猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及集群运动分析

本试验从发病猪肝脏中分离到1株细菌,经革兰氏染色镜检、生化试验、药敏分析、16S rDNA测序,确认该菌为1株多重耐药奇异变形杆菌。该菌与GenBank中其他9株不同来源的奇异变形杆菌进行16S rDNA比对分析,从遗传进化规律方面证明不同来源的的奇异变形杆菌亲缘性极其相近。周期性群集运动分析结果表明在含0.5%和1.0%琼脂平板上,该菌不以圆环样周期运动;在含1.5%和2.0%琼脂平板上,该菌以圆环样周期运动。     

一株藏猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

本研究从某藏猪场发病仔猪病料中分离细菌，对分离菌进行形态学、染色特性、生化特性鉴定，并分析16S rDNA基因同源性，同时进行了药敏试验。分离鉴定结果得出：分离菌呈多形性，多为革兰氏阴性短杆菌，少数为长杆状，在SS培养基上形成中心黑色、边缘白色的单菌落；生化反应对鸟氨酸脱羧酶、尿素酶、葡萄糖、柠檬酸盐、山梨醇、硫化氢等呈阳性反应；分离株16S rDNA基因的PCR扩增目的条带约为1 410 bp，在GenBank上进行同源性比对，与奇异变形杆菌的相似度为99%。从形态学、生化特性和16S rDNA序列分析结果鉴定出所分离的菌株为奇异变形杆菌。药敏试验结果显示：菌株的耐药性很强，只对头孢他啶、氧氟沙星、庆大霉素、阿米卡星、氟苯尼考、左氧氟沙星、麦迪霉素等敏感。     

蛇源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了更好地了解广西蛇病的主要致病菌及其对现有药物的敏感性,无菌取发病眼镜蛇内脏器官,用鲜血琼脂、麦康凯培养基分离培养病原菌,分离到1株优势菌。对该菌进行生长形态特性观察、生化特性试验、16S rRNA基因序列分析、致病性试验和药敏试验。表明该分离菌为具有较强致病力的奇异变形杆菌,药敏试验结果表明分离病原菌对阿米卡星、氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、恩诺沙星敏感;对头孢他啶、头孢曲松、头孢西丁、多西环素、阿奇霉素、阿莫西林耐药。     

1株樱桃谷鸭奇异变形杆菌的分离与鉴定

为研究鸭源奇异变形杆菌的耐药性和毒力因子,本试验在大体剖检检有心肌和肝脏出血,胸腔有少量积液,关节剖开后有少量积液的病鸭肝脏和出血部位中,用血平板培养分离病原菌。经纯化和革兰氏染色后,分离菌在显微镜下呈长、短杆状,革兰氏染色呈阴性;生物化学反应表明分离菌具有明显的运动特性,M-R试验、V-P试验结果呈阳性,与特异变形杆菌的生物化学特征一致;分离菌16srDNA进化树结果表明,分离菌属奇异变形杆菌;药敏试验结果表明,分离菌对多种药物有耐药性,耐药率达75%;PCR检测ureC、ucaA、zapA、atfA、mrpA、pmfA、atfC毒力基因,除ucaA外其他6种毒力基因均被检出。以上结果表明,奇异变形杆菌是引起雏鸭发病的重要病原体,应引起高度的重视。     

鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

对从健康鸡空肠和病变组织中分离的15株细菌进行显微镜检、菌落形态观察、16 S rRNA基因序列比较分析、致病试验及药敏试验。结果显示:分离菌革兰氏染色阴性,在普通营养琼脂培养基上形成圆形透明菌落,能够在SS培养基生长,在HE培养基和三糖铁培养基产生H_2S;与Gen Bank奇异变形杆菌的相似性为100%~99.6%,与大肠杆菌、沙门菌的相似性为89.7%~91.0%,结合菌落特征和生长特性,该分离菌被鉴定为奇异变形杆菌。人工感染雏鸡(1.7×10~7cfu/mL),复制出与自然病例相似临床症状和病理变化。提示奇异变形杆菌引起鸡感染,肠道可能是奇异变形杆菌贮存库,对鸡群有潜在性威胁。药敏试验发现在6类18种常用抗菌素中,分离菌仅对氨基糖苷类没有抗药性。     

