猫杯状病毒、猫细小病毒、猫流感病毒和猫疱疹病毒多重PCR检测方法的建立和应用

为建立快速检测猫科动物重要传染病的多重PCR检测方法,根据GenBank中登录的猫杯状病毒(feline calicivirus, FCV)、猫细小病毒(feline parvovirus, FPV)、猫流感病毒(feline influenza virus, FIV)和猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus type 1,FHV-1)的相对高保守性基因ORF2、NSP1、M和UL27,分别设计4对特异性引物。通过对反应体系的摸索及优化,建立了可同时扩增FCV(257 bp)、FPV(380 bp)、FIV(519 bp)和FHV-1(761 bp)的四重PCR反应条件及体系。结果显示：能够在同一体系中用同一反应扩增出以上4种病毒基因,其重复性及特异性均良好,敏感性可达到10 copies/μL。用该方法检测69份口鼻拭子,结果发现FCV和FPV混合感染的阳性率为10.14%,FCV和FHV-1混合感染的阳性率为1.45%,FCV、FPV和FIV混合感染的阳性率为10.14%。结果表明：研究建立的四重PCR检测方法可对常见猫科动物病毒性传染病进行快速准确的鉴别诊断,而且为...     

猫疱疹病毒Ⅰ型PCR检测方法的建立与初步应用

建立猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)PCR检测方法,应用于临床样品中FHV-1的快速检测。根据猫疱疹病毒Ⅰ型的gI基因序列设计了一对特异性引物,以疑似猫疱疹病毒Ⅰ型感染猫的眼鼻分泌物总DNA为模板,建立了PCR检测方法,对所建立的方法进行特异性、敏感性和重复性验证,并对26份临床样本进行检测。结果表明,所建立的PCR诊断方法与犬细小病毒(CPV)、犬瘟热病毒(CDV)、绵羊肺炎支原体(M.ovis)、牛支原体(M.bovis)、牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)均无交叉性反应,最低检测DNA模板浓度为3.23×10~3 copies/μL。对26份临床病例进行检测,阳性率61.54%。说明建立的FHV-1PCR检测方法具有特异性强、敏感度高、方便快捷等优点,适合于临床FHV-1感染的快速检测。     

一株猫疱疹病毒Ⅰ型（FHV-1）的分离鉴定及攻毒模型建立

从一只临床表现为流脓涕、打喷嚏的猫身上分离出一株猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus typeⅠ,FHV-1),使用F81细胞进行分离,并通过PCR、透射电镜和糖蛋白D(gD)基因序列分析来鉴定病毒。通过PCR方法从猫的鼻分泌物中扩增出1125 bp的gD基因。序列分析表明,该分离株与从GenBank获得的其他FHV-1毒株属于同一家族。随后在接种猫鼻分泌物的F81细胞的培养上清中观察到有包膜和直径约120 nm左右的疱疹样病毒颗粒。将分离获得的FHV-1病毒感染2～3月龄蓝猫,成功建立动物实验模型,感染后的猫出现脓性的眼鼻分泌物,打喷嚏等临床症状,且一周内持续排毒。该分离株为FHV-1的病原学研究提供了重要的数据,也为猫鼻气管炎疫苗候选株的筛选和疫苗的研发奠定了基础。     

猫传染性鼻气管炎病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

猫传染性鼻气管炎(FIR)病毒是引起猫传染性鼻气管炎的病原,属于猫疱疹病毒1型(FHV-1)。选择FHV-1gD基因设计1对引物FHV-1F、FHV-1R和探针FHV-1Probe,建立FHV-1实时荧光定量PCR检测方法。结果表明,该方法可以特异地检测出FHV-1的DNA,敏感性达到75fg/μL,反应效率达到107%,R²值为0.9965,Ct值的变异系数低于2%。FHV-1实时荧光定量PCR检测方法敏感性高于普通PCR,特异性好、稳定性好,适用于FHV-1的临床诊断、检测和流行病学调查。利用该方法对上海地区宠物门诊送检的疑似FHV-1感染的样品进行检测,其阳性率达到27.78％,表明上海地区宠物猫FHV-1的发病率处于较高水平。     

山东省青岛市猫病毒性鼻气管炎流行情况调查

为了解山东省青岛市猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)的流行情况,2019年6月至2021年6月共采集猫眼鼻拭子样本218份,提取样本DNA后利用PCR方法进行FHV-1核酸检测,共检出阳性样本22份,阳性率为10.1%(22/218)。宠物救助站猫的FHV-1阳性率(16.7%)略高于其他来源猫,2~6月龄幼猫的FHV-1阳性率(13.6%)略高于成年猫(7.0%),成年公猫阳性率(7.3%)稍高于成年母猫(6.7%),但各组间均无显著性差异(P>0.05)。对2021年3月采集的60份猫血清进行了FHV-1中和抗体检测,共检出阳性样本40份,抗体阳性率为66.7%。结果表明,青岛市猫群中存在一定的FHV-1流行,抗体保护水平不高,应加快国产FHV-1相关疫苗的研制,及时对猫进行免疫预防。     

