间接夹心ELISA检测新城疫病毒抗原

以ＳＰＦ鸡抗新城疫病毒ＩｇＧ为包被抗体，兔抗ＮＤＶ ｖｅｒｏ细胞培养纯化毒ＩｇＧ为第二抗体，酶标记羊抗兔ＩｇＧ为指示抗体，建立了检测ＮＤＶ的间接夹心ＥＬＩＳＡ，并分别以兔抗ＮＤＶ鸡胚毒纯化ＨＮ糖蛋白，Ｆ糖蛋白ＩｇＧ为第二抗体进行了比较试验，并对攻毒鸡外分泌物样品进行了病原检测。     

免疫荧光法快速监测SPF鸡群的新城疫病毒抗体

血凝抑制试验(HI)仍是目前国内最常用的检查鸡新城疫病毒(NDV)抗体的血清学方法。HI试验具有简单,快速等优点。当血清1:10以上稀释时,一般不发生非特异性抑制。HI的缺点在于检查低水平抗体时不够灵敏,感染NDV的不同毒株后产生的     

鸭新城疫病毒单克隆抗体的制备及双抗体夹心ELISA方法的初步建立

为了对目前流行的鸭新城疫进行快速诊断,应用蔗糖密度梯度离心纯化后的鸭新城疫病毒免疫6周龄雌性Balb/c小鼠,取免疫后小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合.采用ELISA方法筛选阳性细胞克隆,经3次亚克隆后获得一株能稳定分泌鸭新城疫病毒特异性单克隆抗体的细胞株2C1.以PEG纯化后的2C1腹水为捕获抗体,辛酸-硫酸铵纯化的兔抗鸭新城疫病毒多克隆抗体为第二抗体,HRP标记的羊抗兔抗体作为酶标抗体,建立了检测鸭新城疫病毒抗原的双抗体夹心ELISA方法.结果表明,当2C1包被量为4μg/孔,鸭新城疫病毒1:10稀释,兔抗鸭新城疫病毒多抗作用量为0.1 μg/孔,HRP标记的羊抗兔二抗1:10 000倍稀释,每次作用时间为1h时,P/N比值最高,且阳性OD值最接近1.0.试验表明,该方法特异性好,不与IBV、ARV、GPV、DPV、DHV尿囊液及H5、H9标准阳性抗原发生反应;可以检测出0.2 μg纯化病毒,比传统的HA试验的敏感性至少高64倍;批间和批内变异系数均小于10％.本研究建立的双抗体夹心ELISA方法为鸭新城疫病毒的快速诊断奠定了基础.     

ELISA检测鸡新城疫病毒特异性IgM抗体的研究

以新城疫病毒单克隆抗体包被板,用10％小牛血清-PBS封闭后,捕获尿囊液中的新城疫病毒作固相抗原.在此板上应用酶标抗鸡IgM单克隆抗体进行间接ELISA试验检侧鸡血清中新城疫病毒的特异性IgM抗体.试验证明该方法特异性强、敏惑性高.兔抗新城疫病毒阳性血清可特异性阻断反应,将新城疫病IgM阳性血清用2-ME处理可使ELISA反应呈阴性,与禽源多杀性巴氏杆菌鸡IgM阳性血清、鸡传染性支气管炎病毒IgM阳性血清无交叉反应.该试验可检测到La Sota免疫后3天鸡血清中的特异性IgM,对鸡新城疫病毒IgM阳性血清的检测效价可达1:320以上,并可检测到临床新城疫病鸡血清中的特异性IgM抗体.     

间接ELISA和HI方法检测鸡新城疫病毒抗体的相关性分析

分别采用商品化的酶联免疫吸附试验（ELISA）抗体检测试剂盒和血凝抑制（HI）试验方法对152份临床血清样本和标准阴阳性血清进行新城疫病毒（NDV）抗体检测。比较间接ELISA和HI两种方法的相关性。研究结果表明，间接ELISA和HI两种方法呈显著相关，二者间的相关系数为0．9261：间接ELISA和HI两种方法检测NDV抗体的阳性符合率为96．8％，阴性符合率为92．9％，间接ELISA方法是一种敏感、特异、快速的血清学诊断方法，可以用于临床样本的大规模检测．     

应用ELISA双抗体夹心法检测＼猪细小病毒抗原的研究

研究建立了从胎猪脏器中检测猪细小病毒（ＰＰＶ）抗原的ＥＬＩＳＡ双抗体夹心法。试验方法的最侍工作条件为，抗体浓度１：４００，酶标抗体浓度１：５０。５４份胎猪样品阳性检出率为５９．３％，不同脏器的阳性检 出率分别为，心３６．４％、肝脏７２．２％、肺脏６６．７％、肾脏６６．７％。     