云南鸡源副禽嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性分析

无菌棉签深入病死鸡鼻窦腔深部无菌采集病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生理生化试验、革兰氏染色、血凝活性测定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果在富含V因子血琼脂平板上分离到一株灰白色、圆形、边缘整齐的光滑型小菌落,菌落在血琼脂平板、麦康凯等培养基上无明显菌落生长;镜检观察为革兰氏阴性菌,具有血凝活性,符合副禽嗜血杆菌生化培养特性;细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为副禽嗜血杆菌。分离菌株对妥布霉素、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星具有敏感性。     

1株鸡源奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏试验

[目的] 阐明青海省大通县某鸡场病鸡发病原因,为奇异变形杆菌病防控提供参考。[方法] 无菌采集病鸡肝脏、脾脏和泄殖腔拭子等样品,接种普通琼脂和SS琼脂平板进行细菌分离纯化培养,挑取平板上生长的疑似菌落进行革兰染色镜检,再将分离的菌落接种生化鉴定管进行生化鉴定,同时通过PCR扩增16S rDNA和tuf特异性基因并测序。将分离菌接种雏鸡进行致病性试验,采用K-B法评价分离菌对27种抗菌药物的敏感性。[结果] 分离菌为短杆、长杆状多形性杆菌,生化特性与奇异变形杆菌相符。PCR成功扩增出1 400 bp的16S rDNA,序列比对显示与奇异变形杆菌同源性最高,为99.9%。雏鸡致病性试验结果表明,该株奇异变形杆菌对雏鸡有致病性。药敏试验结果显示,该菌株对哌拉西林、头孢吡肟和头孢噻肟等高度敏感,对环丙沙星、奥格门汀中度敏感,对氨苄西林、阿莫西林和头孢唑啉有耐药性,提示该菌对头孢类药物高度敏感。[结论] 分离到的一株奇异变形杆菌对鸡具有较强的致病性,且对多种药物表现出耐药性。     

鸡奇异变形杆菌的分离鉴定及药敏分析

从云南某鸡场发病鸡肝脏中分离到一株革兰氏阴性多形性小杆菌,并进行生理生化鉴定、16SrDNA基因比对鉴定、致病性试验和药敏试验。试验结果表明：该分离株分解葡萄糖、乳糖、半乳糖和木糖,产酸产气,迅速分解尿素,H2S试验阳性,结合分离株的培养特性和革兰氏染色镜检结果,将分离株初步鉴定为鸡奇异变形杆菌;分离株16srDNA核苷酸序列与GenBank上其它鸡奇异变形杆菌之间的同源性高达99％～100％,与ALK428（基因登录号KC456557）为代表的许多奇异变形杆菌菌株之间的核苷酸同源性高达100％,将分离菌株进一步鉴定为鸡奇异变形杆菌;分离株对小白鼠有强致病性,对头孢噻肟敏感,对青霉素、氨苄西林、头孢噻吩、链霉素、卡那霉素、氧氟沙星、磺胺嘧啶、氟苯尼考等多种抗生素表现严重的多重耐药性。     

15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及其Ⅰ类整合子的检测

为鉴定从临床病料中分离的两株细菌(XL株、XT株)的种属、致病性及耐药性等生物学特征,本研究对分离菌进行了纯化、革兰氏染色、迁徙生长试验、16S rDNA的序列比对、小鼠致病试验、药敏试验以及耐药基因Ⅰ类整合子的扩增。结果表明:两株细菌均为奇异变形杆菌;与NCBI登录的猪源奇异变形杆菌的16S rDNA的同源性高达99.9%~100%;两株细菌致病性均很强;两株细菌均存在多重耐药,仅有丁胺卡那对它们高敏;两株细菌均能扩增出Ⅰ类整合子。该研究结果为进一步研究变形杆菌的耐药性提供了科学依据。     