2013年-2015年西安宠物门诊家养猫泛白细胞减少症病例调查

猫泛白细胞减少症(FP)是由猫泛白细胞减少症病毒(FPV)引起的猫科动物的急性高度接触性传染病,临床上常以发热、呕吐、腹泻、脱水、肠炎以及白细胞极度减少为主要特征.本病传播速度快,对猫科动物危害极大.近年来,西安地区家养猫数量不断增加,患FP的病例也随之增多.为了解西安地区家养猫FPV感染和发病情况,为本病的防控提供基础资料,2013年7月~2015年7月,用猫泛白细胞减少症病毒检测试剂盒,对西安市部分宠物(动物)医院接诊的疑似FP病猫的467份粪便进行FPV检测,共检出阳性样品71份,占15.2%(71/467),其中2013年5份,2014年57份,2015年9份;阳性患猫中未免疫接种FPV疫苗的有70份,占98.6%(70/71).确诊病例中47.9%(34/71)临床出现呕吐症状,71.8%(51/71)出现腹泻症状.血液分析发现,84.51%的FPV感染猫的白细胞低于正常值;对71个患猫进行对症和支持治疗后存活率为83.1%(59/71).     

1例猫瘟的诊断与治疗

文章介绍1例猫瘟的诊断与治疗。患猫出现呕吐、拉稀等症状,采用临床检查、猫瘟病毒抗原快速检测试纸及血常规检查确诊,对患猫进行对症治疗、抗病毒治疗、抗菌治疗结合预后治疗。结果显示,患猫经治疗后,第5 d不再呕吐,体温恢复正常,第7 d粪便正常,后续恢复良好。     

猫重组ω干扰素配合不同药物治疗猫传染性鼻气管炎的临床效果观察

为了观察猫ω干扰素配合不同药物治疗猫传染性鼻气管炎(FIR)的临床疗效,本试验将收治的12例猫传染性鼻气管炎患猫作为研究对象,按照随机数字表法将其分为A、B、C三个组,每组4例,A组应用泛昔洛韦口服、更昔洛韦和眼康泰乐菌素滴眼治疗,B组在A组基础上配合猫重组ω干扰素治疗,C组在B组基础上配合阿莫西林克拉维酸钾注射液治疗,直至临床症状完全消失,观察各组治疗效果。结果显示,3种方法均可治疗猫传染性鼻气管炎,C组患猫痊愈时间最短,A组患猫痊愈时间最长,B组和C组痊愈时间分别显著低于A组(P<0.05),但B组和C组之间差异不显著(P>0.05);B组和C组治疗效果比A组更好;C组患猫疾病转归情况优于A组和B组,C组症状明显改善时间早于A组和B组。结果表明,在猫传染性鼻气管炎的治疗中,使用猫重组ω干扰素配合泛昔洛韦、更昔洛韦滴眼液、眼康泰乐菌素滴眼液、阿莫西林克拉维酸钾注射液可以缩短治疗时间,提升治疗效果,临床效果较好,值得推广应用。     

一例猫瘟的诊疗报告

猫瘟是由细小病毒引发的高致死率的传染病。本文介绍了一例患猫瘟的布偶猫的临床症状、血常规、猫淀粉样血清蛋白A、FPV等检查及诊断过程,输液、注射和喂食的治疗过程,并跟踪记录了治疗过程中体温与白细胞的变化,希望能为猫瘟的诊断及治疗提供思路。     

猫疱疹病毒Ⅰ型荧光定量聚合酶链式反应检测方法的建立

研究旨在建立实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qPCR)检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type Ⅰ,FHV-1)的方法,用于检测临床上猫的上呼吸道传染病样本。据Gen Bank已发表的猫疱疹病毒的gE基因序列的保守区域设计并合成一对特异性引物及探针,建立FHV-1的实时荧光定量PCR检测方法,对此方法进行特异性、灵敏度及重复性的验证,并对广东佛山某流浪猫基地猫疱疹病毒的流行情况进行调查,即对该基地的94份临床样品进行检测。结果表明：研究成功建立了FHV-1实时荧光定量聚合酶链式反应检测方法,此方法特异性强,与大多流行的犬猫病毒均未出现交叉反应;敏感性高,最低检出限为10 copies·μL^-1;重复性好,批内变异系数为0.29%～0.71%,批间变异系数为0.88%～1.38%。应用此方法在94份临床样品中检出28份FHV-1核酸阳性样品。综上所述,研究建立的FHV-1荧光定量聚合酶链式反应方法具有较好的特异性、敏感性和重复性,为临床上FHV-1...     

