌对左氟沙星和诺氟沙星敏感,对四环素、复方...