变形杆菌的分离鉴定及其毒力与耐药相关基因检测

将从病死的牛、猪和鹅肝脏内分离的3株菌分别进行分离纯化、革兰染色镜检、生化试验和药敏试验,对其16S rRNA基因进行PCR扩增、测序、同源性比对,测定其毒力和耐药相关基因。结果显示,3株均为革兰阴性杆菌。16S rRNA基因序列同源性分析显示,2株分离菌与普通变形杆菌同源性高达999%,另外1株与奇异变形杆菌同源性高达100%。毒力基因检测表明,2株普通变形杆菌携带rpoA和fliL,奇异变形杆菌携带hpmA、hpmB、rpoA和fliL,均为编码溶血素和鞭毛的基因。药敏试验结果显示,3株变形杆菌对多种抗菌药物耐药,仅对头孢吡肟等敏感。对其耐药基因——头孢菌素酶(ampC)基因检测结果与药敏试验的结果基本一致。3株不同来源的分离菌均为变形杆菌,其致病性可能与其含有编码溶血素以及鞭毛的基因有关,对头孢菌素类耐药性可能与其携带ampC基因有关。     

一例羊皮下脓肿病原的分离鉴定及药敏试验

为确定某羊场一例羊皮下脓肿病的病原，将病料样本接种于TSA固体培养基进行病原分离，然后对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、药敏试验和生物信息学分析。结果分离到1株革兰氏阳性球菌和1株革兰氏阴性短杆菌，经生化鉴定以及16S rDNA PCR扩增、测序、同源性分析，鉴定该分离菌株为金黄色葡萄球菌和溶血性曼氏杆菌；2株细菌对头孢曲松、链霉素、四环素、多西环素、左氧氟沙星等多种药物敏感。     

鸡呼吸道致病菌的分离鉴定

本试验旨在为开发防制鸡细菌性呼吸道疾病产品提供依据。本试验将患有呼吸道疾病的鸡病料如喉管、气管、肺脏组织接种到各种选择培养基分离细菌,对分离的17株菌株进行生化鉴定、PCR鉴定和致病力测定。结果显示,在伊红美蓝琼脂(EMB)培养基中分离出黑色金属光泽菌落;革兰氏染色后在光学显微镜下见到革兰氏阴性的短杆状细菌;PCR扩增出1 500 bp大小条带,测序结果与GenBank中细菌16S rDNA序列进行BLAST比对并构建系统进化树,分离菌最终鉴定为一株大肠杆菌。将分离的致病菌滴鼻感染肉鸡能损伤肉鸡呼吸道,使喉管出现血斑,气管红肿、布满血点,心脏、肝脏包裹黄色干酪样物质,气囊浑浊不透明,具有致病性。结果表明,分离的致病菌可作为产品开发的基础。     

泰州地区致仔猪腹泻奇异变形杆菌鉴定及其毒力基因与耐药性检测

为了分析泰州地区致仔猪腹泻奇异变形杆菌致病性、毒力基因及耐药性,试验从泰州地区规模化养殖场采集腹泻仔猪粪便、肛拭子等114样品,分离得到42株奇异变形杆菌,采用PCR法和K-B药敏纸片法对分离的42株奇异变形杆菌进行毒力基因与耐药性检测。结果表明,42株奇异变形杆菌毒力基因zapA、pmfA检出率最高,检出率分别为95.2%、92.9%,毒力基因ureC、mrpA、atfC检测出率在40.5%～50.0%之间;42株奇异变形杆菌对阿莫西林、大观霉素、氨苄西林等11种药物耐药率在66.7%以上,对头孢噻呋、头孢噻肟、恩诺沙星等5种药物耐药率在11.9%～26.2%之间,说明了该地区分离的致仔猪腹泻奇异变形杆菌携带多种毒力基因,耐药性严重。本试验为该地区分离的致仔猪腹泻奇异变形杆菌感染的防控提供参考依据。     