猫疱疹病毒Ⅰ型、猫杯状病毒、支气管败血波氏杆菌多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

旨在建立检测猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus 1,FHV-1)、猫杯状病毒(Feline calicivirus, FCV)、支气管败血波氏杆菌(Bordetella bronchiseptica,Bb)多重TaqMan荧光定量PCR方法。基于FHV-1的胸苷激酶(TK)基因、FCV的衣壳蛋白VP1基因、Bb的皮肤坏死毒素基因(DNT1)序列保守区域设计并合成TaqMan荧光定量PCR引物和探针,以FHV-1、FCV、Bb、猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌为模板验证引物和探针的特异性。制备重组质粒pMD18T-FHV-TK、pMD18T-FCV-VP1、pMD18T-Bb-DNT1作为标准品,经矩阵法确定最佳反应体系。以10倍梯度稀释的标准品为模板检测方法的灵敏性。应用建立的方法对32份临床具有上呼吸道感染症状的猫眼、口、鼻拭子检测,以评估该方法的可行性。结果显示：该方法可特异性检出FHV-1、FCV、Bb,且与猫细小病毒、沙门菌、金黄色葡萄球菌无交叉反应;灵敏度试验表明该方法对FHV-1、FCV、Bb的最低检出限分别为10、10和100拷贝/μL;应用该方法从3...     

两例猫瘟病例的诊疗报告

猫瘟热又称猫泛白细胞减少症（FP）,是由猫泛白细胞减少症病毒（FPV）引发的一种接触性传染病。本文对两例不同性别、年龄,具体表现为高温、呕吐、腹泻、排血便的病猫,通过临床症状、血常规和猫瘟病毒抗原检测,分析各项检测指标,确诊两例病猫所得疾病为猫瘟热。通过进行止吐、止泻、药物治疗等措施后,两例病猫均恢复良好。本文详细介绍了两例猫瘟病例的诊疗报告,为该病的诊断和治疗提供一定依据。     

一株猫疱疹病毒Ⅰ型的分离与鉴定

采集哈尔滨某猫舍中表现为上呼吸道感染的患病猫眼、鼻拭子，PCR初步确诊为猫杯状病毒(FCV)和猫疱疹病毒(FHV-1)混合感染。利用猫肾细胞(CRFK)对样本进行病毒分离，前两代细胞培养物的核酸检测结果为FHV-1和FCV阳性，第三代开始只有FCV阳性，由此分离出FCV。制备此株FCV的鼠源多克隆抗体，并中和混合培养物中的FCV,从而分离出FHV-1,命名为HRB2019株。通过病毒粒子形态观察、间接免疫荧光试验(IFA)和基因序列分析等方法鉴定HRB2019株，并研究其体外生长动力学。结果显示，HRB2019株可在CRFK细胞上产生典型病变，测得其第四代病毒滴度为1×10^8.43TCID₅₀·mL^-1;电镜下可观察到球形、有囊膜、直径约为200 nm的病毒粒子；IFA结果显示，分离株可与FHV-1阳性血清结合，出现特异性荧光；扩增分离株的gD基因，其与国内外流行株高度同源。病毒一步生长曲线表明，HRB2019株感染细胞12 h后开始复制增殖，12～36 h为快速增殖期，48～72 h进入增殖平台期且滴度达到高峰，84 ...     

猫瘟热病毒胶体金快速检测试纸的研究

利用双抗体夹心和胶体金免疫层析技术的原理,在玻璃纤维膜、硝酸纤维膜的检测线(T)和对照线(C)上分别喷上胶体金与猫瘟热病毒(FPV)单克隆抗体(3C4)的偶联物、FPV多克隆抗体和羊抗鼠IgG单克隆抗体,制成检测FPV抗原的猫瘟热病毒胶体金快速检测试纸,对临床26份虎粪便样本进行检测,并与PCR检测法及韩国(ASAN ...     

猫病毒性鼻气管炎PCR检测方法的建立与应用

猫病毒性鼻气管炎(FR)又称猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)可引起猫的上呼吸道感染,是一种猫的常见的急性、高度接触性上呼吸道疾病[1-2].病猫精神沉郁,打喷嚏,食欲下降,结膜炎,浆液性的眼鼻分泌物,体温升高,深部的气管咳嗽[3].慢性感染病例舌头和上颔出现溃疡.FHV-1只感染猫及猫科动物,主要侵害幼猫,发病率达100%[4],死亡率约为50%[5].若怀孕猫感染,可造成流产[6].     