间接法DOT—ELISA检测新城疫病毒的研究

本文首次成功地建立了间接法Dot-ELISA检测新城疫病毒,对新城疫发病鸡群口咽、泄殖腔拭子的NDV抗原阳性检出率分别为58.33％(91/156)、62.50％(90/144),两者没有显著差异(P>0.05),结果表明,间接法Dot-ELISA对新城疫的早期诊断具有简单、快速、经济、敏感性高、特异性强和重复性好等优点,是疫病早期诊断与流行病学调查的有效手段。     

间接免疫荧光法测定新城疫病毒滴度的研究

为快速确定新城疫病毒含量,以鸡抗新城疫病毒多克隆抗体为一抗、FITC标记的兔抗鸡IgG为二抗,通过对反应条件优化,建立了检测新城疫病毒含量的间接免疫荧光法(IFA).结果 显示:IFA最佳时间是病毒感染后4d,一抗最佳稀释度为1:100,二抗最佳稀释度为1:200.利用该方法对新城疫病毒不同毒力毒株进行滴度测定,并与常...     

应用ELISA双抗体夹心法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

本试验建立了检测鸡病毒性关节炎病毒的ELISA双抗体夹心法.取代反应、阻断试验均为阴性,与NDV、MDV和IBDV无交叉反应,对已知阳性标本的检测均为阳性;其敏感性比琼扩试验高80倍以上,这表明ELISA夹心法具有较高的特异性和敏感性.在人工感染后2～27d,关节滑膜、腱鞘和脾脏中病毒检出率为100％;还从肝脏、法氏囊和脑组织中检测到病毒.     

新城疫病毒抗体ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种快速的新城疫病毒抗体检测方法,本研究以原核表达的重组HN蛋白作为诊断抗原,建立了检测新城疫病毒抗体的间接ELISA诊断方法.该方法检测AIV(H9亚型)、IBV、IBDV、EDSV 4种常见禽病病原的阳性血清均为阴性;检测灵敏度为1:12 800;批内重复性试验、批间重复性试验的变异系数分别小于5％和10％;与血凝抑制试验(HI)符合率为96.1％.本研究建立的NDV HN间接ELISA检测方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,为NDV的抗体检测及流行病学调查等快速诊断提供一种技术手段.     

双抗体夹心ELISA检测伪狂犬病病毒的研究

建立了检测伪狂犬病病毒（ＰＲＶ）抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ,试验方法的最佳工作条件为：抗体包被量为５μｇ／孔,酶标抗体的浓度为１：２００。对人工感染兔和自然感染猪的组织脏器检测,结果发现扁桃体,脑和肺的检出率最高,其次为心,肝,脾,肾等组织。     

Dot—ELISA间接法检测鸡新城疫病毒（NDV）的研究

常规方法分离纯化鸡ＩｇＧ,免疫羊制备羊抗鸡ＩｇＧ二抗,以辣根过氧化物酶（ＨＲＰ）标记制备酶标记物的工作浓度为１：１０００;选用硝酸纤维素（ＮＣ）膜作固相载体,建立检测ＮＤＶ抗原的斑点间接酶联免疫吸附试验诊断方法。检测ＮＤＶ鸡胚毒４０份,阳性检出率１００％;人工感染非免疫鸡的气管组织、肺组织各４７份,检出率为９３．６％;人工感染ＳＰＦ鸡气管组织、肺组织各４０份,检出率１００％。与传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、减蛋综合症病毒（ＥＤＳＶ）、传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）无交叉反应。试验显示该方法简便、特异、快速、结果直观,便于生产应用     

HI和ELISA检测新城疫病毒抗体的相关性

由于新城疫(ND)继续威胁着家禽业而要求应用常规的检测方法以确定家禽的免疫状态。鉴于血凝抑制试验(HI)作为一种标准方法已有几十年,因此正逐渐地被酶联免疫吸附试验(ELISA)所代替。虽然ELISA检测ND既敏感又特异,但还需要与我们所熟悉的HI试验的结果作比较。尤其是我们必须了解至少在进行中的ELISA与HI有好的相关性。送到萨格勒布大学的家禽中心的血清样品用HI和     

ELISA双抗体夹心法检测幼犬轮状病毒的研究

应用ELISA双抗体夹心法对幼犬轮状病毒感染情况进行调查,结果表明兰州地区幼犬轮状病毒感染阳性率为57.1%,其中2～4月龄的幼犬占阳性病例的75.0%,而2月龄以内及大于4月龄的犬感染轮状病毒的病例较少。