致羔羊腹泻奇异变形杆菌的分离鉴定及迁徙行为分析

2015年春,山东滕州某规模化羊场新生羔羊出现严重的腹泻,并且部分羔羊死亡。对该羊场病死羔羊进行剖检后,共分离到4株细菌(分别命名为PM1、PM2、PM3、PM4)。对所分离的细菌进行形态特征、生化试验以及16S rDNA遗传分析,判定该4株菌均为奇异变形杆菌。16SrDNA系统发育及同源性分析显示:4株分离菌与其他11株奇异变形杆菌的同源性为99%以上,其中与中国Hu株、马来西亚PPB3株以及印度BAB-199株位于同一个分支上,且与中国的Hu株的进化关系最近;4株分离菌之间的同源性为100%,判断为同1株菌。细菌生长曲线、药敏试验、毒力试验、毒素测定试验以及游散行为分析结果表明,该分离菌于14h左右达到生长稳定期,且对环丙沙星、左氟沙星最为敏感;对小鼠有强致病性,分离菌培养液的无菌滤液对小鼠无毒性作用;在含0.5%琼脂的LB平板上迁徙速度最快,且在含琼脂1.5%和2.0%的LB平板上呈圆环样周期运动。该研究结果为羊奇异变形杆菌病的防控提供了基础。     

断奶腹泻仔猪肠道沙门菌与奇异变形杆菌的分离鉴定

本试验收集了全国范围内23个猪场125份21~70日龄临床腹泻仔猪肠内容物样品,用以分离和鉴定沙门菌和奇异变形杆菌。结果显示:共分离得到23株沙门菌分离株及31株奇异变形杆菌分离株,其中较为流行的沙门菌为鼠伤寒沙门菌。同时,对SS琼脂和XLD琼脂上的沙门菌和奇异变形杆菌进行对比鉴定,提高了沙门菌和奇异变形杆菌分离鉴定的准确率。     

1株鸭源奇异变形杆菌的分离鉴定与毒力基因检测

试验旨在研究鸭源分离菌的耐药性及致病性,通过细菌分离鉴定、药敏试验、耐药基因和毒力基因PCR检测及动物致病性试验,成功分离到1株细菌,经纯化和革兰氏染色,显微镜下显示两种形态：短杆状以及细长如发丝,革兰氏染色为阴性菌,将其命名为GZGY2020。生化反应显示,分离菌具有明显的运动性,M-R试验、V-P试验均为阳性,生化特性符合奇异变形杆菌。分离菌16S rDNA进化树结果显示,其与奇异变形杆菌处于同一分支。药敏试验结果发现,分离菌对多种药物耐药,对18种药敏纸片中羧苄西林、头孢氨苄、苯唑西林等16种药物耐药,耐药率高达88.9%,仅对头孢他啶和环丙沙星敏感;PCR检测其含有磺胺类耐药基因基因sul1和sul2及β-内酰胺类耐药基因VIM,并含有hpmA、rsmA、atfA、ucaA、ureC、zapA、pmfA、fliL和mrpA 9种毒力基因。动物回归试验结果显示,分离菌对雏鸭致病力强,即1×10⁸ CFU/mL菌液能使雏鸭1 d内全部死亡。在药敏特性上,从病死鸭中分离到的菌株GZGY2020与以往报道的奇异变形杆菌有一定差异,表明该菌可能发生变异,导致毒力增强,而检测的10种毒力基因中仅有1种毒力基因没有出现相应的条带,表明奇异变形杆菌是引起该鸭死亡的重要致病菌,应引起高度重视。     