山东地区猫细小病毒流行病学调查

猫细小病毒(Feline Panleukopenia Virus,FPV)主要感染肉食动物,在自然条件下可感染猫、小鼠、浣熊、猞猁、豹、虎和狮等多种动物,因其感染性强、致死率高、宿主谱广和危害性大等特点被人们所熟知。为了解山东地区FPV的流行情况,研究对山东省10家动物医院进行调查分析。在978个猫瘟疑似病例中,FPV阳性率为38.55%;在FPV阳性病例中,2～6月龄的幼猫最为多发,阳性率为59.48%,2岁龄及其以上的成年猫阳性率较低;按照正规免疫程序免疫的猫相对于未免疫的猫阳性率大大降低;FPV的阳性率与性别无关。当前临床上FPV感染的病例治疗难度大,目前疫苗免疫是防控FPV流行的主要手段。     

猫病毒性鼻支气管炎的防治

猫病毒性鼻支气管炎又称猫鼻支。是由猫疱疹病毒1型(FHV-1)引起猫科动物呼吸道和眼部疾病症状的病毒性传染病,其传播广、潜伏感染的特点使其成为宠物诊疗难点。我国对FHV-1的研究相对较少,预防手段主要也是依靠进口疫苗。本文结合近年来猫鼻支研究进展,着重总结和汇总了猫鼻支的发病机制和诊疗方法,为兽医临床工作和研究提供参考。     

猫泛白细胞减少症病毒的分离与鉴定

猫瘟热病毒又称猫泛白细胞减少症病毒（FPV）,是引起猫及猫科动物的一种急性高度接触性传染病。我们在2005年12月收集到1例疑似猫泛白细胞减少症的急性期粪便,用FPV抗原金标记试纸条检测为强阳性,该粪便经处理后接种到FK81单层细胞上成功地分离到一株病毒,经鉴定为FPV,命名为BJ—JB-8。报告如下。     

虎源猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的原核表达及其抗原特性

利用PCR技术从虎源猫泛白细胞减少症病毒(FPV)HLJ株细胞培养物中扩增VP2基因,测序后插入原核表达载体pGEX-6p-1构建pGEX-6p-VP2重组质粒,转化BL21(DE3)中进行诱导表达。表达蛋白经切胶法纯化,所得产物用Western blot法检测其抗原活性。以纯化的重组VP2蛋白作为抗原,通过建立检测家猫FPV自然感染抗体的间接ELISA方法来研究该蛋白作为猫科动物猫泛白细胞减少症通用诊断抗原的特性。测序结果显示:该基因全长1755bp,编码584个氨基酸。SDS-PAGE和Western blot显示表达产物以包涵体形式存在,大小约为84000(其中目的蛋白58000,GST标签26000),并具有抗原性。间接ELISA抗体检测法的应用结果显示表达的重组VP2蛋白可以作为诊断抗原用于家猫FPV自然感染抗体的间接ELISA检测。并初步证明该蛋白具有作为猫科动物猫泛白细胞减少症通用诊断抗原的特性。     

猫疱疹病毒1型RPA-Cas12a-LFD检测方法的建立及初步应用

猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1，FHV-1) 为水痘病毒属的双链DNA包膜病毒，是引起猫上呼吸道感染的主要病原之一。本研究以重组聚合酶扩增(RPA)、Cas12a反式酶切反应和侧流层析试纸条(LFD)显示技术为基础，旨在建立靶向FHV-1 TK基因的RPA-Cas12a-LFD快速可视化检测方法。根据FHV-1 TK基因的保守片段序列设计RPA引物和合成crRNA的引物，并通过反应体系验证、RPA-Cas12a-LFD检测灵敏度和特异性分析，以及临床样本的符合检测，评价FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法的有效性。结果显示，建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD方法可以特异性地检出FHV-1(与其他猫相关病原无交叉反应)，灵敏度极高(最低检测限为2.35×10^-1 copies·μL^-1)，检测时间短，结果可视化。该方法对20份表现明显症状的患猫呼吸道样本的FHV-1检出率(35%，7/20)高于现有的TB Green qPCR方法(25%，5/20)，对其中5份阳性样本的检测符合率为100%。综上表明，成功建立的FHV-1 RPA-Cas12a-LFD检测方法的特异性好和敏感性极高，不需要特殊的检测设备，可以作为FHV-1现场快速检测的有效工具。