猪源奇异变形杆菌的分离鉴定及特征分析

为探究广西地区猪源奇异变形杆菌的毒力和耐药情况,本研究从不同规模养殖场收集病死猪病料98份,通过分离培养、形态学观察、染色镜检、16S rRNA测序对分离菌进行鉴定;采用微量肉汤稀释法进行药敏试验;PCR检测毒力基因、耐药基因和整合子及其可变区;可变区扩增产物克隆至pMD^TM19-T载体进行测序。鉴定结果显示,22株细菌在TSA培养基上弥漫性生长,在SS培养基上形成中心黑色边缘白色的单菌落,镜检为革兰氏阴性短杆菌,变形杆菌属特异性基因（TUF）阳性。16S rRNA测序结果显示,21株分离菌与奇异变形杆菌同源性达99%,1株分离菌与彭氏变形杆菌同源性达99%。药敏结果显示,21株奇异变形杆菌对四环素、多西环素、氨苄西林、磺胺甲噁唑耐药率均为100%,对头孢氨苄、头孢呋辛、头孢噻肟、亚胺培南、卡那霉素耐药率在57.1%以上,所有分离株均为多重耐药菌。PCR结果显示,21株分离菌毒力基因atfA、hpmA、ireA、mrpA、pmfA、rsb、ureC、zapA、ptA检出率均为100%,ucaA检出率为95.2%;ESBLs菌株为bla_TEM型、bla_CTX型或bla_TEM型和bla_CTX型,AmpC菌株均为bla_DHA型,携带ESBLs或AmpC基因的菌株比例为57.1%、14.3%,同时携带ESBLs和AmpC基因的菌株比例为14.3%;qnrA、qnrB、qnrS和aac（6’）-Ⅰb-cr检出率分别为9.5%、0、4.8%和80.1%。21株分离菌Ⅰ类整合子（intⅠ1）阳性率61.9%,检测到9种基因盒阵列（aadA2-linF、estX、dfrA32-ereA-aadA2、drfA5、drfA12-orfF-aadA2、arr3-aac （6’）Ⅰb-cr5、aac （6’）Ⅰb-cr5-bla_OXA-1-catB3-aar3、drfA1-orfC和aadA2）;Ⅱ类整合子（intⅠ2）阳性率76.2%,检测到1种基因盒阵列（drfA1-sat1-aadA1）。本研究结果表明,广西地区猪源奇异变形杆菌毒力高且耐药严重,为后期针对奇异变形杆菌的防治和研究提供数据支持。     

熟肉制品中奇异变形杆菌的分离鉴定及药物敏感性分析

熟肉制品的特点是可直接食用，而其在食用前又很容易受到致病性微生物污染，所以保证其食用安全性尤其重要。为了解熟肉制品中微生物携带情况，对从沈阳市某熟食店购买的猪头肉和鸡肝中分离到的2株微生物进行了培养鉴定，从形态特征、培养特性、生化试验、16S rRNA基因序列的角度进行分析，并对药物敏感性进行了调查。结果显示，2株分离菌均为短杆状革兰氏阴性菌；均发酵葡萄糖、产生硫化氢，甲基红试验和三糖铁试验阳性；与GenBank中公布的奇异变形杆菌的同源性均在98%以上，综合分析后确定分离的2株菌均为奇异变形杆菌(分别命名为SZ2101菌株和SJ2124菌株);药敏试验结果显示，2株分离菌对β-内酰胺类、喹诺酮类、氨基糖苷类以及大环内酯类的阿奇霉素等药物不同程度敏感；对磺胺类及大环内酯类的红霉素不敏感。结果表明，从熟肉制品中分离的2株菌均为奇异变形杆菌，研究结果为肉品污染防控和食品安全防护提供了重要的参考资料。     

鸡源致病性奇异变形杆菌的分离鉴定与遗传进化分析

为了解鸡源奇异变形杆菌的耐药情况、致病力和遗传特征,本试验从凉山地区分离得到2株细菌（YLF1、WS）,通过培养特征、镜检特征和16S rRNA序列测定对分离菌进行鉴定及致病性试验;采用（K-B）法检测分离菌对14种常用抗生素（包括β-内酰胺类、头孢烯类、氨基糖苷类、四环素类、氟喹诺酮类、大环内酯类）的敏感性;并与GenBank中公布的21种不同来源的变形杆菌16S rRNA基因序列进行遗传进化分析。结果表明,YLF1、WS菌株均具有迁徙性和β-溶血生长特征,镜检为革兰氏阴性长短不一的杆菌或球菌,经16S rRNA基因鉴定与GenBank中奇异变形杆菌同源性均在99%以上,YLF1、WS菌株确定为奇异变形杆菌,均表现为多重耐药,耐药率分别为78.6%（11/14）和71.4%（10/14）;雏鸡致死率均为80%;YLF1、WS菌株与日本人体分离株、中国新疆黄牛分离株和中国广东土壤分离株同源性最高,达99.9%;与来自中国河南、中国新疆及印度的鸡源奇异变形杆菌同源性较高（98.9%~99.3%）,遗传关系密切。表明凉山地区鸡群中存在奇异变形杆菌感染,分离株有较高的致病力和较强的耐药性,也提示分离菌可能来源于环境、感染鸡或其他动物,同时存在人畜共患的潜在危险。